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文档简介

1、 专题一 传统发酵技术的应用 酵装置要清洗干净;每次排气时只需拧松瓶盖、不要完全揭开瓶盖等。 1 果酒和果醋的制作课题00 35C?25C?制作葡萄醋时,为什么要将温度控制在303制作葡萄酒时,为什么要将温度控制在180左右最适合酵母菌繁殖,因此需要将温度控制在其最 20C温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。1果酒制作的原理00 ,因此要将温度控制在3035C。适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌,最适生长温度为(1)人类利用微生物发酵制作果酒,该过程用到的微生物是 , 3035C 4制葡萄醋时,为什么要适时通过充气口充气? 它的代谢类型是 ,与异化作用有关的方程式有 醋酸菌是好氧菌,再将酒精变成醋酸

2、时需要养的参与,因此要适时向发酵液中充气。 。 P4: 生活状态:进行发酵,产生大量 。 同学:每次排气时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖;制醋时,再将瓶盖打开,盖上一层纱布,进A)果酒制作条件 (2 传统发酵技术所使用的酵母菌的来源是。 行葡萄醋的发酵。 来防止发酵液被污染,因为操作的每一步都可能混入杂菌 PH呈 ;酵母菌生长的最适温度是 ; (3)红色葡萄酒呈现颜色的原因是:酒精发酵过程中,随着 的提高,红色葡萄皮的 B同学:分析果酒和果醋的发酵装置中充气口、排气口和出料口分别有哪些作用。为什么排气口要通 过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接?色。进入发酵液,使葡萄酒呈 充气口:是在醋酸发酵时连接

3、充气泵进行充气用的; )在 、的发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其它微4( 排气口:是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的;生物都因无法适应这一环境而受到抑制。 2果醋的制作原理出料口:是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接,其目的是防止空气中微生物的污染。使用该装置。 )果醋发酵菌种是 ,新陈代谢类型 (1 (2)当氧气和糖源充足时醋酸菌将糖分解成 ,当糖源不足时醋酸菌将 变为 制酒时,应该关闭充气口;制醋时,应将充气口连接气泵,输入氧气。 课题2 腐乳的制作 。再变成醋酸,其反应式 1.制作原理3操作过程应注意的问题 (1)经过微生物的发酵,豆腐中的蛋白质被分解成小分子的

4、 和 ,脂肪被分解成 1()为防止发酵液被污染,发酵瓶要用 消毒。 和 )葡萄汁装入发酵瓶时,要留出大约(2 的空间。 ,因而更利于消化吸收。 (2)腐乳的发酵有多种微生物参与,如 、 、 、 对可通过 d制作葡萄酒时将温度严格控制在3() ,时间控制在左右, 等,其中 起主要作用的是 。它是一种丝状 ,常见 、 、 发酵的情况进行及时的监测。 、 (4)制葡萄醋的过程中,将温度严格控制在 ,时间控制在 d,并注意适时在 上。 菌种直接接种在豆腐上, 条件下,将优良 )现代的腐乳生产是在严格的 充气。 3( 这样可以避免其他菌种的 酒精的检验4 ,保证产品的质量。 )检验试剂:1(。2. 腐乳

5、制作的实验流程: 。条件下,反应呈现 )反应条件及现象:在(2 密封腌制。 让豆腐长出 实验注意事项3. 制作果酒、果醋的实验流程5.,自然条件下毛霉的菌种来自空气中( 挑选葡萄1 )在豆腐上长出毛霉时,温度控制在 的。 近瓶口的加盐量要随着摆放层数的加高而)(2 果醋 果酒将长满毛霉的豆腐块分层加盐, , ,同时也能 表层要。加盐的目的是使豆腐块失水,利于 ;盐的浓度过 的生长。盐的浓度过低, 旁栏思考题P4 。 你认为应该先洗葡萄还是先除去枝梗,为什么?1高, 同时也与豆腐 它能左右,卤汤中酒精的含量应控制在3() 应该先冲洗葡萄,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污

6、染的机会。 微生物的生长, ;酒精含量过 形成有关。酒精含量过高, 乳独特的 你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染?2 。香辛料可以调制腐乳的风味,同时也有低,需要从发酵制作的过程进行全面的考虑,因为操作的每一步都可能混入杂菌。例如:榨汁机、发 作用。 1 (4)瓶口密封时,最好将瓶口 ,防止瓶口污染。 质亚硝胺,亚硝胺对动物有致畸和致突变作用。 3泡菜制作大致流程:原料处理 装坛 P6旁栏思考题 成品 (1)配制盐水:清水和盐的比例为 ,盐水 1.你能利用所学的生物学知识,解释豆腐长白毛是怎么一回事? 后备用。 (2)装坛:蔬菜装至 豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝,在豆

