抗生素类药物分析

1、在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称,内酰胺类 氨基糖苷类 四环素类 大环内酯类 多烯大环类 多肽类,1. 抗生素（antibiotics）,2. 分 类,一、概 述,化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差,3. 来 源,4. 抗生素的特点,生产工艺复杂 发酵过程不易控制，易受污染,原因,一、概 述,鉴别：物理化学方法、微生物法 检查：水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等 含量/效价测定： 微生物法 ： 与临床疗效吻合，灵敏度高，但操作复杂费时； 理化方法： 准确度与专属性较高，且操作简便，但与临床疗效有偏差,5. 抗生素质量分析,一、概

2、 述,1. 化学结构,包括青霉素类和头孢菌素类,青霉素类：6-APA为母核 头孢菌素类：7-ACA为母核,中 国 药 科 大 学 药 学 院 药 分 教 研 室,二、内酰胺类,酸性较强（pKa 2.5-2.8） 临床常用其碱金属盐 （水溶性好）,酸性(羧基),有多个手性碳,旋光性,青霉素类：苯环取代基 头孢菌素类：母核有共轭结构,UV（共轭）,干燥条件较稳定，溶液不稳定,稳定性(内酰胺),2、主要 理化性质,降解 失效,氧化剂、酸、碱 酶、金属离子、,青霉素,二、内酰胺类,1）羟肟酸铁反应： 内酰胺类 羟肟酸 显色 2）茚三酮反应 -氨基 蓝紫色 3）双缩脲反应 内酰胺类 紫红色 4）光谱法（

3、UV、NMR） 5）色谱法（HPLC、TLC）,NH2OHHCl NaOH,茚三酮 ,碱性酒石酸铜,呈色反应,3、鉴 别,二、内酰胺类,二、内酰胺类,4、检 查,聚合物 有关物质和异构体 吸光度 残留溶剂 结晶性,5、含量测定 -碘量法（ChP2000）,二、 内酰胺类,原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其碱性降解产物可消耗碘,青霉素族 头孢菌素族,NaOH 水解,4I2H +,8I-,I2+2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,定量过量,剩 余,5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,反应分两步进行：,水解反应 (按化学计算量进行),氧化-还原反应 (无定量关系，受温度、p

4、H值和时间等因素影响， 应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定),5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,因样品中杂质会消耗碘，故应作空白试验。,加入样品，不加碱； 其余试剂（醋酸盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都要加碱。,空白试验:,空白试验与经典空白试验不同：,5、含量测定,-碘量法（ChP2000）,含量 对照品,V样空 - V样 W对 V对空 - V对 W样,灵敏度高：样品 : 碘 = 1 : 8 反应条件、实验操作要求高,1份含量,V对、V对空 V样、V样空,加试剂次序、反应时间、滴定速度相同,特 点：,5、含量测定,-电位配位滴定法（汞量法）,原理：青霉素不与汞盐反应，其碱性降解

5、产物可与Hg2+络和。,Hg+ + 2R-SH (RS)2Hg + 2H+,方法说明： a、空白试验与碘量法类似，加样品，不加NaOH b、与碘量法相比，汞量法不需对照试验,5、含量测定,-其他常用方法,酸碱滴定法：应用广泛,硫醇汞盐法,HPLC法：应用广泛,1. 化学结构,三、氨基糖苷类,都是以氨基环醇与氨基糖缩合而成的苷； 分子结构中都含有多羟基； 均为碱性抗生素；,链霉素,临床应用其硫酸盐,碱性(氨基),（糖）：有多个手性碳,旋光性(糖),水 溶 性,溶解度(氨基、羟基),强酸、碱条件均可水解,稳定性(苷),2、主要 理化性质,三、氨基糖苷类,3、鉴 别,三、氨基糖苷类,茚三酮反应：具羟

6、基胺类，-氨基酸性质,链霉素 + 水和茚三酮 蓝紫色,链霉素 N-甲基葡萄糖胺,N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反应：,红 色,水解,对二甲氨基苯甲醛,乙酰丙酮 OH-,8-羟基喹啉 NaOBr,坂口（Sakaguchi）反应：(链霉胍特有）,麦芽酚（Maltol)反应：(链霉糖特有）,三、氨基糖苷类 -鉴别,链霉素 麦芽酚 紫红色,链霉素 链霉胍 橙红,硫酸盐反应,或-萘酚,4、检 查-,来 源：,发酵中产生,BP:,薄层色谱法（杂质对照品法）,要求：NC2 2000，C2a峰和C2峰的分离度应符合要求，重复进样RSD2.0%,三、氨基糖苷类,链霉素中链霉素B的检查,庆大霉素C

7、组分测定（系统适用性试验）,色谱柱：ODS,流动相： H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸钠溶液(0.2M)，必要时调节甲醇的含量。,检测波长： 330nm（邻苯二甲醛柱前衍生）,4、含 量 检 测,三、氨基糖苷类,氨基糖苷类 含量检测,微生物法、HPLC法等,四、四环素类,1. 化学结构,四、四环素类,-OH：酸性 N(CH3)2：碱性 与酸、碱均可成盐 临床多用盐酸盐,两 性,旋光性,易发生异构化，降解等反应，性质不稳定,稳定性,酚羟基、烯醇基与Ca2+、Mg2+络合显色,与金属离子络合,2、主要 理化性质,UV和荧光,四、四环素类,2. 主要理化性质,碱 性 C环开环，形成内酯 异四环素,弱酸性（pH2-6） A环C-4异构化 差向四环素,酸性（pH 2） C环脱水 脱水四环素,四、四环素类,差向异构体,异四环素,OH-,四、四环素类,四、四环素类,3. 鉴 别,1）浓硫酸反应 2）FeCl3反应： （酚羟基） 显红色褐色 3） TLC、HPLC 4）荧光：（含共轭双键）紫外灯照射下产生不同颜色荧光,HPLC法,4. 检 查,TLC、HPLC法 杂质吸收度（降解产物颜色较深） 残留溶剂,5. 含