抑菌圈直径和MIC解释标准

1、缩写： ATCC，美国模式菌种保藏所；CAMHB，调节过阳离子的Mueller-Hinton肉汤；FDA，美国食品和药品管理局；MHA， Mueller-Hinton琼脂；MIC，最低抑菌浓度；MRS，耐甲氧西林葡萄球菌；MRSA，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MOD-SA，修饰的金黄色葡萄球菌；PBP，青霉素结合蛋白；PCR，聚合酶链反应；QC，质量控制；VRSA，耐万古霉素金黄色葡萄球菌；vanA，万古霉素耐药基因。BHI，脑心浸液；AST，抗菌药物敏感性试验； ATCC，美国模式菌种保藏所；BSC，生物安全柜； BSL-2，二级生物安全水平；BSL-3，三级生物安全水平；CAMHB，调节过阳

2、离子的 MuellerHinton肉汤；CDC，疾病预防控制中心；CFU，菌落形成单位；LHB，溶解马血； MHA， Mueller-Hinton琼脂； MIC，最低抑菌浓度；QC，质量控制。抑菌圈直径和MIC解释标准铜绿假单胞菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基: 纸片扩散法：MHA肉汤稀释法：CAMHB琼脂稀释法： MHA接种物: 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5麦氏标准孵育: 35 2 C；空气环境纸片扩散法：16 -18 h稀释法：16 - 20 h (1)对于纸片扩散法，直径150mm平板最大放置12只，直径100mm平板放置5只进行试验(见M02第9.2节)。测量抑菌圈

3、直径（用肉眼判读），包括纸片直径。保持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方几英寸，肉眼观察无明显生长的地区作为抑菌圈边缘。在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。(2)用纸片扩散法和稀释法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜绿假单胞菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育时间延长至24小时。(3)所有抗菌药物在延长治疗期间可致铜绿假单胞菌发生耐药。因此，初次分离的敏感菌株在开始治疗后34不动杆菌属抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法： MHA肉汤稀释法： CAMHB琼脂稀释法： MHA接种物：生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准孵 育： 352C

4、；空气环境；20-24h，所有方法由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌圈内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌圈直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。（2）对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素中介或耐药的菌株可以对多西环素或米诺环素或二者敏感。洋葱伯克霍尔德菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法： MHA肉汤稀释法：CAMHB琼脂稀释法： MHA接种物：生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准孵 育： 352C；空气环境；所有方法，20-24h嗜麦芽窄食单胞菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件

5、培养基：纸片扩散法： MHA肉汤稀释法： CAMHB琼脂稀释法： MHA接种物：生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准孵 育： 352C；空气环境，所有方法，20-24 h由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌圈内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌圈直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。氯霉素：分离于泌尿道菌株不常规报告。其他非- 肠杆菌科细菌MIC解释标准(mg/mL)葡萄球菌属抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：MHA肉汤稀释法：CAMHB； CAMHB+2% NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈夫西林； CAMHB补充

6、 50 g/mL钙用于达托霉素琼脂稀释法：MHA； MHA+2% NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈夫西林；琼脂稀释测试达托霉素还未被批准接种物：直接菌落悬液法，相当于 0.5麦氏标准孵 育： 352C；空气环境纸片扩散法：16-18 h； 24 h (凝固酶阴性葡萄球菌与头孢西丁)稀释法： 16-20 h所有方法：苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林和万古霉素需24h试验温度超过35C可能检测不出MRS(1)对于纸片扩散法，直径150mm平板最大放置12只纸片，直径100mm平板放置5只进行试验(见M02第9.2节)。测量抑菌环直径(用肉眼判读)，包括纸片直径。保持平板在反射光照明的、非反射黑的背景

7、上方几英寸，除外利奈唑胺、苯唑西林、万古霉素应用透射光阅读（平板正对光源）。肉眼观察无明显生长的地区作为抑菌圈边缘。在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌环内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌环直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。在抑菌环内任何可辨别的菌落生长提示苯唑西林、利奈唑胺或万古霉素耐药。(2)过去，将对青霉素酶稳定的青霉素类(见术语表 I)耐药称为“ 耐甲氧西林” 或“ 耐苯唑西林” ， MRSAs是指表达mecA或具有另一种甲氧西林耐药机制，如青霉素结合蛋白与苯唑西林的亲和力

