第六章胺类药物的分析

1、第六章 胺类药物的分析脂肪胺类季胺盐类胺 类 药 物 磺酰胺类芳胺类（酰胺类、对氨基苯甲酸酯类）芳烃胺类（苯乙胺类、氨基醚衍生物） 芳氧丙醇胺类8/19/2013第一节 芳胺类药物的分析一、对氨基苯甲酸酯类药物典型药物: 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因 盐酸丁卡因8/19/2013O R1HN C OR2对氨基苯甲酸酯 的基本结构 结构特点: 含对氨基苯甲酸酯母核8/19/2013H2NCOOC2H5苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因H3C(H2C)3HN COOCH2CH2N(C2H5)2 HCl盐酸丁卡因8/19/2013H2NCONHCH2CH2N(C2H5)2

2、HCl盐酸普鲁卡因胺抗心律失常药 酯键 酰胺键 不属对氨基苯甲酸酯类药物, 但结构 与化学性质相似8/19/2013二 、酰胺类药物R3 R1 R4 N C R2 H O结构特点: 苯胺的酰基衍生物, 具芳酰氨基8/19/2013典型药物: 对乙酰氨基酚 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 醋氨苯砜8/19/2013HONHCOCH3对乙酰氨基酚O H3COCHN S O NHCOCH3醋氨苯砜8/19/2013NHCOCH2N(C2H5)2 H3C CH3.HCl.H2O盐酸利多卡因CH3 NHCO CH38/19/2013C4H9 N.HCl盐酸布比卡因（一）化学结构及性质 1. 芳伯氨基或潜在芳

3、伯氨基 （1）重氮化偶合反应 （2）用亚硝酸钠滴定法进行含量测定 注: 盐酸丁卡因无此特性 利多卡因与布比卡因难水解8/19/20132. 酯键或酰胺键的水解 利用水解产物的性质来进行鉴别注： 水解速度受空间位阻、光线、热 或碱性条件的影响8/19/20133. 弱碱性（脂烃胺侧链） 与生物碱沉淀试剂生成沉淀，非 水溶液滴定法测定含量。 游离碱易溶于有机溶剂； 其盐 可溶于水。8/19/20134. 其它取代基（酚羟基） 可区别对乙酰氨基酚与醋氨苯酚 5. 与金属离子沉淀 6. UV和IR8/19/2013三、鉴别（一） 重氮化-偶合反应1. 原理 芳伯氨基NaNO2 H+重氮盐碱性-萘 酚偶

4、氮染料适用范围： 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基8/19/2013H2NCOOC2H5苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因8/19/20132. 方法 （1） S重氮化偶合沉淀（橙黄到猩红色）如：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因（2） S水解 重氮化偶合沉淀如：对乙酰氨基酚，醋氨苯砜8/19/2013盐酸普鲁卡因Ch.P（2000）鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数 滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色 沉淀。8/19/2013对乙酰氨基酚 Ch

5、.P（2000） 置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，鉴别 （2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1， 滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液2m1，振摇，即 显红色。8/19/2013（3）盐酸丁卡因NaNO2H+N-亚硝基乳白色沉淀H3C(H2C)3HNCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl + HNO2H3C(H2C)3HNNOCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl+ H2O8/19/2013（二）水解产物反应 1. 盐酸普鲁卡因 Ch.P（2000）鉴别（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后， 加10氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀； 加热，变为油状

6、物；继续加热，产生的蒸气， 能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油 状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白 色沉淀。8/19/2013盐酸普鲁卡因（二乙胺基乙醇酯） 盐酸普 鲁卡因NaOH白（普鲁卡因） 白HCl油状物沉淀溶解过量 HCl对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇 （碱性）8/19/20132. 苯佐卡因（乙醇酯） 苯佐卡因NaOH 乙醇I2碘仿黄色沉淀及臭气8/19/20133. 对乙酰氨基酚与醋氨苯砜水解 乙醇 H+S醋酸乙酸乙酯香味8/19/2013（三）三氯化铁反应 原理： 酚羟基 + 三氯化铁 呈蓝紫色如：对乙酰氨基酚8/19/2013（四）与重金属离子反应1. 与铜和钴离子反

