临床生化干扰实验批准指南

1、1 临床生化干扰实验批准指南临床生化干扰实验批准指南 (ep7-a)(ep7-a) 广东省中医院检验科广东省中医院检验科 徐建华徐建华 2 目目 的的 为临床生化检验结果中研究、为临床生化检验结果中研究、 鉴别和确定干扰物质效应提供背景鉴别和确定干扰物质效应提供背景 信息、指导和实验程序信息、指导和实验程序 专门为专门为厂商厂商和和临床实验室临床实验室制订制订 3 作作 用用 对对厂商厂商来说，通过来说，通过ep7ep7程序可以筛选潜在干扰程序可以筛选潜在干扰 物质，量化干扰效应，证实病人样本中的干扰，物质，量化干扰效应，证实病人样本中的干扰， 确认分析方法对干扰物质的敏感性，评估确认分析方法

2、对干扰物质的敏感性，评估 潜在的风险，并将有意义的干扰声明提供潜在的风险，并将有意义的干扰声明提供 给用户。给用户。 对于对于临床实验室临床实验室来说，来说，通过通过ep7ep7的调查策略，的调查策略， 规定数据收集和分析要求，规定数据收集和分析要求，确认干扰声明，研究确认干扰声明，研究 明确的干扰物质带来的结果差异，确保分析方法明确的干扰物质带来的结果差异，确保分析方法 符合临床要求符合临床要求 。 4 主要内容主要内容 n干扰相关概念与理论干扰相关概念与理论 n适用范围适用范围 n干扰实验的判断标准干扰实验的判断标准 n干扰分析前的质量保证干扰分析前的质量保证 n干扰测定干扰测定 n用病人

3、标本评价干扰用病人标本评价干扰 n建立、确认和验证干扰声明建立、确认和验证干扰声明 n调查分析与临床不一致的病人结果调查分析与临床不一致的病人结果 5 术术 语语 分析物分析物(analyte(analyte) )：实验室测试的物质或者成分：实验室测试的物质或者成分 干扰物（干扰物（interferentinterferent) )：样本中不同于分析物并能：样本中不同于分析物并能 引起测量偏倚的成分引起测量偏倚的成分 干扰：在临床生化中，由于另一成分影响或样本干扰：在临床生化中，由于另一成分影响或样本 的特性，待测一定浓度的被分析物出现有临床意的特性，待测一定浓度的被分析物出现有临床意 义的偏

4、倚义的偏倚 干扰标准：干扰物所允许的最大结果偏倚干扰标准：干扰物所允许的最大结果偏倚 干扰敏感度：某一分析方法对来自其他成分或者干扰敏感度：某一分析方法对来自其他成分或者 样本特性的干扰引起误差的敏感性样本特性的干扰引起误差的敏感性 6 术术 语语 干扰声明：一种物质影响分析方法结果效应的陈干扰声明：一种物质影响分析方法结果效应的陈 述述 干扰筛选：分析系统评价中，利用高浓度样品进干扰筛选：分析系统评价中，利用高浓度样品进 行一系列能鉴别有可能发生干扰的物质行一系列能鉴别有可能发生干扰的物质 差异结果差异结果/ /异常结果异常结果/ /假性结果（假性结果（discrepant discrepa

5、nt result/anomalous results/spurious results)result/anomalous results/spurious results)：一：一 种与临床不一致的结果，或同一标本的另一个不种与临床不一致的结果，或同一标本的另一个不 同结果，或与其他方法不同结果，或与已确定的同结果，或与其他方法不同结果，或与已确定的 临床诊断不相符的结果临床诊断不相符的结果 7 术术 语语 内源性干扰：样本中的一些生理物质（例内源性干扰：样本中的一些生理物质（例 如胆红素、血红蛋白），可对另一些物质如胆红素、血红蛋白），可对另一些物质 分析时引起干扰。分析时引起干扰。 外源

6、性干扰：一种源自体外的物质（例如，外源性干扰：一种源自体外的物质（例如， 药物或其代谢物，防腐剂，污染物），可药物或其代谢物，防腐剂，污染物），可 对样本中另一物质的分析引起干扰。对样本中另一物质的分析引起干扰。 8 术术 语语 验证（验证（validationvalidation）：通过调查及提供客观证据，）：通过调查及提供客观证据， 证实可以满足某期望用途的特定要求。证实可以满足某期望用途的特定要求。 (usersrequirements have been met (usersrequirements have been met (e.g.,accuracy(e.g.,accuracy

7、requirements for patients results) requirements for patients results) 确认确认(verification)(verification)：通过调查及提供客观证据：通过调查及提供客观证据, ,确确 认满足了特定的要求。认满足了特定的要求。 (specified criteria have (specified criteria have been met (e.g., interference criteria or been met (e.g., interference criteria or interference cl

8、aims)interference claims) 9 适用范围适用范围 1. 1. 适用大部分析方法和仪器适用大部分析方法和仪器 ，特殊，特殊 方法可能需要必要的调整，如分离技方法可能需要必要的调整，如分离技 术和免疫学分析方法在附录术和免疫学分析方法在附录a a中被讨中被讨 论。论。 2. 2. 血清、血浆、全血、脑脊液、尿血清、血浆、全血、脑脊液、尿 和其它大多数体液等和其它大多数体液等标本类型标本类型都可用都可用 本指南评估本指南评估 10 3. 3. 适用以下干扰物质：适用以下干扰物质： n病理情况下的代谢物病理情况下的代谢物，如胆红素、脂肪、蛋白质、血红，如胆红素、脂肪、蛋白质、血