8、改变 (修饰的金黄色葡萄球菌MOD-SA菌株)的金黄色葡萄球菌。(3)对于耐苯唑西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌 (MRS)， 被认为对其它b- 内酰胺类药物，即，青霉素类、b- 内酰胺/b- 内酰胺酶抑制剂复合物，头孢类(新的“ 具有抗-MRSA活性的头孢菌素” 例外)和碳青霉烯类等是耐药。这是因为大多数文献报道了MRS(4)在大部分葡萄球菌中，苯唑西林耐药是由mecA基因介导，此基因编码青霉素结合蛋白2a (PBP 2a,也称为PBP2)。测试分离菌株mecA或PBP 2a阳性应报告苯唑西林耐药。通过苯唑西林MIC、头孢西丁MIC或头孢西丁纸片法测试分离菌株为耐药，应报告苯唑西林耐药

9、。非mecA介导的耐药机制较罕见，包括新的mecA同系物mecC 1 。具有mecC菌株的头孢西丁和/或苯唑西林MICs典型地落在耐药范围；通过直接检测mecA或PBP 2a不能检测出mecC介导的药。(5)由于对常规用于治疗急性、无并发症的泌尿道感染的抗菌药物(如，呋喃妥因、甲氧苄啶磺胺甲恶唑或一种氟喹诺酮)在尿液中可达到浓度的治疗反应是敏感的，因此，不建议对尿液中分离的腐生葡萄球菌进行常规试验。(6)对于某些细菌/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药菌株，因此，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他药敏类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果。 (见附录 A

10、)。(7)- 内酰胺酶、苯唑西林耐药性、使用头孢西丁检测mecA-介导的苯唑西林耐药性、万古霉素敏感性减低、诱导型克林霉素耐药和高水平莫匹罗星耐药(仅金黄色葡萄球菌)等筛选试验，金黄色葡萄球菌查阅表2C补充表1和2，凝固酶阴性葡萄球菌查阅表2C补充表3。另外，使用头孢西丁预报mecA介导的苯唑西林耐药性的进一步解释参见M07-A9第12青霉素酶不稳定青霉素类(8)青霉素敏感葡萄球菌也对葡萄球菌感染有临床疗效的其他- 内酰胺类药物敏感。青霉素耐药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素耐药，包括氨苄西林、阿莫西林、阿洛西林、羧苄西林、美洛西林、哌拉西林和替卡西林。(9)青霉素可被用于测试葡萄球菌对所有青霉

11、素酶不稳定青霉素类的敏感性。青霉素耐药葡萄球菌产生b- 内酰胺酶。当青霉素对葡萄球菌分离株MICs 0.12 g/mL或抑菌圈直径 29 mm，在报告青霉素结果为敏感前，应对葡萄球菌执行- 内酰胺酶试验。罕见葡萄球菌含b- 内酰胺酶基因而b- 内酰胺酶试验结果为阴性。因此，对需青霉素治疗的严重感染，从相同患者随后分离的所有菌株，实验室应测定青霉素MIC和执行诱导- 内酰胺酶试验。也可考虑用PCR测试分离菌株bla Zb- 内酰胺酶基因。见表2C后的表2C补充表1和 3(10)苯唑西林耐药葡萄球菌应报告对青霉素耐药或不报告。青霉素酶稳定青霉素类(11)苯唑西林(或头孢西丁)结果可应用于其他青霉素

12、酶稳定青霉素类 (邻氯西林、双氯西林、氟氯西林、甲氧西林和萘夫西林)。 具有确切临床疗效的抗菌药物，考虑感染部位和适当的剂量，苯唑西林 (头孢西丁)敏感葡萄球菌可考虑对下列抗菌药物也敏感：b- 内酰胺/b- 内酰胺酶抑制剂复合物 (阿莫西林- 克拉维酸、氨苄西林- 舒巴坦、哌拉西林- 他唑巴坦、替卡西林- 克拉维酸)； 口服头孢烯类 (头孢克罗、头孢地尼、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢)； 注射用头孢烯类包括I、 II、 III和 IV代头孢菌素(头孢孟多、头孢唑啉、头孢吡肟、头孢美唑、头孢尼西、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢替坦、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢噻吩、头孢洛林、拉氧头孢)

