紫外光度法测定维生素C实验报告

1、紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量一、实验目的1. 学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法;2. 熟练紫外-可见分光光度计的操作。二、实验原理维生素C （VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖酯立体结构，分D 和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性，在一 定条件下氧化型和还原型可以互变，两者均具有生物活性（结构式见图1）,其C2 和C3位上两个相邻的烯醇式轻基极易解离而释放出H；故维生素C虽然不含自由 竣基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体，易溶于水，不溶 于脂。在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是有氧化酶及痕 量

2、铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。图1维生素C结构式具有H电子的共馳双键化合物、芳香姪化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸 收，其摩尔吸收系数k可达101（）6数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析， 要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5 6之间稳定）中，在245 nm波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法 测定维生素C片含量的方法O三、实验仪器及试剂实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105 C干燥至恒重

3、（含量为99.7%）.维生素C片（2片）、去离子 水四、实验步骤1. 0. 005 mol1/硫酸溶液的配制用0.5 ml移液管移取0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馆水的烧杯中， 搅拌，冷却至室温后移入1000 ml容量瓶，稀释至刻度，待用。2. 0.5 g对照品溶液的配制精密称取105工干燥至恒重的维生素C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加 0. 005 mol 硫酸溶液制成0.5 gI?对照品溶液。3. 维生素C对照品标准溶液的配制用5 ml移液管精密量取0. 5g1?对照品溶液0.5、1.0、1.5、2. 0、2.5 ml, 分别置100 ml量瓶中，用0. 005 m

4、olI?硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。4. 测定波长及标准曲线以0. 005 mol 硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中最大吸收 波长，并在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作 线性回归。5. 样品含量测定取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量(0.06g,约相当于维生 素C 50 mg)置100 ml容量瓶中，加0. 005 mol 硫酸溶液适量，超声5 min使 溶解，再加0. 005 mol 硫酸溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量 取续滤液2.0 ml置100 ml量瓶中，加0. 005 mol 硫酸溶液至刻度，摇匀，在 最大吸收波长处测

5、定吸光度。6. 空白试验模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100ml量瓶中，与步骤5样品 含量测定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。7. 回收率试验先测得2 ml样品溶液的吸光度儿(C.),再取0.0125 g/L的VC标液200 ul, 于2 ml已测得吸光度儿的样品溶液中，再测得吸光度A? (C2) o五、实验数据记录及处理1. 维生素的吸收波长在紫外可见分光光度计上扫描测定VC标准样品的吸收光谱，结果显示VC 在244nm波长处的吸光度值最大。2. 维生素C对照品标准曲线标准VC浓度（g/L）0. 00250. 00500. 00750.01000.0125Abs0.12

6、640. 26630. 40790. 54620. 6905y = 5& 3240 x - 0.0150 R=l. 00003样品中维生素C含量測定样品中VC含量（%）=Cw八（）x（）xioo%样品mic/g0. 06000. 06000. 0580Abs0. 54820. 54260. 5257样品VC浓度(g/L)0.01000. 00990. 0096样品中VC含虽(%)83. 3382. 5082. 76平均值(%)82. 86RSD (%)0.51474.回收率试验先测得2 ml样品溶液的吸光度A/C.),再取0.0125 g/L的VC标液200 pl, 于2 ml已测得吸光度A】

7、的样品溶液中，再测得吸光度仏(CJ。回收率(%) =X100%总测定值(C?)-本法测定值(C】)加入量(C)123Ai0. 54820. 54260. 5257Ci0.01000. 00990. 0096加入 V (0.0125 g/L) /mL0. 20000. 20000. 2000A.0. 60930. 60160. 5912G0.01110.01090.0108回收率()95.4292.21102.32平均回收率(%)96. 65RSD (%)5. 17六、实验结果及讨论1. 维生素C还原性很强，在空气中易被氧化，在酸性介质中氧化作用减慢，水 溶液在pH = 56之间稳定，故本实验选用0.005 mol1/硫酸溶液(pH = 5. 2) 为溶剂，维生素C稳定性好。2. 标准曲线R=1.0000,且测定的未知样品的吸光度均落在标准曲线有效的围， 实验结果表明，维生素C在0. 0025-0.0125 g/L围与吸光度呈良好的线性关系。3. 由于对加标回收率的原理及概念模糊，导致实验在这一环节消耗较多的时