9、红 蛋白等蛋白等 ； n病人治疗期间引入的物质病人治疗期间引入的物质，如药物、肠外营养、血浆代，如药物、肠外营养、血浆代 用品、抗凝剂等；用品、抗凝剂等； n病人吸收的物质病人吸收的物质，如药品滥用、营养补充等；，如药品滥用、营养补充等； n标本准备引入的物质标本准备引入的物质，如抗凝剂、防腐剂等；，如抗凝剂、防腐剂等； n标本处理过程中引入的污染物标本处理过程中引入的污染物，如手霜、滑石粉、促凝，如手霜、滑石粉、促凝 剂等；剂等； n标本自身的基质效应标本自身的基质效应，其理化性质跟理想的新鲜标本不，其理化性质跟理想的新鲜标本不 同。同。 适用范围适用范围 11 1. 1. 干扰对不准确度的

10、影响干扰对不准确度的影响 不准确度（总分析误差）包括不精不准确度（总分析误差）包括不精 密度、方法特异性偏倚和样本特异性密度、方法特异性偏倚和样本特异性 偏倚（干扰），对干扰物质的敏感性偏倚（干扰），对干扰物质的敏感性 可以引起系统误差和随机误差。可以引起系统误差和随机误差。 基本概念基本概念 12 2. 2. 分析前效应分析前效应 分析前分析物或者它的浓度的改变通常称为分析前分析物或者它的浓度的改变通常称为 “分析前效应分析前效应”，这些作用可能会影响实验结果这些作用可能会影响实验结果 的临床应用，但不能视作的临床应用，但不能视作“分析干扰分析干扰”。这些作。这些作 用：用： n体内药物作用

11、体内药物作用 ， 如使用药物后因生理响应使激素如使用药物后因生理响应使激素 浓度变化浓度变化 n标本处理标本处理， 由于蒸发、溶血或者血清长时间不分由于蒸发、溶血或者血清长时间不分 离使电解质、蛋白、水含量改变离使电解质、蛋白、水含量改变 n标本收集，标本收集， 如在静脉滴注时（内含分析物）取样如在静脉滴注时（内含分析物）取样 基本概念基本概念 13 3.3.绝对干扰与相对干扰绝对干扰与相对干扰 干扰作用可看成是绝对的或相对的干扰作用可看成是绝对的或相对的 p 绝对干扰：一般病人标本中含有某物质，一绝对干扰：一般病人标本中含有某物质，一 旦它旦它 的存在即会引起干扰。的存在即会引起干扰。 p

12、相对干扰：一般病人标本中含有某物质，其含量相对干扰：一般病人标本中含有某物质，其含量 相对于混合样品中的相对于混合样品中的平均浓度平均浓度，不同病人样品中，不同病人样品中 含有该物质的浓度变化引起干扰作用的变化，相含有该物质的浓度变化引起干扰作用的变化，相 对干扰作用在临床实验中更有意义。对干扰作用在临床实验中更有意义。 基本概念基本概念 14 基本概念基本概念 相对干扰相对干扰 一些方法可以一些方法可以校正校正干扰物的平均浓度干扰物的平均浓度 做做补偿补偿，以使病人标本中的干扰效应减，以使病人标本中的干扰效应减 小到最低，有代表性的方法包括样品前小到最低，有代表性的方法包括样品前 处理、设置

13、空白对照、标准血清校准和处理、设置空白对照、标准血清校准和 数学校正，当干扰物的浓度大于或者小数学校正，当干扰物的浓度大于或者小 于病人样本中的平均浓度时将引起误差。于病人样本中的平均浓度时将引起误差。 15 基本概念基本概念 4. 4. 干扰机制干扰机制 由于某干扰物的存在以多种方式影响分析过程，主由于某干扰物的存在以多种方式影响分析过程，主 要机制：要机制： u物理作用物理作用 干扰物具有的物理性质，使它与分析物一样被检测干扰物具有的物理性质，使它与分析物一样被检测 出来，如颜色、光散射（光吸收）、洗脱位置、电出来，如颜色、光散射（光吸收）、洗脱位置、电 极响应等。极响应等。 干扰物可能会

14、改变标本的物理特性，如表面张力、干扰物可能会改变标本的物理特性，如表面张力、 黏度、浊度、离子强度等，干扰检测结果。黏度、浊度、离子强度等，干扰检测结果。 16 基本概念基本概念 4.4.干扰机制干扰机制 u化学作用化学作用 n干扰物可能会影响酶活力，例如，阻止金属激活干扰物可能会影响酶活力，例如，阻止金属激活 剂结合到活性中心上去，氧化必须的巯基等。剂结合到活性中心上去，氧化必须的巯基等。 n干扰物也可破坏或阻止反应，例如，破坏试剂或干扰物也可破坏或阻止反应，例如，破坏试剂或 抑止指示反应。抑止指示反应。 n干扰物也可改变分析物的形式，例如，形成复合干扰物也可改变分析物的形式，例如，形成复合