13、；和碳青霉烯 (多利培南、厄他培南、亚胺培南、美罗培南)。除了新的具有抗MRSA活性的头孢菌素外，耐苯唑西林葡萄球菌对目前所有b- 内酰胺类药物耐药。因此，对各种b- 内酰胺类抗菌药物敏感或耐药结果，可以通过只检测青霉素和头孢西丁或苯唑西林而推测得到。除不建议常规测试其他b- 内酰胺类药物，具有抗-MRSA活性药物除外。见注释 (4)。苯唑西林用于金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌(12)苯唑西林纸片试验不可靠，当使用头孢西丁作为替代试验报告苯唑西林纸片试验结果时见头孢西丁和注释(13)。(13)头孢西丁可被用作苯唑西林的替代品；r 根据头孢西丁结果来报告苯唑西林敏感或耐药。(14)如果用头孢西丁和

14、苯唑西林测试金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌，二种药物中有任一结果为耐药，则应报告受试菌株对苯唑西林耐药。苯唑西林用于除路登葡萄球菌外的凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）(15)对于某些 CoNS，由于某些非表皮葡萄球菌苯唑西林MIC为0.52g/ml，而缺乏mecA基因，因此，苯唑西林MIC解释标准可能高估了耐药性。除表皮葡萄球菌外，对于苯唑西林MIC为0.52g/mlCoNS引起的严重感染，适合于测试分离菌株mecA基因或PBP2a或头孢西丁纸片扩散法敏感性。.万古霉素用于金黄色葡萄球菌。(18)测定所有葡萄球菌分离株对万古霉素敏感性应执行MIC试验。纸片扩散法既不能区别万古霉素敏感与中介金黄色葡

15、萄球菌，也不能区分万古霉素敏感、中介和耐药凝固酶阴性葡萄球菌，对所有分离菌株给出相似大小抑菌圈。(19)除了下述情况外，葡萄球菌纸片扩散法抑菌圈直径大小与万古霉素MIC不存在相关性。30g万古霉素纸片试验可检测含vanA基因的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌 (VRSA)。上述菌株在纸片周围表现无抑菌圈 (直径 = 6 mm)。应确证无抑菌圈分离菌的鉴定结果。对未测定万古霉素MIC，而万古霉素抑菌圈直径 7 mm葡萄球菌分离株，不能报告其对万古霉素敏感。(20)检测到万古霉素 MIC 8mg/mL的任何金黄色葡萄球菌，应送到参考实验室。见附录A。(VRSA)耐万古霉素金黄色葡萄球菌(21)检测到万古

16、霉素 MIC 32mg/mL的任何凝固酶阴性葡萄球菌，应送到参考实验室。(23)分离于呼吸道的菌株不报告达托霉素结果。(24)对试验敏感的葡萄球菌，可使用氨基糖苷类与试验敏感的具有活性的其他药物一起进行联合。大环内酯类(25)对泌尿道分离的菌株不常规报告。四环素类(26)对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素中介或耐药菌株可对多西环素、米诺环素或二者敏感。氟喹诺酮类(27)用喹诺酮类治疗葡萄球菌引起的感染，在延长治疗期间，葡萄球菌敏感株可发展为耐药株。因此，起初敏感菌株在开始治疗后34天内可发展为耐药株。应对重复分离菌株进行敏试验。(29)诱导型克林霉素耐药性可

17、用D-抑菌圈纸片扩散试验和使用单一孔含红霉素和克林霉素的肉汤稀释法进行检测。当前建议见表2C补充表 2和 3，以及 M02-A11第12节和M07-A9第13节总建议。(30)磺胺异噁唑可代表当前使用的任何磺胺药制剂。(31)Rx: 利福平不能单独用于抗菌治疗。a. 检测金黄色葡萄球菌是否产生- 内酰胺酶，青霉素纸片扩散法抑菌圈- 边缘试验比nitrocefin-试验敏感。假如实验室只使用一种检验- 内酰胺酶试验，则推荐青霉素抑菌圈- 边缘试验。然而，某些实验室可选择先执行nitrocefin-试验，如果此试验阳性，报告- 内酰胺酶结果阳性 (或青霉素耐药)。假如nitrocefin试验是阴性