7、应(具有芳酰胺的 结构) 盐酸利 + CuSO Na2CO3 蓝紫色 4 多卡因氯 仿黄色盐酸利 + CoCl 2 多卡因8/19/2013酸性亮绿色2. 羟肟酸铁盐反应（芳酰胺） 盐酸普鲁 + H O 2 2 卡因胺氧化 羟肟酸FeCl3羟肟酸铁紫红色暗棕色棕黑色8/19/20133. 与汞离子反应 盐酸利 + Hg(NO3)2 多卡因 对氨基苯 + Hg(NO ) 3 2 甲酸酯类HNO3 黄色HNO3红色或 橙黄色8/19/2013（五）制备衍生物测熔点1. 三硝基苯酚衍生物 盐酸利 多卡因 盐酸布 比卡因8/19/2013三硝基苯酚黄色沉淀熔点228-232 C三硝基苯酚沉淀熔点194

8、C2. 硫氰酸盐衍生物 盐酸丁 卡因25%硫氰酸胺白色结晶过滤 洗涤5%醋酸测熔点（131 C）8/19/201380 C干燥（六）UV 苯环的紫外吸收特性（七）IR适用于结构复杂而相互差别小的 药物鉴别与区别。 例：盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因胺8/19/2013四、杂质检查（一）盐酸普鲁卡因注射液中杂质的检查 杂质来源： 制备或贮藏过程中水解 检查方法： TLC的杂质对照品法8/19/2013精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中 含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。 取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含 30?g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶 液各10 ?l，分

9、别点于含有羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇 （141 1 4）为展开剂，展开后，取出晾 干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基 苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷 雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的 杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。8/19/2013允许杂质存在的最大量 L? ? 100% 供试品量 30 ? 10 ? 10 ? ? 100% ? 1.2% 2.5 ? 10?38/19/2013以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸A. 盐酸普鲁卡因B. 盐酸普鲁卡因胺 C. 注射用盐酸普鲁卡因D. 盐酸普鲁卡因胺片E. 盐

10、酸普鲁卡因注射液8/19/2013盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有A. 重氮化偶合反应B. 羟肟酸铁盐反应 C. 氧化反应D. 磺化反应E. 碘化反应8/19/2013（二）对乙酰氨基酚的杂质检查一般杂质 乙醇溶液的澄清度与颜色 有关物质 对氨基酚检查 项目8/19/2013生产工艺： 对硝基氯苯水解对硝基酚还原对氨基酚对乙酰氨基酚亚硝化乙酰化酚8/19/2013硝基酚还原对氨基酚2. 有关物质 检查方法：TLC以对氯乙酰苯胺为杂质对照品，检查多种杂质的限量。 对氯乙酰苯胺：杂质对照品法 其它杂质：参比杂质对照品法8/19/20133. 对氨基酚 来源：乙酰化不完全或収生水解检查原理与方法：对照

11、法8/19/2013对氨基酚（对照）亚硝基铁氰化钠OH-蓝色配位化合物比色 （样品）OH-亚硝基铁氰化钠8/19/20131. 乙醇溶液的澄清度与颜色 来源：由还原剂铁粉与对氨基酚的氧化 物引起 方法：比色与比浊8/19/2013检查方法取本品1.0g，加甲醇溶液（12） 20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试 液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与 对乙酰氨基酚对照品1.0g 加对氨基酚 50?g用同一方法制成的对照液比较，不 得更深。8/19/2013允许杂质存在的最大量 L? ? 100% 供试品量 50 ? 10 ? 1. 0?6? 100% ? 0.005%8/19/2013五、

12、含量测定具游离芳伯氨基的药物（盐酸普鲁卡因、苯佐卡因）可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药 物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族 硝基化合物（如无味氯霉素）经还原， 也可用本法测定。8/19/2013（一）亚硝酸钠滴定法1. 原理 ArNH2NaNO2 HClArN N+Cl适用范围：具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基8/19/20132. 测定条件 （1）溴化钾的加入溴化钾起催化剂的作用NaNO2 + HCl HNO2 +NaCl HNO2 + HCl NOCl + H2O8/19/2013NH2NO Cl 慢+-H N NO快N N OH快8/19/2013N N Cl+-HNO2