7、腐中还有匍匐菌丝。 时加入香辛料,装至 时加盐水,盐水要 , 盖好坛盖。坛盖边沿水槽中 ,保证坛内 2.王致和为什么要撒许多盐,将长毛的豆腐腌起来? 环境。 (3)腌制过程种要注意控制腌制的 、 和 盐能防止杂菌污染,避免豆腐腐败。 。温度 过高、食盐用量不足10%、 过短,容易造成 , 3你能总结出王致和做腐乳的方法吗? 。 4测亚硝酸盐含量的原理是 让豆腐长出毛霉加盐腌制密封腌制。 。 将显色反应后的样品与已知浓度的 进行比较,可以大致 P7旁栏思考题 出泡菜中亚硝酸盐的含量。我们平常吃的豆腐,哪种适合用来做腐乳?1. 测定步骤:配定溶液 制备样品处理液 含水量为70%左右的豆腐适于作腐乳

8、。用含水量过高的豆腐制腐乳,不易成形。 吃腐乳时,你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是怎样形成的呢?它对人体有2.P9旁栏思考题: 害吗?它的作用是什么?为什么含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶? ,它能形成腐乳的“体”,使腐乳成 “皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝(匍匐菌丝)酸奶的制作依靠的是乳酸菌的发酵作用。抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长,因此含有抗生素形。“皮”对人体无害。 的牛奶不能发酵成酸奶。P8 练习P10旁栏思考题:为什么要随豆腐层的加高而增加盐的含量?为什么在接近瓶口的表面要将盐厚铺 1. 腌制腐乳时,1为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜,不宜多吃腌制蔬菜? 一些?

9、 有些蔬菜,入小白菜和萝卜等,含有丰富的硝酸盐。当这些蔬菜放置过久发生变质(发黄、腐烂)越接近瓶口,杂菌污染的可能性越大,因此要随着豆腐层的加高增加盐的用量,在接近瓶口的表或者煮熟后存放太久时,蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐,危害人体健康。面,盐要铺厚一些,以有效防止杂菌污染。 2为什么泡菜坛内有时会长一层白膜?你认为这层白膜是怎么形成的? 怎样用同样的原料制作出不同风味的腐乳?(可以不看)2形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厌氧微生物,泡菜发酵液营养丰富,其表面氧气在酒和料上作变动 含量也很丰富,适合酵母菌繁殖。红腐乳:又称红方,指在后期发酵的汤料中,配以着色剂红曲,酿制而成

10、的腐乳。 P12白腐乳:又称白方,指在后期发酵过程中,不添加任何着色剂,汤料以黄酒、白酒、香料为主酿练习: 2目前大致包括糟方、使其呈现不同的风味特色,你能总结果酒、果醋、腐乳、泡菜这几种发酵食品在利用微生物的种类和制作原理方面的不同吗?在酿制过程中因添加不同的调味辅料,制而成的腐乳,你能总结出传统发酵技术的共同特点吗?油方、霉香、醉方、辣方等品种。 果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精发酵,青腐乳:又称青方,俗称“臭豆腐”,指在后期发酵过程中,以低度盐水为汤料酿制而成的腐乳, 果醋的制作利用的是醋酸菌将酒精转变成醋酸的代谢,具有特有的气味,表面呈青色。 腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等

11、酶类,酱腐乳:又称酱方,指在后期发酵过程中,以酱曲(大豆酱曲、蚕豆酱曲、面酱曲等)为主要辅 泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸发酵。 料酿制而成的腐乳。 传统的发酵技术都巧妙的利用了天然菌种,都为特定的菌种提供了良好的生存条件,最终的发酵课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 产物不是单一的组分,而是成分复杂的混合物。专题二 微生物的培养与应用 情况狂下,将葡萄糖分解为乳酸。在自然 ,在1乳酸菌代谢类型为 课题1 微生物的实验室培养 界中分布广泛,在 、 、 、 内都有分布。常见的乳酸菌有 和 两种,其中 和 1根据培养基的物理性质可将培养基可以分为 。 常用于生产酸奶。 2亚硝酸盐为 四类营养物质,