18、，且必须用青霉素治疗的情况下(如，心内膜炎)，在报告青霉素为敏感前，应执行青霉素抑菌圈- 边缘试验。b.3个实验室共研究测试了 168株临床分离的路登葡萄球菌，结果表明使用CLSI参考肉汤微量稀释法（MIC法）和纸片扩散法测试为耐药菌株均产生- 内酰胺酶，并且所有菌株是诱导nitrocefin试验- 内酰胺酶阳性。青霉素纸片扩散法抑菌圈- 边缘试验相比诱导 nitrocefin试验要差些，因此，不用于路登葡萄球菌- 内酰胺酶的检测。假如实验室使用的是一种非 CLSI推荐的参考方法，并且不确定这种方法是否能可靠检出路登葡萄球菌对青霉素耐药性，则在报告分离菌株为青霉素敏感前，实验室应执行诱导nit

19、rocefin肠球菌属抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：MHA肉汤稀释法：CAMHB； CAMHB补充50g/mL钙用于达托霉素琼脂稀释法：MHA；琼脂稀释法用于达托霉素不未被认可接种物：生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准孵 育： 352C；空气环境纸片扩散法：16-18 h稀释法：16-20 h所有方法：测试万古霉素需24 h(1)纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置12只纸片，直径100-mm平板放置5只纸片(见M02第9.2节)。测量抑菌圈直径 (用肉眼判读)，包括纸片直径。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸，但万古霉素需用透射光阅读（平板正

20、对光源），肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌圈边缘。在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。在抑菌圈内任何可辨别的菌落生长提示万古霉素耐药。(2)警告：对于肠球菌属，头孢菌素、氨基糖苷类 (除外高水平耐药筛选)、克林霉素和复方新诺明可以在体外显示活性但临床上治疗无效，因此，对于分离菌株这些药物不应报告为敏感。(3)应用高水平的氨基糖苷类（庆大霉素和链霉素）筛选试验，能够预测氨苄西林、青霉素或万古霉素与一种氨基糖苷类抗生素之间的协同效应。其它的氨基糖苷类不需进行测试，因为它们对肠球菌的活性并不优于庆大霉素和链霉素。(4)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此

21、，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果 (见附录 A)。(5) 氨苄西林是氨苄西林和阿莫西林的代表药。氨苄西林的结果可用于预报不产- 内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感性。假如菌株被确认为粪肠球菌，氨苄西林敏感性能用于预报对亚胺培南的敏感性。(6)对青霉素敏感非产- 内酰胺酶肠球菌可预报其对氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林和哌拉西林/他唑巴坦敏感。然而，对氨苄西林敏感肠球菌不能推定其对青霉素敏感。假如需要青霉素结果，必须对青霉素进

22、行试验。(7)Rx:对严重的肠球菌感染，如心内膜炎，需要氨苄西林、青霉素或万古霉素（敏感株）加一种氨基糖苷类药物进行联合治疗，除非证明其对庆大霉素和链霉素高水平耐药，上述药物联合对肠球菌可起到协同杀菌效果。(8)在肠球菌中，因产b- 内酰胺酶导致的对青霉素或氨苄西林耐药较少报道。用常规纸片法或稀释法不能可靠检测出因产b- 内酰胺酶而致青霉素或氨苄西林耐药，但可使用直接的头孢硝噻吩b- 内酰胺酶试验进行检测。由于罕见b- 内酰胺酶阳性肠球菌，常规不需要做此试验，但可用于选择性病例。b- 内酰胺酶试验阳性预报菌株对青霉素、氨基和脲基青霉素耐药 (见术语表I)。万古霉素(9) 当测试肠球菌对万古霉素

23、敏感性时，为准确检测耐药性，应将平板孵育24h。使用透射光检测抑菌圈；在抑菌圈内出现雾状或任何生长表示耐药。具中介抑菌圈菌株应根据CLSI文件M07-A9描述进行MIC试验。对万古霉素MICs 8-16mg/mL菌株，执行生化试验来鉴别表2D后的表2D补充表1中“ 万古霉素耐药” 栏下列出的菌种。(10)分离于呼吸道的菌株不报告达托霉素结果。红霉素(11) 分离于泌尿道菌株不常规报告。四环素类(12)对四环素敏感菌株也被认为对多西环素和米诺环素敏感，但是，对四环素中介或耐药的某些株可以对多西环素或米诺环素或二者敏感。(14)Rx:利福平不能单独用于抗菌治疗。.磷霉素(15)仅用于泌尿道分离的粪