15、 物或沉淀。物或沉淀。 17 基本概念基本概念 4. 4. 干扰机制干扰机制 u非特异性非特异性 干扰物可能和分析物以同样的方式参与反干扰物可能和分析物以同样的方式参与反 应，例如，苦味酸肌酐方法中酮酸干扰，重氮应，例如，苦味酸肌酐方法中酮酸干扰，重氮 胆红素方法重吲哚酚硫酸盐的干扰。在免疫化胆红素方法重吲哚酚硫酸盐的干扰。在免疫化 学方法中干扰物和抗体发生交叉反应。例如，学方法中干扰物和抗体发生交叉反应。例如， 茶碱方法中咖啡因的干扰。茶碱方法中咖啡因的干扰。 18 基本概念基本概念 4. 4. 干扰机制干扰机制 u水取代作用水取代作用 非水物质（蛋白质、脂质），由于取代非水物质（蛋白质、脂

16、质），由于取代 了血浆中部分水体积，影响了一些分析物的了血浆中部分水体积，影响了一些分析物的 测定。这些作用考虑或不考虑为干扰作用，测定。这些作用考虑或不考虑为干扰作用， 取决于要求的结果是以总体积的浓度表示，取决于要求的结果是以总体积的浓度表示， 还是以血浆水的浓度来表示。还是以血浆水的浓度来表示。 19 干扰实验的判断标准干扰实验的判断标准 n为保证客观性，可接受标准必须在评价实为保证客观性，可接受标准必须在评价实 验验操作之前操作之前就确定。就确定。 n建立可接受标准时，必须考虑建立可接受标准时，必须考虑临床意义临床意义和和 统计学意义统计学意义两者之间的差别。两者之间的差别。 20 1

17、. 1. 临床可接受标准临床可接受标准 p基于生理变异基于生理变异 p源于临床经验源于临床经验 p基于被分析物变异基于被分析物变异 干扰实验的判断标准干扰实验的判断标准 21 2. 2. 统计学意义统计学意义 n在确定一个物质是否存在干扰前，首先确定所得在确定一个物质是否存在干扰前，首先确定所得 到的结果是否有统计学意义。到的结果是否有统计学意义。 3.3.分析物检测浓度分析物检测浓度 干扰应该在两种医学决定浓度被评估，如果在一干扰应该在两种医学决定浓度被评估，如果在一 种浓度上进行测试，要注意有可能漏过在其他分种浓度上进行测试，要注意有可能漏过在其他分 析物浓度水平上有临床意义的干扰。析物浓

18、度水平上有临床意义的干扰。 干扰实验的判断标准干扰实验的判断标准 22 干扰实验的判断标准干扰实验的判断标准 4.4.干扰物检测浓度干扰物检测浓度 决定一种物质在决定一种物质在“最坏情况最坏情况”的条件的条件 下是否会产生干扰，干扰筛选应该在实验下是否会产生干扰，干扰筛选应该在实验 室期望观察到的最高浓度水平的病人样本室期望观察到的最高浓度水平的病人样本 中进行。中进行。 5. 5. 潜在的干扰物质潜在的干扰物质 23 干扰分析前的质量保证干扰分析前的质量保证 在进行一个干扰实验之前，必须进行：在进行一个干扰实验之前，必须进行： n培训和熟悉培训和熟悉 n精密度确认精密度确认-ep5-ep5临

19、床生化设备性能的精密度评价临床生化设备性能的精密度评价 n准确度确认准确度确认 -ep9 -ep9 利用病人样本进行方法学比较和偏倚利用病人样本进行方法学比较和偏倚 评估评估 n携带污染评价携带污染评价 n质量控制质量控制-c24 -c24 内部质量控制实验：原理和定义内部质量控制实验：原理和定义 n标准化防范标准化防范m29 m29 实验室工作人员避免职业感染实验室工作人员避免职业感染 n安全性和废物处置安全性和废物处置- -参照厂商的标签和材料安全数据表参照厂商的标签和材料安全数据表 （msdsmsds） 24 干扰测定干扰测定（determination of interference

20、determination of interference characteristics)characteristics) 第一种方法：评价潜在的干扰物添加到样本第一种方法：评价潜在的干扰物添加到样本 后的干扰效应后的干扰效应（干扰筛选）（干扰筛选） 第二种方法：评价个别有代表性的病人结果第二种方法：评价个别有代表性的病人结果 与高特异性的比较方法的结果偏倚与高特异性的比较方法的结果偏倚（用病（用病 人标本评价干扰）人标本评价干扰） 25 干扰筛选干扰筛选 将阳性干扰物加入测定样品中，与不加的将阳性干扰物加入测定样品中，与不加的 对照组比较有无偏移，称为对照组比较有无偏移，称为“配对差异配对