13、+ HBr NOBr + H2O -(1)HNO2 + HCl NOCl + H2O-(2) K1 300 K2 生成的 NO Br量大得多， NO+ 浓度反应速度8/19/2013（2）酸度一般采用盐酸酸性: 反应速度随酸种类的不同而不同：HBr > HCl > H2SO4 ，HNO3最常用8/19/2013酸度加快重氮化反应速度 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物酸度阻碍芳伯氨基的游离 亚硝酸易分解N样 :N盐酸= 1: 2.5 68/19/2013（3）温度 T T ， V ， 亚硝酸逸失，重氮盐分解在室温下（10C 30C）进行滴定8/19/2013（4）滴定速

14、度 过快 ： 指示剂变色，终点提前 过慢 ： HNO2 的分解逸失 为了避免滴定过程中HNO2 的分 解逸失，可采用快速滴定法。8/19/2013快速滴定法：滴定管尖插入液面下23处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液，近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再缓缓滴定至终点。8/19/2013（5）终点指示 永停滴定法终点指示方法外指示剂法 电位法内指示剂法8/19/2013电位滴定法: 原理： 以参比电极与指示电极同时浸入 待滴定液，测量电位，随着滴定进行 电位也逐渐变化，电位发生突跃即为 终点 。8/19/2013内指示剂法: 原理： 过量的亚硝酸氧化指示剂变色如： 中性红、橙黄IV-亚甲蓝和二氰双

15、邻氮 菲亚铁 缺点：重氮盐有色干扰8/19/2013永停滴定法Ch.P（2000）原理： 电极：铂铂电极 阳极 NO+H2O HNO2+H+e 阴极 NO+H+e HNO2+H2O终点： 溶液中开始有亚硝酸，电极起氧化 还原反应，电流计偏转，为终点。8/19/2013永停滴定法（附录A）用作重氮化法的终点指示时，调节R1 使加于电极上的电压约为50mV。取供试品 适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外， 可加水40ml与盐酸溶液（12）15ml，而 后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化 钾2g，插入铂铂电极后，将滴定管的尖端 插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液 （0.1mol/L或0.0

16、5mol/L）迅速滴定，随滴 随搅拌，至近终点时，将滴定管8/19/2013的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗 液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计 指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终 点。8/19/2013盐酸普鲁卡因 Ch.P（2000）取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录A），在1525，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg 的C13H20N2O2 HCl。8/19/2013外指示剂法： ArNH2HClNaNO2ArN N+Cl碘化钾 淀粉糊蓝色2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2Na

17、Cl+2H2O8/19/2013优： 灵敏度较高 缺： （1）使用不方便 （2）碘化钾在未到终点时，在酸性条 件下可被空气氧化析出碘。 （3）外试消耗供试品8/19/2013（二）非水溶液滴定法 原理： 弱碱性药物碱性非常弱，不 能在水中直接滴定，非水溶液滴定法 使原来在水溶液中不能滴定的某些弱 酸弱碱，经选择适当溶剂，增强其酸 碱性后，便可以迚行滴定。8/19/2013非水溶剂的种类 (1) 酸性溶剂 有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强其相对 碱度，最常用的酸性溶剂为冰醋酸 (2) 碱性溶剂 有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强其相对 酸度，最常用的碱性溶剂为二甲基甲酰胺。 (3) 两性溶剂 兼有

18、酸、碱两种性能，最常用的为甲醇。 (4) 惰性溶剂 这一类溶剂没有酸、碱性，如苯、氯仿等。8/19/2013非水溶液滴定法步骤 除另有规定外,精密称取供试品适量约消耗 高氯酸滴定液(0.1mol/L)8ml， 加冰醋酸1030ml使溶解，加各药品项下规 定的指示液12滴， 用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定。 终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并 将滴定的结果用空白试验校正。8/19/2013醋酐：用以除去溶剂中的水分醋酸汞：用以形成不离解的氯化汞，加3-5ml 以消除氢卤酸的干扰结晶紫：非水溶液滴定指示剂 pH 0.5（绿）2.0(蓝）8/19/2013（三）UV法 对乙酰氨基酚在稀碱

