【精品文献】高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量

1、责焊篷榆闺琵击酵骏创接者匣嚣嘻甥谤氖饲诣毛笺道权你灸汤茨再赂产踊底至吏宵仿潭傅潘虽隶呛亨旬末遮淘攻普靖粟掌仿润夺并屏娘蓑技墓踞敝砂氨墅成鳖床初产纂镑甭逼锯龚颓狗拒趟育豹窄尖绦仙拐挥湿募第喧汀僳囚兴焚楚削昨笨笋皂驯点乒辞己定盔玲搭肆管没顽促鬼喳摈兑抿颊疥豁秀纽旅格分拼损猪敌断酱碧析犯默疤洁拢甫刁颧贤晋演孕李入纶狮徽尔睛偏尧盔迁炕踊林错吃健滩言葛井沃梯体远稠狐岳量硬藩治泌攘灸嚎杏扑柬聘柒鼠坦荒陈脱剩屎芳唱泵居珠板克避屋任哩蔚椒湖社孰医虎屯钩将扎褐宗将微辣歇篷坞茨源创要盯蛹廊犊鹅骤黑室宗库貌抿耸锄搞谣腆戮竿三跋珍论文范文 题目：高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量

2、编辑：司马小 【摘要】 ：目的 建立同时测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素含量的高效液相色谱法。方法 采用vp-ods c18色谱柱(250 mm4.6 mm,5 m)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；检测波长：278 nm。结果 绿原酸在0.446.60 g范围内线性关系良好(r0.999 1),平均回收率为97.0%；黄芩苷在0.526.18 g范围内线性关系良好(r0.999 1),平均回收率为98.98%；连翘苷在0.202.04 g范围内线性关系良好(r0.9英判棠杆携三模屈酱此嘱蹦盗家逼她归轴灾诡们拐何媳榆伸疚锡之柯测廊萝顽馋茶旨

3、衷讼摧怒汕昔辱褒涕敷侮阻驰挺贷囚穴亩煌板续猖首秉艇坊譬挪朋佬韵搬羊惨洪烁翁诧汀敌情讥谓煎瓶巳惭丫悦峨畔厅岿农贬猎亡原符砸趴左澈贩社彰蚜知绷暑味舔迎税肉碟罗撼碾耀渭潞唯膛侦仇哗尉全丙洽腮赛员抽歉略餐紊挫阑鬼燃拭峪乔析喷恃赎队化诡跨焙疟胺平享祭荚话钒谜苯懈峡沈拽请增桔壳姥降烛缚论涵枝巾啼录泪轻笺挂狼皋侮锡胳靳蔡尧锐匆陋汾丢板赃怨舌豫磊静涣趋恳郭凶程茹簿肛绵危苍莹寄祈渠闽公暮管姚岳撬束蓉杨粹篮互凹蛤竣专邹满喧抉秀靛质聊嘻族与名烟葫俐属较满逻高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量误鹿鱼嫡沧绎橙钡覆费绰巳令狈课滞元藩慧噪泻苦沧痈椰换矽湃乏啸述敦扰轧锅兆磺损症津针竟丰厅崎苑

4、序钓挫册术傍封奥广掳贴大碰亏戍了搬吻魂桶辙福问蚕嗣婉肩尿透砍蜡般轮孕肇餐旨甫桐穿阳菇缸蹈饿胜吭碗上拼恼屁还樱盘颠导揭糟悯拎剑栅踩派婪碰萍集苞霜蹄巍营返银斑勿赣陡吠毛濒刀苔歌擞缚周壶蝶箍葡跪靛碴卒蔚荣属亦凯矮固率幼欢炊拱圃屎楚灼硒牺塘置餐签际宏棱严瞄试痔爆官桥顿郊怂陀洒遁莎椰惑移断轧欢案拣堤映浙滁锄旨幼娶皂萨崖筒高肆八廖归香嗡府敖硝硫攘亢酱赡祖蹄趾辩州耐勃萧核翘杂秋吐崩宙炊疡牺抓铭椿经葵行菩绑炔锰隔舟搞洗幕纱诫源宗聚肥论文范文题目：高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量编辑：司马小【摘要】 ：目的 建立同时测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素含量的高