21、差异”实验。实验。 一般最有效的方法是在较高浓度下对系列可能一般最有效的方法是在较高浓度下对系列可能 的干扰物作初步筛选，如果临床显著意义，则的干扰物作初步筛选，如果临床显著意义，则 该物质不是干扰物，无须进一步实验。反之，该物质不是干扰物，无须进一步实验。反之， 具有临床显著意义的，应进一步评价以确定干具有临床显著意义的，应进一步评价以确定干 扰物浓度与干扰程度间的关系，这类实验称为扰物浓度与干扰程度间的关系，这类实验称为 “剂量效应剂量效应”（dosedoseresponseresponse）实验）实验 26 实验设计实验设计 1. 1. 测试组和对照组在同一个分析批内完成；测试组和对照组

22、在同一个分析批内完成； 2. 2. 计算重复测量次数计算重复测量次数 ： n有临床意义的最小差异值；有临床意义的最小差异值； n假设检验水准；假设检验水准； n重复性（批内精密度）。重复性（批内精密度）。 27 实验材料实验材料 1 1 基础标本（基础标本（base poolbase pool） 从几个健康的、没有进行药物治疗的个体获得适当类型从几个健康的、没有进行药物治疗的个体获得适当类型 （血清、尿等）的新鲜样本，基础样本应能反映样本基质，（血清、尿等）的新鲜样本，基础样本应能反映样本基质， 能反映分析物的特点能反映分析物的特点 。 合适的冰冻或冻干样本合适的冰冻或冻干样本 ，确认测试材料

23、是否与临床样本，确认测试材料是否与临床样本 相似相似 计算所需样本量计算所需样本量 测定基础标本中分析物的浓度并用合适的纯物质调整测测定基础标本中分析物的浓度并用合适的纯物质调整测 试管的分析物浓度到医学决定浓度，应避免加入分析物试管的分析物浓度到医学决定浓度，应避免加入分析物 时引入其他物质，推荐的分析物测试浓度见时引入其他物质，推荐的分析物测试浓度见附录附录 b b。 28 实验材料实验材料 2. 2. 贮存液贮存液 l获得合适而纯的获得合适而纯的潜在干扰物潜在干扰物，或者该物质，或者该物质 最接近体内循环状态的形式最接近体内循环状态的形式 l选择一种能够充分溶解分析物的选择一种能够充分溶

24、解分析物的溶剂溶剂 l尽可能小地尽可能小地稀释稀释样本基质，最好小于样本基质，最好小于5%5%。 如果溶解度允许，通常配制成浓缩的如果溶解度允许，通常配制成浓缩的2020倍倍 的贮存溶液的贮存溶液 l有机溶剂有机溶剂需要特殊的对待需要特殊的对待 ，氯仿至少要求，氯仿至少要求 1 1：100100 的稀释倍数，乙醇浓度大于的稀释倍数，乙醇浓度大于1 12 2 时能够使抗体变性。时能够使抗体变性。 29 3. 对照样本对照样本 n用制备贮存液相同体积的溶剂替代测试干扰物用制备贮存液相同体积的溶剂替代测试干扰物 ，其他要求与测试样本相同。，其他要求与测试样本相同。 如果对照样本中存在测试物质（比如胆

25、红素），如果对照样本中存在测试物质（比如胆红素）， 使用合适的分析方法确定它的浓度。使用合适的分析方法确定它的浓度。 如果对照样本中被分析物浓度与基础样本中明显如果对照样本中被分析物浓度与基础样本中明显 的不相符，考虑溶剂为潜在的干扰物。的不相符，考虑溶剂为潜在的干扰物。 实验材料实验材料 30 重测次数要求重测次数要求 n重测次数取决于统计学假设水准重测次数取决于统计学假设水准 当有效假设检验不能确定干扰的方向当有效假设检验不能确定干扰的方向 （正的或负的）时使用双侧检验，（正的或负的）时使用双侧检验， 当有效假设检验包括干扰的方向（正当有效假设检验包括干扰的方向（正 的或负的）时使用单侧检

26、验的或负的）时使用单侧检验 31 重测次数要求重测次数要求 n双侧检验：双侧检验： nz1-z1- /2/2：100( 1100( 1 )% )% 的置信水平，的置信水平， nz1z1 ：100100（1 1 ） 检验效能，检验效能， ns s 是重复性标准差。是重复性标准差。 nd max d max 是分析物在测试浓度范围内的最大允许干扰。是分析物在测试浓度范围内的最大允许干扰。 n单侧检验：单侧检验： 用用z z 1- 1- 代替代替 z z1- 1- /2/2 32 n z z百分位值：百分位值： 重测次数要求重测次数要求 33 n z z百分位值：百分位值： 举例：举例： 检测可接受

27、干扰程度为检测可接受干扰程度为1.5 mg/dl1.5 mg/dl 的干的干 扰效应，扰效应，9595（ 0.050.05）检验水准时，重）检验水准时，重 复性（批内精密度）为复性（批内精密度）为1.0mg/d l , 1.0mg/d l , 计算重计算重 复次数：复次数： 重测次数要求重测次数要求 34 n批内标准差（批内标准差（d max/sd max/s）的倍数）的倍数 ： 9595（ 0.050.05）检验水准时检测不同的干扰）检验水准时检测不同的干扰 效应所需的重测次数如下：效应所需的重测次数如下： 重测次数要求重测次数要求 35 批内标准差（批内标准差（d max/sd max/s