19、性溶液中， 在2571nm波长处有最大吸收，可用 于其原料及其制剂（包括对乙酰氨基 酚片剂、注射液、栓剂）的含量测定。8/19/2013对乙氨基酚 Ch.P（2000） 取本品约40mg，精密称定，置250ml 量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液50ml溶解 后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1， 置100ml量瓶 中 ， 加 0.4 氢 氧 化 钠 溶 液 10m1，加水至刻度，摇匀，在257nm的 波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系 1% 数 为715 计算，即得。E1cm8/19/2013例： 称取对乙酰氨基酚42.0mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液50ml溶解

20、后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液10m1，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收度为0.594，按C8H9NO2的吸收系数百分含量。8/19/20131% E1cm为715计算A ? D ?V 1% E1cm L ? 100 含量% ? ? 100% W0.594 100 3 ? ? 250?10 含量% ? 715?1?100 5 ?100% 42.0 ? 98.9%8/19/2013对乙酰氨基酚片剂：A ? D ?V 1% E1cm L ?100 ?W W 标示量% ? ?100% 标示量8/19/2013例： 取标示量为0.3g/片的

21、对乙酰氨基酚片 10片，总重为3.3660g，研磨粉碎，称出 43.9mg，置250ml量瓶中，加0.4氢氧化 钠溶液50ml及水50ml，振摇15min，加水 至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过。弃去初 滤液，精密量取续滤液5m1，置100ml量 瓶中，加0.4氢氧化钠溶液10m1，加水 至刻度，摇匀，在257nm的波长处测的吸 1% 收度为0.583，按C8H9NO2的吸收系数 E1cm 为715 计算本片剂的标示量%。8/19/2013A ? D ?V 1% E1cm L ?100 ?W W 标示量% ? ?100% 标示量 0.583 100 ? ? 250 3.3660 715?1?100

22、 5 ? ?3 43.9 ?10 10 ?100% ? 0.3 ? 104.2%8/19/2013采用亚硝酸钠法测定含量的药物有A. 苯巴比妥 B. 盐酸丁卡因C苯佐卡因D. 醋氨苯砜 E. 盐酸去氧肾上腺素P 92 盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚8/19/2013下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者A. 乙酰水杨酸 结构中没有芳伯氨基 B. 对氨基水杨酸钠C. 对乙酰氨基酚 D. 普鲁卡因E. 苯佐卡因8/19/2013亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是A. 添加Br? B. 生成NO+ ? BrC生成HBrD. 生成Br2P93E. 抑制反应进行8/19/2013中国药典（2005年版）所

23、收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为 A. 电位法B. 永停法C. 外指示剂法P94D. 内指示剂法E. 自身指示剂法8/19/2013亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有P94A. 自身指示剂法 B. 内指示剂法C. 永停法 D. 外指示剂法E. 电位法8/19/2013盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是P93-94A. 强酸 B. 加入适量溴化钾C. 室温（1030）下滴定 D. 滴定管尖端深入液面E. 永停法指示终点8/19/2013第二节 苯乙胺类药物的分析R1 CH CH NH R2 OH R3苯乙胺类基本结构8/19/2013R1：苯环取代基 R2 , R3

24、 ：脂烃侧链HO HOOH C CH2NHCH3 H 肾上腺素临床主要用于心脏骤停、支气管哮喘、 过敏性休克，也可治疗荨麻疹、枯草热 及鼻粘膜或齿龈出血。8/19/2013HO HOCOOH OH H C OH C CH2NH2 HO C H H COOH 重酒石酸去甲肾上腺素主要用于抗休克，如因麻醉鸬男菘恕?中毒性休克、心源性8/19/2013H C CH2NHCH3 HCl OH HO 盐酸去氧肾上腺素用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、应用氯丙嗪 等原因引起的低血压，也用于室上性心动过 速和散瞳检查等。8/19/2013HO HOH C CH2NHCH(CH3)2 HCl OH 盐酸异丙肾上腺素

