免疫SOP：TEST作业指导书

1、44XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01Elecsys E 170/E 411睾酮(TEST )1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1 步：50 l 标本与生物素化的抗睾酮单克隆抗体和钌（Ru）标记的睾酮衍生物混匀。一部分抗体的结合位点与标本中的待测物结合（其数量取决于标本中待测物的浓度），一部分则与钌标记的半抗原结合，形成各自的免疫复合物。 第2 步：加入链霉亲和素包被的微粒，免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3 步：反应混和液吸到测量池中，微粒通

2、过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2 点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求 血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。 血浆：肝素锂、钠、铵；EDTA-K3；氟化钠/草酸钾抗凝均可。如采用柠檬酸钠抗凝，结果应+10%进行纠正。 标本在28 度可稳定一周，-20 度可稳定6 个月。只可冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不可以使用加热灭活的血 清。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测

3、定以避免蒸发的影响。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1 瓶，6.5ml 。链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml，生物素结合能力 470ng 生物素/ml 粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗睾酮单克隆抗体（灰盖），1 瓶，8ml 。生物素化的抗睾酮单克隆抗体浓度55ng/ml；磷酸缓冲液，40mmol/l，pH7.0 。含防腐剂。R2：钌标记的睾酮多肽（黑盖），1 瓶，8ml 。浓度3ng/ml；释放试剂ANS/炔诺孕酮；磷酸缓冲液，40mmol/l，pH7.0 。含防腐剂。其他所需材料：常规实验设备Elecsys

4、E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11298500 Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号12135019Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号12135027Elecsys PC/CC杯,货号03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651 Elecsys E 411分

5、析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970 Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159, Elecsys 反应杯（CUP），货号11706829 Elecsys 加样头（TIP），货号117068024. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批睾酮试剂有一条形码标签，含有该批试

6、剂定标所需的特殊信息。应用睾酮CalSet II 定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24 小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂） 7 天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤： 在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定

7、标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样

8、本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制Elecsys通用质控品（PreciControl Universal）1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用

9、于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法 分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为nmol/l,ng/ml 或ug/l。 换算方法是： nmol/l 0.288=ng/ml ng/ml 3.47=nmol/l8. 参考范围百分位数5059550595nnmol/lng/ml男性13217.59.927.852.88女性9561.20.22- 2.90.350.06-0.82男孩 1岁220420.42 0.720.120.12-0.211-6岁290.420.1-1.120.120.03-0.327-12岁3106301 2.37

10、0.180.03-0.68女孩1612.60.98-38.53.60.28-11.1 各实验室应对各自地区人群的孕酮正常值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值。9. 分析性能精密度10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素30mg/dl）、溶血（血红蛋白1.8g/dl）、脂血（脂质2000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8 小时后才能采血。 17 种常用药物经试验对本测定无干扰作用。 偶尔会遇到高滴度抗链霉亲和素抗体的干扰。 Elecsys 睾酮测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义 雄激素睾酮的分子量为288D

11、 。在男性睾酮几乎全由睾丸的间质细胞合成，并由LH 调节其分泌，受垂体-下丘脑负反馈机制的影响。睾酮促进男性第二性征的发育，维持前列腺和精囊的功能。血循环中的睾酮绝大多数与载体蛋白质结合（SHBG=性激素 结合球蛋白）。 女性的卵巢可产生少量睾酮。生理水平的雄激素对妇女没有特殊的作用。 雄激素含量升高可引起女子男性化。 检测女性体内睾酮含量有助于诊断雄激素综合征（AGS）、多囊性卵巢。当怀疑卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤、肾上腺发育不良或卵巢功能不足时，也可检测睾酮。 检测男性体内睾酮含量可用于诊断睾酮产生不足的疾病，如性腺发育不足、雌激素治疗、染色体异常（如Klinefelter 综合征）和肝硬化。

12、Elecsys 睾酮测定方法采用竞争法原理和一种睾酮特异的单克隆抗体。被ANS（8-anilino-1-naphthalene sulfonic acid）和炔诺孕酮释放的内源性睾酮与钌标记的睾酮衍生物竞争生物素化的抗睾酮单克隆抗体上的结合位点。12参考文献 1. Runnebaum B, Rabe T. Gynkologische Endokrinologie und Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Band 1:36-38,70,116 Band 1:39-40, 520-521, 593-594, 422-423. ISBN 3-5

13、40-57345-3, ISBN 3-540-57347-x.2. Nieschling E, Behre HM. Testosteron Action, Deficiency, Substitution.Springer Verlag 1990.ISBN 3-540-52763-x, ISBN 3-387-52760-x.3. Juhl UM, Rippegather G, Weller J, Zawta B. Important Facts on Reproduction Medicine/Fertility Diagnosis, Questions and Answers. 1994;

14、Boehringer Mannheim, Cat. No. 1322958. 4. Wheeler MJ. The determination of bio-available testosterone. Ann Clin Biochem 1995;32:345-357. 5. Tietz NW. Clinical Guide To Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co, 1995:578.6. Thienpont L, Verhseghe PG, Van Brussel KA, De Leenheer AP. Estradiol-17- Quantified in Serum by Iso