28、）的倍数）的倍数 ： 举例举例 n在在1mg/dl 1mg/dl 肌酐浓度水平，批内重复测定的标准差为肌酐浓度水平，批内重复测定的标准差为0.075 0.075 mg/dlmg/dl，实验室认为，实验室认为 0.1mg/dl0.1mg/dl是一个有意义的干扰。需要是一个有意义的干扰。需要 测定多少次，可能干扰能被检测到？测定多少次，可能干扰能被检测到？ n首先，把不精确度表述为批内重复测定的标准差的倍数：首先，把不精确度表述为批内重复测定的标准差的倍数： 0.1mg/dl/0.075 mg/dl0.1mg/dl/0.075 mg/dl =1.33 =1.33 。 n将将1.331.33向前舍入

29、一位为向前舍入一位为1.31.3，上表决定重复测定次数，得出，上表决定重复测定次数，得出 在在9595（ 0.050.05）检验水准时，每个对照和测试样品需）检验水准时，每个对照和测试样品需 要重复测定要重复测定1616次。次。 重测次数要求重测次数要求 36 实验程序实验程序 “配对差异配对差异”实验：实验： 1) 1) 合适的分析物浓度；合适的分析物浓度； 2) 2) 建立有临床意义差别的标准（建立有临床意义差别的标准（d max d max ）；）； 3) 3) 确定每个样品所需的重复测量次数；确定每个样品所需的重复测量次数； 4) 4) 准备临床基础标本；准备临床基础标本； 5) 5)

30、 准备准备2020倍的浓缩贮存液（潜在干扰物），如果使倍的浓缩贮存液（潜在干扰物），如果使 用另外一种浓度）确定，按照步骤用另外一种浓度）确定，按照步骤6 6和和8 8稀释（推稀释（推 荐浓度见荐浓度见附表附表c c）; ; 37 n6)6)用吸管吸取用吸管吸取1/201/20容器体积的浓缩贮存液到容器体积的浓缩贮存液到 容量瓶中，称为容量瓶中，称为测试样品测试样品， n7)7)用基础液补足到刻度体积，充分混匀；用基础液补足到刻度体积，充分混匀； n8)8)用吸管吸取用吸管吸取1/201/20容器体积的制备贮存液的容器体积的制备贮存液的 溶剂到第二个容量瓶，称为溶剂到第二个容量瓶，称为对照样品

31、对照样品。 n9)9)基础液补足体积，充分混匀；基础液补足体积，充分混匀； n10)10)准备能够被准备能够被n n整除的测试样本和对照样本，整除的测试样本和对照样本， 重复测定次数重复测定次数n n由第三步确定；由第三步确定； 实验程序实验程序 38 11)11)按交互的顺序分析测试（按交互的顺序分析测试（t t）和对照（）和对照（c c）样本；）样本； 如果检测系统受如果检测系统受携带污染携带污染影响，增加额外的样本使对影响，增加额外的样本使对 照样本免受来自测试样本携带污染的影响。照样本免受来自测试样本携带污染的影响。 增加的额外对照样品增加的额外对照样品cxcx结果应舍弃。结果应舍弃。

32、 12)12)记录结果，进行数据分析。记录结果，进行数据分析。 实验程序实验程序 39 数据分析数据分析 .1 计算观察到的干扰效应的计算观察到的干扰效应的“点估计点估计”， 即即dobsdobs ，是测试样本均值和对照样本均值，是测试样本均值和对照样本均值 之间的差值。之间的差值。 2 计算计算cut-off cut-off 值值c c （双侧检验）（双侧检验） nullnull是无效假设规定的值，通常是无效假设规定的值，通常0 0 ，对于，对于单侧单侧 检验检验，用，用 z z1 1 取代取代 z z1 1 /2/2 。 40 3.3.计算计算95 95 置信区间的干扰效应置信区间的干扰效

33、应 95 95 置信区间置信区间 数据分析数据分析 s s是测量方法重复性的批内精密度，是测量方法重复性的批内精密度， n n是每个样本的重复测量次数，是每个样本的重复测量次数， t t0.975 n-10.975 n-1为为 t t 检验数值表中检验数值表中97.5%97.5%和和 n-1 n-1 的自由度时的的自由度时的 值（值（n 30n 30，2.02.0是是t0.975 n-1的合理近似值）。的合理近似值）。 41 结果解释结果解释 如果点估计如果点估计d dobsobs值小于或等于值小于或等于cut-offcut-off值值 dcdc，可以得出某种物质引起的偏倚小于，可以得出某种物

34、质引起的偏倚小于d d maxmax；否则，接受有效假设，说明由该物质；否则，接受有效假设，说明由该物质 引起干扰的假设成立。引起干扰的假设成立。 42 当解释干扰测试结果时考虑以下情况：当解释干扰测试结果时考虑以下情况： n由于吸样错误，真实的干扰可能不同于观察到的由于吸样错误，真实的干扰可能不同于观察到的 “点估计点估计”。如果无效假设成立，置信限。如果无效假设成立，置信限100100（1 1 ）接受它；如果有效假设检验成立，）接受它；如果有效假设检验成立， 置信置信 限限100100（1 1 ） 接受它。相反置信限分别为接受它。相反置信限分别为 100 100 和和 100 100 。