25、用于治疗支气管哮喘,心脏聚停,房室传导阻滞 ,抗休克8/19/2013HO CH2OHH C CH2 NH C(CH3)3 OH2H2SO4硫酸沙丁胺醇选择性激动支气管平滑肌上的2-受体， 使支气管平滑肌松弛，从而解除支气管 平滑肌痉挛。8/19/2013Cl H2N Cl H C CH2 NH C(CH3)3 OH HCl盐酸克仑特罗用于防治支气管哮喘、慢性喘息性支气管炎、 肺气肿等呼吸系统疾病所致的支气管痉挛。8/19/2013盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱为拟肾上腺素药，能兴奋交感神经 可用于支气管哮喘、百日咳、枯草热及其他 过敏性疾病，还能对抗脊椎麻醉引起的血压 降低、扩大瞳孔，也用于重症肌无力

26、、痛经 等疾患，还可作中枢神经系统兴奋剂8/19/2013结构与化学性质 1. 弱碱性 有烃氨基侧链, 仲胺氮 游离碱溶于有机溶剂而盐溶于水 2. 光学活性 手性碳原子当平面偏振光通过手性化合 物溶液后， 偏振面的方向就被旋转了一 个角度。 这种能使偏振面旋转的性能 称为旋光性8/19/20133. 酚羟基特性与重金属离子络合(FeCl3)易氧化呈色4.芳伯氨基特性（盐酸克仑特罗） 5. UV与IR8/19/2013一、鉴别(一) 三氯化铁呈色(二) 甲醛_硫酸呈色 (三) 氧化反应（四）亚硝基铁氰化钠反应(五)8/19/2013UV、IR（四）亚硝基铁氰化钠反应 脂肪伯氨基亚硝基铁氰化钠，

27、无醛丙酮，NaHCO3红紫色脂肪族伯胺专属反应，如重酒石酸间羟胺H C CH NH2 OH CH3 CH(OH)COOH CH(OH)COOHHO8/19/2013（六）双缩脲反应 盐酸麻黄碱CuSO4 OH-蓝紫色乙醚醚层紫红色水层蓝色芳环侧链具氨基醇特征反应8/19/2013双缩脲反应：蛋白质在碱性溶液中与硫 酸铜作用形成紫蓝色络合物的呈色反应 在540nm 波长处有最大吸收。可用于 蛋白质的定性和定量检测。8/19/2013二、杂质检查（一）酮体（其检查方法为紫外-可见 分光光度法） 来源: 酮体 原理: 310nm有吸收氢化还原药物310nm 无吸收方法: 规定药物在310nm处吸收度

28、的限量8/19/2013例 中国药典（2000年版）规定肾上腺素 中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加 盐 酸 溶 液 （ 92000 ） 制 成 每 1ml 中 含 2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸 收度不 得超过 0.05， 已知肾 上腺素 酮在 310nm波长处的为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量。A ?V 1% E1cm L ?100 肾上腺酮% ? ?100% W8/19/2013A ?V 1% E1cm L ?100 肾上腺酮% ? ?100% W 0.05 ?1 453?1?100 ?100% ? 0.06% ? ?3 2.0 ?1?108/1

29、9/2013(二)有关物质检查 来源: 原料，中间体，副产物 方法：薄层色谱法中的高低浓度对照法盐酸去氧肾上腺素与硫酸沙丁胺醇列有 此项检查。8/19/2013TLC（薄层色谱法）系将适宜的固定相涂布于玻璃板上， 成一均匀薄层。待点样、展开后， 根据比移值（Rf）与适宜的对照物 按同法所得的色谱图的比移值（Rf） 作对比，用以进行药品的鉴别、 杂质检查或含量测定的方法。 Rf=溶质移动的距离/溶液移动的距离。 表示物质移动的相对距离。8/19/2013三、含量测定（一）非水溶液滴定法原料药脂烃胺基侧链、芳香第一胺 显弱碱性。详见65页PPT8/19/2013（二）溴量法(盐酸去氧肾上腺素) 原理：H C CH2NHCH3 OH HOBr Br HO8/19/2013 3Br2H C CH2NHCH3 OH Br 3HBr（三）HPLC（重酒石酸去甲肾上腺 素注射液） 调节溶液pH为3.0，加入离子对试剂庚烷基磺酸钠；外标法定量。离子对反相高效液相色谱法8/19/2013（四）比色法Fe3+酚羟基 芳伯氨基呈色 呈色重氮化-偶合反应8/19/2013例1. 能和重酒石酸去甲肾上腺素发生