24、肠球菌。(16)认可的MIC试验方法是琼脂稀释法。琼脂培养基中应补充25g/ml 6-磷酸葡萄糖。不能使用肉汤稀释法。(17) 200-mg 磷霉素纸片中含50mg 6-磷酸葡萄糖。流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：嗜血杆菌试验培养基 (HTM)肉汤稀释法：HTM肉汤接种物：直接菌落悬液法：相当于0.5麦氏标准，从孵育过液(20-24h更适宜)巧克力平板上挑取菌落进行制备 见注释(2)孵 育： 352C纸片扩散法： 5% CO2； 16-18 h肉汤稀释法：空气环境；20-24 h(1)此表中使用的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。其他

25、嗜血杆菌试验和报告建议见CLSI文件M45。(2) 0.5 McFarland菌悬液近似1410 8 CFU/mL。由于高接种物浓度可致某些- 内酰胺类药物出现假耐药结果，尤其试验产- 内酰胺酶流感嗜血杆菌，建议使用者仔细练习制备菌悬液。(3)对于纸扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。测量抑菌圈直径 (用肉眼判读)，包括纸片直径。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸。肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌环边缘。在抑菌环边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌环内可允许出现

26、菌株轻微生长；因此，在测量抑菌环直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。(4)从CSF中分离的流感嗜血杆菌，常规只测试氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美罗培南的药敏结果并适当报告。(5)阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素、克拉霉素、头孢克罗、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢地尼、头孢克肟、头孢泊肟、头孢呋辛和泰利霉素均是口服药物，可用于嗜血杆菌引起的呼吸道感染的经验治疗。这些抗菌药物的药敏试验结果对个体患者的管理用处不大，但是，适用于对嗜血杆菌属耐药性监测及流行病学调查。(6) HTM制备：首先把50 mg氯化血红素粉溶解在100 mL 0.01 mol/L NaOH溶液中，加

27、热搅拌至完全溶解，制成新鲜的氯化血红素原液。再将 30 mL氯化血红素原液加到 1 L含 5 g酵母粉的 Mueller-Hinton琼脂 (MHA)中，高压灭菌并冷却后，无菌手续加入3 mL NAD原液 (50 mg NAD溶解在 10 mL蒸馏水中，过滤除菌)。(7)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“敏感”以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应再确证微生物鉴定和抗菌药物敏感性试验结果。(8)氨苄西林敏感性试验结果可用于预报阿莫西林的活性。大部分耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜血杆菌可产生TEM-型b- 内酰胺酶。大多数情况下，直接b- 内酰

28、胺酶试验可以快速检测对氨苄西林和阿莫西林的耐药性。(9)BLNAR流感嗜血杆菌罕见，这类菌应当被认为对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢克罗、头孢孟多、头孢他美、头孢尼西、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢和哌拉西林/他唑巴坦耐药，即使某些BLNAR菌株对上述药物在体外显示为敏感。四环素类(12)对四环素敏感的菌株也被认为对多西环素和米诺环素敏感。氯霉素(13)从泌尿道分离菌株不常规报告。(14)利福平仅适用于接触者预防。此解释标准不适用于流感嗜血杆菌侵袭性疾病患者的治疗。淋病奈瑟菌抑菌圈直径和 MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：GC琼脂基础1%特定的生长添加剂。 (纸片扩散法不需要

29、使用无半胱氨酸的生长添加剂)。琼脂稀释法：GC琼脂基础1%特定的生长添加剂。 (琼脂稀释法测碳青霉烯类和克拉维酸时需要使用无半胱氨酸的生长添加剂。含半胱氨酸的生长添加剂对稀释法测定其他药物结果影响不显著)。接种物：直接菌落悬液法，在 MHB或0.9%磷酸缓冲盐水（pH 7.0）中，使用巧克力琼脂平板5% CO 2 环境孵育过夜(20-24h)生长的菌落制备，浊度相当于 0.5麦氏标准。孵育：361C (不超过37C)； 5% CO2 ；所有方法，20-24h(1)对于纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。对某些药物，如, 喹诺酮类或头孢菌素

30、类，每只平板只能放置23只纸片进行测试。测量抑菌圈直径（用肉眼判读），包括纸片直径。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸，肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌环边缘。在抑菌环边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。(2)用体外试验呈现产生“ 中介” 结果的头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁和大观霉素治疗淋病瑟奈菌感染的临床疗效是未知的。(3)纸片扩散法测试淋病瑟奈菌，某种抗菌药物试验结果是“ 中介” ，提示或是技术问题，需要重复试验，或者是在处理具有上述抑菌圈的菌株时缺乏临床经验。对于头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁和大观霉素以外的药物产生“ 中介” 的菌株，已有文献报道其临床治愈率