35、n如果被检物为非人血清成分检测，可能会引入人如果被检物为非人血清成分检测，可能会引入人 造物品的误差造物品的误差 n测试浓度的随意选择可能不显示干扰测试浓度的随意选择可能不显示干扰 结果解释结果解释 43 n当一种或多种分析物的浓度出现干扰效应，则可当一种或多种分析物的浓度出现干扰效应，则可 通过剂量效应曲线确定不同干扰物浓度干扰程度，通过剂量效应曲线确定不同干扰物浓度干扰程度， 干扰物不同浓度可通过干扰物不同浓度可通过最高值最高值干扰物浓度样本和干扰物浓度样本和 对照样本对照样本混合制备。混合制备。 n一般情况下，做剂量效应曲线时每个测试浓度水一般情况下，做剂量效应曲线时每个测试浓度水 平重

36、复测量平重复测量三次三次足够。如计算每个浓度所需的重足够。如计算每个浓度所需的重 复测量次数，也可用复测量次数，也可用附录中附录中公式计算。公式计算。 “剂量效应剂量效应” ” 实验实验 44 测试材料测试材料 1. .基础标本基础标本 2. 2. 贮存液贮存液 3.3.高浓度样本高浓度样本-用基础标本稀释贮存液，制备成所用基础标本稀释贮存液，制备成所 需的浓度。需的浓度。 4.4.低浓度样本低浓度样本 准备一组低的含平均浓度的干扰物的临床样准备一组低的含平均浓度的干扰物的临床样 本，在大多数情况下，治疗药物，或血红蛋白、本，在大多数情况下，治疗药物，或血红蛋白、 胆红素可以忽略不计，低浓度样

37、本的制备可参胆红素可以忽略不计，低浓度样本的制备可参 照对照样本的制备方法照对照样本的制备方法 45 测试材料测试材料 5. 5. 测试样本测试样本-制备一系列不同浓度的干扰测试样制备一系列不同浓度的干扰测试样 本，通常五个浓度足够确定一个线性的剂量效应本，通常五个浓度足够确定一个线性的剂量效应 关系。关系。 46 剂量效应实验程序剂量效应实验程序 1) 1)测定待测的最高和最低标本浓度水平；测定待测的最高和最低标本浓度水平； 2)2)确定被认为确定被认为“有临床意义有临床意义”差别，如果曾差别，如果曾 做过做过“配对差异配对差异”实验，这一步已经完成；实验，这一步已经完成； 3)3)确定在每

38、个浓度重测次数确定在每个浓度重测次数 n n（见附录（见附录 e e ），）， 通常通常3 3次；次； 4)4)准备高中低系列浓度样本；准备高中低系列浓度样本； 47 剂量效应实验程序剂量效应实验程序 5 5） 按照第三步按照第三步n n值的大小准备每份标本量；值的大小准备每份标本量； 6 6） 在同一分析批之内检测在同一分析批之内检测5 5个样本的浓度，个样本的浓度， 第一组按照升序测定各样本，第二组按降第一组按照升序测定各样本，第二组按降 序测定，第序测定，第3 3组按照升序等等，平均系统组按照升序等等，平均系统 漂移影响；或按随机顺序检测所有样本，漂移影响；或按随机顺序检测所有样本， 达

39、到最小化漂移效应；达到最小化漂移效应； 7 7） 计算低浓度样本的平均值，其他各组结果中计算低浓度样本的平均值，其他各组结果中减减 去去该低浓度样本的平均值，然后把最终净结果该低浓度样本的平均值，然后把最终净结果 填入表格中进行数据分析。填入表格中进行数据分析。 48 数据分析数据分析 n将结果点在图上，将结果点在图上，y y轴为干扰结果，轴为干扰结果，x x轴上轴上 为干扰物浓度，观察剂量效应关系曲线的为干扰物浓度，观察剂量效应关系曲线的 形状：形状： 线性效应线性效应 非线性效应非线性效应 49 线性效应线性效应 n数据随机分布，大约成一条直线，用数据随机分布，大约成一条直线，用 最小二乘

40、法进行回归分析，在图上划最小二乘法进行回归分析，在图上划 出回归直线，确定适合所有数据点，出回归直线，确定适合所有数据点， 其效应曲线是线性。其效应曲线是线性。 50 n与干扰物浓度相关线性干扰举例：与干扰物浓度相关线性干扰举例： 线性效应线性效应 五个浓度水平的剂量效应线性关系结果五个浓度水平的剂量效应线性关系结果 51 线性效应线性效应 剂量效应回归分析剂量效应回归分析 52 线性效应线性效应 线形回归的线形回归的95%95%可信区间范围可信区间范围 从干扰物浓度与置信区间改变大小的函数可以看出，在从干扰物浓度与置信区间改变大小的函数可以看出，在 95%95%置信区间内结果最可信的是中间干