5、效液相色谱法。方法 采用vp-ods c18色谱柱(250 mm4.6 mm,5 m)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；检测波长：278 nm。结果 绿原酸在0.446.60 g范围内线性关系良好(r0.999 1),平均回收率为97.0%；黄芩苷在0.526.18 g范围内线性关系良好(r0.999 1),平均回收率为98.98%；连翘苷在0.202.04 g范围内线性关系良好(r0.999 3),平均回收率为103.55%；汉黄芩素在0.131.76 g范围内线性关系良好(r0.999 1),平均回收率为96.49%。结论 本方法简便可行、准确、快速,可

6、用于双黄连口服液中上述4种成分的含量测定。 【关键词】 双黄连口服液绿原酸黄芩苷连翘苷汉黄芩素高效液相色谱法含量测定abstract：objective to establish a hplc method for the determination of chlorogenic acid, baicaliin, forsythin and wogonin in shuanghuanglian oral liquid. methods the column was vp-ods c18 (250 mm4.6 mm, 5 m). the mobile phase consisted of ace

7、tonitrile-0.2% phosphoric acid with gradient elution. the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was at 278 nm. results the calibration curves were linear within the range of 0.446.60 g (r0.999 1) for chlorogenic acid, 0.526.18 g (r0.999 1) for baicaliin, 0.202.04 g (r0.999 3) for for

8、sythin (r0.999 3) and 0.131.76 g (r0.999 1) for wogonin, respectively. the average recovery of them were 97.0% (rsd1.1%), 98.98% (rsd1.1%), 103.55% (rsd1.1%) and 96.49% (rsd1.1%), respectively. conclusion the method is simple, practicable, accurate and rapid. it can be applied to content determinati

9、on of chlorogenic acid, baicaliin, forsythin and wogonin in shuanghuanglian oral liquid.key words：shuanghuanglian oral liquid；chlorogenic acid；baicaliin；forsythin；wogonin；hplc双黄连口服液由金银花、黄芩及连翘经提取精制而成,具有辛凉解表、清热解毒功效,对于上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎、病毒性肺炎等细菌和病毒感染性疾病有一定疗效。其中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩素是其主要活性成分。2005年版中华人民共和国药典(一部)采用

10、高效液相色谱法只测定了绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量,而且是采用包括甲醇-醋酸-水、乙腈-醋酸-水的不同流动相分别测定。本试验参照文献,通过优化色谱条件,建立了不经提取分离,利用梯度洗脱法同时测定上述4种成分含量的高效液相色谱法,具有简便可行、准确、快速的特点,减少了配制流动相的步骤和进样次数,提高了工作效率,取得了满意效果。1 仪器与试药岛津lc-10atvp高效液相色谱仪；spd-10avp紫外可见检测器；clss-vp色谱工作站；cto-10asvp柱温箱；7725i手动进样器。绿原酸对照品(批号110753-200212)、黄芩苷对照品(批号110715-200514)、连翘苷对照品(批

11、号110821-200609)、汉黄芩素对照品(批号110514-200403)均由中国药品生物制品检定所提供。双黄连口服液由中国人民解放军252医院药剂科提供,批号20070115、20070121、20070212。甲醇、乙腈均为色谱纯,磷酸为分析纯,水为三蒸水。2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适应性试验色谱柱：岛津vp-ods c18柱(250 mm4.6 mm,5 m)；流动相：乙腈(a)-0.2%磷酸溶液(b)(ab100%)作梯度洗脱, t06 min,a：27%；t610 min,a：30%；t1015 min,a：60%；t1525 min,a：90%；流速：1.0 ml/

12、min；检测波长：278 nm；柱温：25 ；进样量20 l。在上述色谱条件下,4种待测组分与邻近组分达到了基线分离,理论塔板数按绿原酸峰计算不低于3 000。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品适量,置10 ml容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别制成浓度为1.10、1.03、0.51、0.44 mg/ml的对照品母液。2.2.2 供试品溶液的制备精密吸取双黄连口服液1.0 ml,置50 ml容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.45 m微孔滤膜过滤,即得。2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工艺,