31、(85%-95%)低于敏感菌株治愈率(95%)。(4)推荐的测试淋病奈瑟菌的培养基是含1%特定的生长添加剂的GC琼脂。此添加剂(1升水中加入1.1g L-半胱氨酸、0.03g盐酸鸟嘌呤、3mg盐酸硫胺、13mg对氨基苯甲酸(PABA)、 0.01g维生素B12、 0.1g辅羧酶、0.25gNAD、 1.0g腺嘌呤、10g L-谷氨酰胺、100g葡萄糖和0.02g硝酸铁)是在GC琼脂高压灭菌后加入。(5)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果 (见附录A)。(6)

32、- 内酰胺酶阳性可预报分离菌株对青霉素、氨苄西林和阿莫西林耐药。(7)- 内酰胺酶试验可检测淋病奈瑟菌对青霉素的一种耐药机制，也可以提供流行病学信息。染色体介导的耐药仅可通过纸片扩散法或琼脂稀释MIC法检测出来。(8)淋病奈瑟菌对10单位的青霉素纸片抑菌圈直径19mm，很可能是产生- 内酰胺酶的菌株。但由于- 内酰胺酶试验可快速、准确检出这种质粒介导的青霉素耐药性，所以优于其它敏感性试验方法。(10)淋病奈瑟菌对30mg 四环素纸片抑菌圈直径19mm，常提示这是一株质粒介导的四环素耐药的淋病奈瑟菌(TRNG)。此菌株的耐药性应用稀释试验(MIC 16mg/mL)来确证。肺炎链球菌抑菌圈直径和

33、MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血MHA肉汤稀释法：含 LHB (2.5- 5% v/v) CAMHB(见 M07-A9 LHB制备说明)琼脂稀释法：含绵羊血(5% v/v)MHA；药敏试验分委会近期未对琼脂稀释法进行研究和评估。接种物：直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准，使用绵羊血平板上过夜 (18-20h)生长菌落制备。孵育：35 2C纸片扩散法： 5% CO2； 20-24 h稀释法：空气环境；20-24 h(琼脂稀释法需要放CO 2 环境)(1)对于纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。测量抑菌圈直径 (用肉眼

34、判读)，包括纸片直径。肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌环边缘。不测量溶血抑制圈。移去平板盖反射光照明琼脂平板，从平板表面上方测量抑菌环直径。在抑菌环边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌环内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌环直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。(2)阿莫西林、氨苄西林、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、厄他培南、亚胺培南和美罗培南可用于肺炎链球菌引起感染的治疗；然而，对这些药物纸片扩散法敏感试验检测结果不可靠。最好用MIC方法测定这些药物的体外活性。(3)从脑脊液中分

35、离的肺炎链球菌应当使用可靠的MIC方法(如CLSI M07-A9文件所描述)测试青霉素、头孢噻肟或头孢曲松、美罗培南，并常规报告。对万古霉素的敏感性可使用MIC或纸片法来测定。(4)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果(见附录A)。青霉素类(5)对于非脑膜炎分离株, 青霉素MIC0.06mg/mL (或苯唑西林抑菌圈直径20 mm)能预报对下列- 内酰胺类药物的敏感性：氨苄西林(口服或注射)、氨苄西林- 舒巴坦、阿莫西林、阿莫西林- 克拉维酸、头孢克罗、头孢地

36、尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢洛林、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、多利培南、厄他培南、亚胺培南、氯碳头孢、美罗培南和青霉素 (口服或注射)。(6)苯唑西林抑菌圈直径 20 mm肺炎链球菌对青霉素是敏感的(MIC 0.06mg/mL)。苯唑西林抑菌圈直径 19 mm分离株，应测定青霉素和头孢噻肟或头孢曲松或美罗培南MICs。由于抑菌圈直径 19 mm可发生在青霉素耐药、中介或某些敏感菌株中。苯唑西林抑菌圈直径 19 mm分离株，未测定青霉素MIC，则不报告青霉素耐药。青霉素注射剂(非脑膜炎) (7) Rx: 青霉素MICs 2 g/mL肺炎链球菌引起的非脑膜炎感染的治

