槐花米中芦丁的鉴定

1、上次实验报告的修订,4,5,图1 聚酰胺色谱柱层析后的收集液的聚酰胺薄膜层析分析图 说明： 图1中的1表示收集液1；2表示收集液2； 3表示收集液3； 4表示芦丁标准品；5表示槲皮素标准品,上次实验报告的修订,结论：因为Rfa= Rfd，说明收集液1是芦丁。 因为Rfb1= Rfd；Rfb2= Rfe，说明收集液2是 芦丁和槲皮素的混合物。 因为Rfc= Rfe；说明收集液3是槲皮素。 所以，用聚酰胺柱层析的方法分离芦丁和槲皮素，用50%的乙醇， 90%的乙醇梯度洗脱时，先从柱子流出的是芦丁，其次是槲皮素,实验五 槐花米中芦丁的鉴定,一、实验目的,掌握硅胶薄层层析鉴定鼠李糖和葡萄糖的方法。 掌

2、握芦丁和槲皮素的化学检识方法,二实验原理,1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上的分配系数不同达到分离的目的。 2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来检识芦丁和槲皮素,三实验操作,一）糖液的硅胶薄层层析 1. 硅胶板的活化； 2. 配制展开剂，正丁醇：醋酸：水 4：1： 5 3. 将展开剂倒入层析缸中，展开缸中展开 剂的高度4mm左右。 4. 画基线，基线距底边1.01.5cm,一）糖液的硅胶薄层层析,5. 点样（点样顺序为：糖液、鼠李糖、葡萄糖），点样一般为圆点，点样直径一般不大于2mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。 6. 将硅胶板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距圆点5mm为宜，一般展距为8c

3、m，取出薄层板，晾干,一）糖液的硅胶薄层层析,7. 喷苯胺邻苯二甲酸试剂，在105下烘10min。 8. 实验结果见图1,二）芦丁、槲皮素及糖的化学检识,1.浓硫酸和浓盐酸反应 取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上，分别加浓硫酸或浓盐酸1滴，注意呈色变化，研磨后溶解成橙色溶液，加较多量的水稀释后转为浅黄色，析出黄色沉淀,2.酸性试验,取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芦丁1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组试管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混

4、浊,3.莫氏（molish）反应,取试样1mg置小试管中，加乙醇1ml溶解，加-萘酚1-2滴，摇匀，倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓H2SO4约1ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应）。比较芸香苷和槲皮素的不同,4.镁粉盐酸试验： 取芦丁1mg，加乙醇2ml在水浴上加热溶解，加入少许镁粉，滴加数滴浓HCl，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。 5.三氯化铝反应： 取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇液2-3滴，黄酮类呈鲜黄色,6.醋酸镁反应,取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映，观察荧光。二氢黄酮，二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光，若有5-OH，色泽更明显。而黄酮，黄酮醇和异黄酮类等显黄色橙色褐色荧光,7. 三氯化铁反应,取样品1mg溶