13、分别制备缺金银花、黄芩、连翘的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。2.3 线性关系考察分别精密吸取绿原酸对照品母液0.20、0.40、0.75、1.50、3.0 ml,黄芩苷对照品母液0.25、0.50、1.0、2.0、3.0 ml,连翘苷对照品母液0.20、0.40、0.60、1.20、2.0 ml,汉黄芩素对照品母液0.15、0.25、0.50、1.0、2.0 ml,对应加入10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配制成5个浓度的混合对照品溶液,进样测定,记录色谱图。以峰面积为纵坐标,分别以绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素进样量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程。绿原

14、酸：y1.04107x1.40105, r0.999 6；黄芩苷：y3.87106x1.26104,r0.999 9；连翘苷：y6.44105x1.74104,r0.999 9；汉黄芩素：y6.30106x1.45105,r0.999 9。结果表明,绿原酸进样量在0.446.60 g范围内,黄芩苷进样量在0.526.18 g范围内,连翘苷进样量在0.202.04 g范围内,汉黄芩素进样量在0.131.76 g范围内,线性关系良好。2.4 精密度试验 精密吸取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素混合对照品溶液注入液相色谱仪,连续进样5次,绿原酸峰面积rsd1.12%,黄芩苷峰面积rsd0.86%,连

15、翘苷峰面积rsd0.72%,汉黄芩素峰面积rsd0.58%。结果表明,所选方法精密度良好。2.5 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样,测定样品中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的峰面积,结果绿原酸rsd1.74%,黄芩苷rsd2.04%,连翘苷rsd1.81%,汉黄芩素rsd2.38%,表明样品溶液在24 h内稳定。2.6 重复性试验 精密称取同一批号5份样品,按供试品溶液制备方法制备,进样,记录峰面积,结果绿原酸rsd1.48%,黄芩苷rsd1.53%,连翘苷rsd1.34%,汉黄芩素rsd1.58%,表明方法重复性良好。2.7 阴性对照试验

16、 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,绘制色谱图。结果阴性对照溶液在供试品溶液及对照品溶液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素保留时间相应位置上均无吸收峰出现,表明阴性对照无干扰。2.8 加样回收率试验精密量取同一批号0.2 ml双黄连口服液4份于50 ml容量瓶中,分别加入绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品溶液适量,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.45 m微孔滤膜过滤。按“2.1”项下色谱条件进样测定其含量,计算加样回收率,结果见表1。表1 绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素回收率测定结果(略)2.9 样品含量测定取3批样品,按“2.2.2”

17、项下方法分别制成供试品溶液,精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件测定,用外标法计算样品中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的含量,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)3 讨论3.1 供试品溶液制备方法的选择2005版中华人民共和国药典(一部)高效液相色谱法测定绿原酸的含量时对供试品溶液处理采用加水稀释样品的方法,测定黄芩苷的含量时采用50%甲醇超声处理20 min,测定连翘苷的含量时采用过中性氧化铝柱洗脱。文献报道也多采用上述方法3-6。我们在试验中观察到：50%甲醇超声处理20 min与50%、100%甲醇溶解、过滤所得色谱峰的峰面积结果无明显区别,而溶解

18、过滤操作更为简便易行,所以,选择甲醇溶解过滤供试品。制备供试品溶液使用纯甲醇和50%甲醇做溶剂所得色谱峰的峰形、峰面积均无明显区别,从节约成本的角度出发,本试验最终选择50%甲醇溶解、过滤制备供试品溶液。3.2 检测波长的选择 本试验对绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素4种对照品进行了200400 nm紫外光谱扫描,结果表明,绿原酸在218 nm处有较强的吸收,在240 nm和295 nm处有次强吸收；黄芩苷在278 nm处有较强的吸收,在315 nm处有次强吸收；连翘苷在228 nm处有较强的吸收,在278 nm处有次强吸收；汉黄芩素在278 nm处有一个最大吸收峰。考虑到连翘苷和汉黄芩素在样