37、疗，肾功能正常成年人每4h静脉给药至少200万单位(每天1200万单位)。 MIC为4g/mL中介株，每天需1800-2400万单位青霉素剂量。(8) CSF外分离的所有菌株，应按脑膜炎和非脑膜炎解释标准报告结果。青霉素注射剂(脑膜炎) (9) Rx: 使用青霉素治疗脑膜炎，需用最大剂量静脉给药进行治疗(如，肾功能正常成年人每4h静脉给药至少300万单位)。(15)Rx: 使用头孢噻肟和头孢曲松治疗脑膜炎需用最大剂量。大环内酯类(18)测试红霉素可以预报菌株对阿奇霉素、克拉霉素和地红霉素的敏感和耐药性。(19)从泌尿道分离的菌株不常规报告。四环素类(20)对四环素敏感菌株被认为对多西环素和米诺

38、环素也敏感。(21)对左氧氟沙星敏感肺炎链球菌分离株可预报其对吉米沙星和莫西沙星敏感。然而，对吉米沙星和莫西沙星敏感肺炎链球菌不能推定其对左氧氟沙星敏感。- 溶血链球菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血MHA肉汤稀释法：含 LHB (2.5% to 5% v/v)CAMHB； CAMHB需补充 50 g/mL钙用于达托霉素 (见 M07-A9 LHB制备说明)琼脂稀释法：含绵羊血(5% v/v) MHA； 药敏试验分委会近期未对琼脂稀释法进行研究和评估。接种物：直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准，使用绵羊血平板上过夜 (18- 20h)生长菌落制备。孵育： 3

39、52C;纸片扩散法： 5% CO 2； 20-24 h稀释法：空气环境； 20-24 h (琼脂稀释法需放CO 2 环境)(1)对于纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。测量抑菌圈直径 (用肉眼判读)，包括纸片直径。肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌圈边缘。不测量溶血抑制圈。移去平板盖反射光照明琼脂平板，从平板表面上方测量抑菌圈直径。在抑菌圈边缘需借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。(2)本表中，- 溶血群包括具有A (化脓链球菌)、 C或 G群抗原形成较大菌落的化脓性链球菌及具有B群(无乳链球菌)抗原的菌株。具有A、 C、 F

40、或G群抗原（咽峡炎链球菌，以前称为“ 米勒链球菌” ）形成较小菌落- 溶血的菌株被分到草绿色链球菌中。应使用草绿色链球菌解释标准 (见表2H-2)。(3)青霉素和氨苄西林可用于治疗- 溶血链球菌感染的选择用药。由于在- 溶血链球菌中非敏感株(即，青霉素MICs0.12和氨苄西林MICs0.25g/ml)极其罕见，在化脓链球菌中还未见报道, 因此，FDA批准用于治疗- 溶血链球菌感染的青霉素和其他- 内酰胺类药物，在临床常规工作中不需要进行敏感性试 验。假如试验时发现任何非敏感- 溶血链球菌菌株应重新鉴定和试验，如果确证为非敏感株，应送交公共卫生实验室（进一步说明见附录A）。(4)- 溶血链球菌

41、的解释标准是基于各菌种的群体分布、抗菌药物的药代动力学、以前出版的文献以及分会某些委员的临床经验基础上提议的。对许多药物还没有系统地收集到临床数据用于折点的评估。(5)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果(见附录A)。青霉素类(6)对下列菌群，青霉素敏感的菌株可认为对下列抗菌药物也敏感，当这些药物用于其批准的指征时，不需要再测试这些药物。- 溶血链球菌 (A、 B、 C、 G群): 氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢吡肟、

42、头孢拉定、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑肟、亚胺培南、厄他培南和美罗培南。此外，仅对 A群链球菌还包括：头孢克罗、头孢地尼、头孢丙烯、头孢布烯、头孢呋辛、头孢泊肟和头孢匹林。(8)分离于呼吸道菌株不报告达托霉素结果。大环内酯类(9)测试红霉素可以预报菌株对阿奇霉素和地红霉素的敏感和耐药性。(10)从泌尿道分离的菌株不常规报告。(11)Rx: 分娩期妇女预防B群链球菌感染用药，推荐用青霉素或氨苄西林。低危险性青霉素过敏的妇女推荐用头孢唑啉，而高危险青霉素过敏者，建议使用克林霉素。青霉素、氨苄西林和头孢唑啉敏感的B群链球菌，可对克林霉素和/或红霉素耐药。因此，当从青霉素严重过敏（高危过敏）的