41、扰物浓度范围置信区间内结果最可信的是中间干扰物浓度范围 53 非线性效应非线性效应 n干扰物浓度的干扰可能不是一个线性干扰物浓度的干扰可能不是一个线性 函数，如果绘图的数据显示是弯曲的，函数，如果绘图的数据显示是弯曲的， 那么对一个给定的干扰物浓度的干扰那么对一个给定的干扰物浓度的干扰 程度的适当估计可以用图解形式表示程度的适当估计可以用图解形式表示 。 54 举例：举例： 非线性效应非线性效应 五个系列浓度剂量响应非线性结果五个系列浓度剂量响应非线性结果 55 非线性效应非线性效应 非线性剂量效应回归分析非线性剂量效应回归分析 任何浓度水平的干扰物的干扰程度能够从图表中被估任何浓度水平的干扰

42、物的干扰程度能够从图表中被估 计，也可以用非线性回归方程计算。计，也可以用非线性回归方程计算。 56 回归线斜率代表每单位干扰物的偏倚，回归线斜率代表每单位干扰物的偏倚， y y轴上的截距表示内源性干扰浓度的校正，轴上的截距表示内源性干扰浓度的校正， 通过回归方程或者图表，任何干扰物浓度通过回归方程或者图表，任何干扰物浓度 水平的干扰程度都可被估计。如果斜率是水平的干扰程度都可被估计。如果斜率是 正的，实验显示该物质引起一个正的干扰。正的，实验显示该物质引起一个正的干扰。 结果解释结果解释 57 分析物和干扰物联合评价分析物和干扰物联合评价 n在单一的实验中，干扰物浓度和分析物浓度在检在单一的

43、实验中，干扰物浓度和分析物浓度在检 测过程中有组织设置，两个或更多潜在干扰物能测过程中有组织设置，两个或更多潜在干扰物能 被更有效同时检测，单一成分的干扰效应可通过被更有效同时检测，单一成分的干扰效应可通过 单因素分析方法评估，多因素实验设计描述，参单因素分析方法评估，多因素实验设计描述，参 见见boxbox和和hunterhunter文献。文献。 n优点：提高效率和提供更多的信息，干扰物质之优点：提高效率和提供更多的信息，干扰物质之 间及干扰物与分析物之间的相互作用都能被评价。间及干扰物与分析物之间的相互作用都能被评价。 不足之处是样本准备更加复杂，增加了人为误差不足之处是样本准备更加复杂，

44、增加了人为误差 发生的可能性。发生的可能性。 58 干扰筛选的局限性干扰筛选的局限性 n在临床标本中的真实干扰物可能不是原来在临床标本中的真实干扰物可能不是原来 的药物，而是代谢产物。的药物，而是代谢产物。 n实验标本基体并不代表典型的有问题的临实验标本基体并不代表典型的有问题的临 床标本。床标本。 n加入的物质与临床标本中的干扰物不相同，加入的物质与临床标本中的干扰物不相同， 例如，蛋白结合、沉淀，或不均一性（异例如，蛋白结合、沉淀，或不均一性（异 质性）。质性）。 n实验水平可能选择得太高或太低以至不真实验水平可能选择得太高或太低以至不真 实。实。 59 干扰测定第二种方法：干扰测定第二种

45、方法： 用病人样本评价干扰用病人样本评价干扰 l第一种方法不论考虑多么全面，在病人的血清第一种方法不论考虑多么全面，在病人的血清 标本中可能遇到意想不到的干扰。为了最大程标本中可能遇到意想不到的干扰。为了最大程 度的减少这种情况的发生，度的减少这种情况的发生，应该分析来自病人应该分析来自病人 的真实标本以评价内在的不同血清标本间的变的真实标本以评价内在的不同血清标本间的变 异性。异性。如果某个标本中出现一个可重复的如果某个标本中出现一个可重复的“离离 群值群值”，则说明该标本中有未知的干扰物质存，则说明该标本中有未知的干扰物质存 在。在。 60 实验设计实验设计 l被评价的方法和参考方法（或者

46、其他被认定合被评价的方法和参考方法（或者其他被认定合 格的比较方法）同时测定两组病人样本（测试格的比较方法）同时测定两组病人样本（测试 组和对照组），如果测试组与对照组结果出现组和对照组），如果测试组与对照组结果出现 有意义的偏倚，存在干扰。有意义的偏倚，存在干扰。 l参考方法或比较方法对干扰物有低敏感性。参考方法或比较方法对干扰物有低敏感性。 61 测试标本测试标本 n选择原则：选择原则： 疾病（例如，来自心脏病、肝病或肾病病人疾病（例如，来自心脏病、肝病或肾病病人 的标本）；的标本）； 药物（例如，使用过某种想了解的药物的病药物（例如，使用过某种想了解的药物的病 人标本）；人标本）； n其

47、他不正常组分（例如，具有不正常胆红其他不正常组分（例如，具有不正常胆红 素、脂质、血红蛋白或蛋白的标本素、脂质、血红蛋白或蛋白的标本）。 62 对照标本对照标本 选择原则：选择原则： n没有使用目标药物；没有使用目标药物； n潜在干扰物质在正常浓度范围内；潜在干扰物质在正常浓度范围内； n相同或者相似诊断；相同或者相似诊断； n分析物分布状态与测试标本相似；分析物分布状态与测试标本相似； n对照样本必须包括在每一分析批内。对照样本必须包括在每一分析批内。 63 实验程序实验程序 1. 1. 计算测试标本和对照标本数，取决于：计算测试标本和对照标本数，取决于： n两种方法精密度；两种方法精密度；