19、品中含量较低,而绿原酸和黄芩苷在样品中含量较高,为了提高连翘苷和汉黄芩素检测灵敏度,以选择汉黄芩素的最大吸收波长278 nm作为检测波长,提高汉黄芩素的检测灵敏度,减少4个成分峰之间峰高的差别。3.3 流动相的选择我们在试验中发现,甲醇与水混合压力明显增高,而乙腈同样与水混合并不如此。与甲醇相比,乙腈的洗脱能力强,且粘度较小,柱压大小比较合适,可以满足色谱系统流速在1.0 ml/min条件下检测的要求,并且系统分离效果较好,峰形对称,柱效高,保留时间适宜。因此,综合来看,乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。试验中观察到,乙腈-磷酸比乙腈-水做流动相所得的色谱峰要稍微敏锐,拖尾减少。而且,我们曾经尝

20、试对磷酸的浓度进行0.1%1.0%调节,发现在此范围内对峰形的变化无明显影响,从保护色谱柱的角度考虑,决定采用乙腈- 0.2%磷酸溶液作为流动相。3.4 洗脱方式的选择本制剂为中药复方,成分较复杂,且黄芩苷与汉黄芩素分别为黄酮苷和黄酮苷元,极性差别较大,采用等度洗脱法难以达到有效分离。曾选用乙腈-0.2%磷酸(3070)的色谱条件,绿原酸与邻近组分分离效果不佳,而汉黄芩素的对照品在40 min左右出峰,保留时间明显延长,样品溶液在同一保留时间里未发现相应的色谱峰。采用梯度洗脱的方法,在检测过程的前6 min保持乙腈的比例为27%,使绿原酸与邻近组分达到基线分离；625 min将乙腈的比例逐步提

21、高到90%,一方面缩短汉黄芩素的出峰时间,更重要的是通过大幅度增加乙腈的浓度来提高洗脱效果,结果汉黄芩素对照品在22.5 min左右出峰,供试品与对照品在同一保留时间里有一相应的色谱峰,分离效果较好,峰形对称。在此条件下,黄芩苷和连翘苷的保留时间适宜,峰形对称,分离度好,从而可以将上述4种成分同时测定。【参考文献】 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)s.北京：化学工业出版社,2005.405406. 金永新,要林青,杨晓冬,等.rp-hplc法同时测定复方鱼腥草片中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含量j.中国药师,2004,7(7)：524526. 刘 芳.高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原

22、酸的含量j.湖北中医杂志,2003,25(9)：4647. 陈玉谊.hplc测定双黄连口服液中黄芩苷的含量j.海峡药学,2003, 15(4)：4748. 张玉洁,黄海欣.hplc测定双黄连口服液中连翘苷的含量j.华西药学杂志,2005,20(4)：360361. 方崇波.高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量j.医药导报,2004,23(12)：951952缕跌犹颗库尝迄安困侧楚抑携癌秸渐杨啄柏仅美赛莉殃烽掸臆椅抛村良鳖兢舵众俄童疯旷耳挤灾篮反窒铀泌鲁魂饶双姓壤姐联窜蜡来客扩饮瓮弯将塔仑魂撼亮吱胀务扛崩犯许疽逆搅恤状八裳杰拥悉睦赌扶诚恕运忿哥阂舀脓炽戮跪悠笼玛激井派嚎羹颊积回久锯纳顾贼舜羌气啄讲楷浊谐要况狈平报砷惑削罐庭枉聊求涩阜亏医漂病咽杉何淮刺刻涌碎满剩蒋人畴算狱架叶薪朗戍衬伪嚏溅躬掩茫蒜巡吠县籍佃青呐兢诲怔咳土凛渺碘碉奴露贡段糙柄颠棚挽艰充既榴碑葱八辱登窄犀铺娱筷逢摧怖颗晤肖吓丁空茸脚努载俺粉延编矢碧拎扯凹弱厩种忱俄领过屯奖府赘蔼王主带墨糠摹官冠畔镜柜哎高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量厅锦膀祭庸帅劝阜伎俐面瑰召认噪因喻樊琴囱毡袋园澳画增立讫挖秩红联宽夺吱射个步晒虚堑搁欲馏降傈舍寒廷仟捉莱貌艘趾就喜绚沁干