43、妊娠妇女分离到B群链球菌时，应对红霉素和克林霉素 (包括诱导型克林霉素耐药)进行试验, 并仅报告克林霉素结果。四环素类(12)对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。(13)诱导型克林霉素耐药可通过使用D-抑菌圈纸片扩散法和肉汤微量稀释试验来检测。草绿色溶血链球菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血MHA肉汤稀释法：含 LHB (2.5% to 5% v/v)CAMHB； CAMHB需补充50 g/mL钙用于达托霉素 (见M07-A9 LHB制备说明)琼脂稀释法：含绵羊血(5% v/v)MHA； 药敏试验分委会近期未对琼脂稀释法进行研究和评估。接种物：

44、直接菌落悬液法，相当于 0.5麦氏标准，使用绵羊血平板上过夜 (18- 20h)生长菌落制备。孵育： 352C;纸片扩散法：5% CO 2； 20-24 h稀释法：空气环境；20 -24 h (琼脂稀释法需放CO 2 环境)(1)对纸片扩散法，测量抑菌圈直径 (用肉眼判读)，包括纸片直径。肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌圈边缘。不测量溶血抑制圈。移去平板盖反射光照明琼脂平板，从平板表面上方测量抑菌圈直径。在抑菌圈边缘需借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。(2)草绿色链球菌包括下列五个群，每群中含有几个菌种：变异链球菌群、唾液链球菌群、牛链球菌群、 咽峡炎链球菌群 (以前的 米勒链

45、球菌群)和缓症链球菌群。咽峡炎链球菌群包括具有A、 C、 F和 G抗原形成小菌落的- 溶血链球菌。每群中所包括菌种的详细信息，请参见最近的临床微生物学文献。(3)非肺炎链球菌的其他链球菌的解释标准是基于各菌种的群体分布、抗菌药物的药代动力学、以前出版的文献以及分会某些委员的临床经验基础上提议的。对许多药物还缺乏系统的临床数据用于评估其折点。(4)对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“ 敏感” 以外没有标明任何其他类型。如果菌株的结果提示“ 非敏感” ，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果(见附录A)。(5)分离于正 常 无菌部位的草绿溶血链球菌(如，CSF、血液和骨

46、髓)应使用MIC法测试青霉素的敏感性。(6)Rx:青霉素或氨苄西林中介菌株，需与一种氨基糖苷类药物联合进行治疗，起杀菌作用。大环内酯类(8)测试红霉素可以预报菌株对阿奇霉素、克拉霉素和地红霉素的敏感和耐药性。(9)从泌尿道分离的菌株不常规报告。四环素类(10)对四环素敏感菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。脑膜炎奈瑟菌抑菌圈直径和MIC解释标准试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血 MHA肉汤微量稀释法：补充LHB (2.5% to 5% v/v) (见 M07-A9 LHB制备)的CAMHB琼脂稀释法：补充绵羊血 (5% v/v)的MHA接种物：直接菌落悬液法，从巧克力琼脂上挑取35C孵

47、育20-24 h菌落制备；5% CO2 ；相当于0.5麦氏标准。绵羊血平板上生长的菌落可用于接种物的制备。然而，从绵羊血平板制备0.5麦氏标准菌悬液，实际含量大约低于50% CFU/mL。在制备最终稀释浓度接种板条前，应按要求进行菌落计数孵 育： 352C； 5% CO2； 20-24h。(1)警告：应在生物安全柜（BSC）中执行所有脑膜炎奈瑟菌对抗菌药物敏感性试验。在BSC外制作脑膜炎奈瑟菌菌悬液罹患脑膜炎球菌疾病风险增高。实验室获得性脑膜炎球菌疾病有50%致死率。暴露于含脑膜炎奈瑟菌液滴或气溶胶是实验室获得性感染最可能的风险因素。当对脑膜炎奈瑟菌分离株执行微生物学程序时(包括AST)，要求操作人员严防液滴或气溶胶。(2)假如无BSC，应尽量减少对这种分离菌处理，通常仅限制于石炭酸盐水处理后的革兰染色或血清鉴定，操作时穿工作服和戴手套，并在防溅板后面工作。处理高度潜