48、 n干扰效应的大小；干扰效应的大小； n规定的假设检验水准。规定的假设检验水准。 2.2.挑选测试组和对照组标本；挑选测试组和对照组标本； 3.3.选择合适的参考方法或者效果较好的比较选择合适的参考方法或者效果较好的比较 方法；方法； 64 4. 4. 在尽可能短的时间内（通常在在尽可能短的时间内（通常在两个小时两个小时 内），用两种方法内），用两种方法重复测定重复测定每个样本。每个样本。 5.5.如果观察到偏倚存在，如果观察到偏倚存在，测定测定样本中药物或样本中药物或 者其他潜在的干扰物质的浓度，如果可能者其他潜在的干扰物质的浓度，如果可能 的话，确定偏倚和干扰物浓度两者之间的的话，确定偏倚

49、和干扰物浓度两者之间的 关系。关系。 实验程序实验程序 65 数据分析数据分析 n计算测试组和对照组平均值之间的差值，计算测试组和对照组平均值之间的差值， 并与干扰标准进行比较，然后确定干扰能并与干扰标准进行比较，然后确定干扰能 否被排除或者需要进一步的研究。否被排除或者需要进一步的研究。 66 1. 1. 与比较方法结果作偏倚图与比较方法结果作偏倚图 n计算重复测定结果的均值；计算重复测定结果的均值； n计算每个样本平均偏倚（测试方法结果减去比较计算每个样本平均偏倚（测试方法结果减去比较 方法结果）；方法结果）； n作图：偏倚在垂直轴上，比较方法浓度在水平轴，作图：偏倚在垂直轴上，比较方法浓

50、度在水平轴， 测试和对照样本用不同的记号标识；测试和对照样本用不同的记号标识； n通过线性回归分析计算每一组的通过线性回归分析计算每一组的sy,xsy,x 统计量（比统计量（比 较方法较方法x x），它可用于计算），它可用于计算9595置信区间。置信区间。 数据分析数据分析 67 2. 2. 可能干扰的偏倚评估：可能干扰的偏倚评估： 数据分析数据分析 （a a）相对于对照组的正偏倚）相对于对照组的正偏倚 (b) (b) 相对于对照组没有偏倚成比例的方法偏倚相对于对照组没有偏倚成比例的方法偏倚 (c) (c) 相对于对照组的负的偏倚相对于对照组的负的偏倚 (d) (d) 相对于对照组没有偏倚相对

51、于对照组没有偏倚 68 3.3.以潜在干扰物绘制偏倚曲线以潜在干扰物绘制偏倚曲线 如果病人标本中可疑干扰物的浓度已知，如果病人标本中可疑干扰物的浓度已知， 可以判断它是否与获得的偏倚相关可以判断它是否与获得的偏倚相关 。 数据分析数据分析 一种与潜在干扰物浓度相关很好的干扰效应一种与潜在干扰物浓度相关很好的干扰效应 69 用病人样本评价干扰用病人样本评价干扰-局限性局限性 （1 1）对实验变异缺乏控制对照）对实验变异缺乏控制对照 （2 2）本方法并不能确定原因与作用的关系，）本方法并不能确定原因与作用的关系， 它只能说明偏倚与估计干扰物某水平的相它只能说明偏倚与估计干扰物某水平的相 对关系对关

52、系 （3 3）如果标本不新鲜，将会失去某些易变）如果标本不新鲜，将会失去某些易变 组分（例如，乙酰乙酸、组分（例如，乙酰乙酸、co2co2等等 ） 70 用病人样本评价干扰用病人样本评价干扰局限性局限性 4 4）病人通常用多种药物，因此，难于证实）病人通常用多种药物，因此，难于证实 何种药物的干扰作用何种药物的干扰作用 5) 5) 按疾病和用药对病人分类，不是不可能，按疾病和用药对病人分类，不是不可能， 至至 少对许多实验而言是非常困难的少对许多实验而言是非常困难的 6) 6) 实验是一种机遇，成功取决于在检测的实验是一种机遇，成功取决于在检测的 病人人群的标本中是否有此干扰存在病人人群的标本

53、中是否有此干扰存在 71 7) 7) 很少有公认的参考方法。有的参考方法很少有公认的参考方法。有的参考方法 难以在常规实验室中使用。另外，参考难以在常规实验室中使用。另外，参考 方法可能也同样的被干扰。方法可能也同样的被干扰。 无论怎样，第二种方法对证实干扰物无论怎样，第二种方法对证实干扰物 是有用的，这也是唯一的方法可检出药是有用的，这也是唯一的方法可检出药 物代谢物干扰作用，它也可肯定在真实物代谢物干扰作用，它也可肯定在真实 标本中有干扰的方法。标本中有干扰的方法。 用病人样本评价干扰用病人样本评价干扰-局限性局限性 72 建立、确认和验证干扰声明建立、确认和验证干扰声明 nep7-aep7-a可被厂商用于验证和确认特可被厂商用于验证和确认特 异性，建立干扰声明，临