12、另外还 、 、 ,易溶于 ,在食品生产中用作 。一般不会危害人体 、 培养基一般都含有2 健康,但当人体摄入硝酸盐总量达 、 需要满足微生物生长对 g时,会引起中毒;当摄入总量达到 以及 的要求。 g时,会 引起死亡。在特定的条件下,如 获得纯净培养物的关键是3 、 。 和 的作用下,会转变成致癌物 2 4消毒是指 P18平板划线操作的讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧 灭菌是指 5日常生活中常用的消毒方法是 ,此外,人们也常使用化学药剂进行消毒,如用 、 接种环吗?为什么? 等。常用的灭菌方法有 、 、 ,此外,实验室里还用 或 操作

13、的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接 进行消毒。 种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。 , , , 6制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤是 划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 。 , 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 。平板划线 7微生物接种的方法中最常用的是 和 以免接种环温度太高,杀死菌种。 。稀释涂布平板 是指 3.在作第二次以及其后的划

14、线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 。 法指 划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数 8菌种的保藏:目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。长成后, ,在合适的温度下培养, (1)临时保藏:将菌种接种到试管的 P19涂布平板操作的讨论个月,转移一次新的培养基。 3 冰箱中保藏,以后每6放入 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想, 或产生变异。 缺点是:保存时间 ,菌种容易被 第 法,放在 2步应如何进行无菌操作? 冷冻箱中保存。 2()长期保存方法: 应从操作的

15、各个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何 其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围;等等。 P15旁栏思考题:P20无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?六、课题成果评价 1.无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1旁栏思考题:P16 2 d后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。 2.培养细菌用的培养基与培养皿(1) 接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基

16、本一致,并符合大肠杆菌菌落的特点,则说明接 玻棒、试管、烧瓶和吸管)(2种操作是符合要求的;如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中,无菌操作还未达到要求,)(3 实验操作者的双手 需要分析原因,再次练习。 )需要消毒。)需要灭菌;()、(1233.是否进行了及时细致的观察与记录 P17倒平板操作的讨论 培养左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温培养基灭菌后,需要冷却到1.50 12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同,及时观察记录的同学会发现这一点,并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 度?P20练习 可以用手触摸盛有培

17、养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板1. 了。提示:可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考。例如,微生物的生长需要水、空气、适宜的温度,食品保存可以通过保持干燥、真空的条件,以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 2.提示:可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行总结归纳。例如,这三种培养 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。技术都需要为培养物提供充足的营养,但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件,而其他两种平板冷凝后,为什么要将平板倒置?3. 技术都要求严格的无菌条件。平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的

18、培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使 3.培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 提示:这是一道开放性的问题,答案并不惟一,重点在于鼓励学生积极参与,从不同的角度思考问题。例如,正是由于证明了微生物不是自发产生的,微生物学才可能发展成为一门独立的学科;在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养4.巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出现,而这一灭菌原理也适用于食品的微生物吗?为什么? 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。保存等。 3 土壤中分解尿

19、素的细菌的分离与计数课题2 P22旁栏思考题 1.想一想,如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?选择分解尿素细菌 之后,才能被植物吸收利用。 分解成 1尿素只有被 答:统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计 培养基。 3个平板,计算出平板菌落数的平均值,然后按 惟一氮源,按物理性质归类为 的培养基特点: 课本旁栏的公式进行计算。 。此项技术的自动 2PCR( )是一种在体外将 P22 聚合酶。 化,要求使用耐高温的DNA63实验室中微生物的筛选应用的原理是:人为提供有利于 生长的条件(包括 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数 10的培养集中,得到以

20、下两种统计结果:1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230,同时抑制或阻止其他微生物生长。等) ;2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板 4选择培养基是指 。 第一位同学只涂布了一个平板,没有设置重复组,因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设 。即当样品的稀释度足够高时,培养 5常用来统计样品中活菌数目的方法是 置重复组的问题,涂布了3个平板,但是,其中就能推测出样 。通过统计平板上的菌落数,1个平板的计数结果与另2个相差太远,说明在操作基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的 过程中可能出现了错误,因此,不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。品中大约含有多少活菌。为

21、了保证结果准确,一般选择菌落数在 P22设置对照 。利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关 的平板进行计数,计数公式是 A 也是测定微生物数量的常用方法。同学的结果与其他同学不同,可能的解释有两种。一是由于土样不同,二是由于培养基污染或 键是 。另外, 操作失误。究竟是哪个原因,可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以由其他同学用 6一般来说,统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 与A同学一样的土样进行实验,如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同 而不是活菌数来表示。 。因此,统计结果一般用学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培

22、养基在不加土样的情况下进 ,提高实验结果的可信度。对 7设置对照实验的主要目的是 行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力, 未满 照实验是 , 。满足该条件的称为 对照的设置是必不可少的。 。 足该条件的称为 P24旁栏思考题 ,具体的实验步骤 、 和 8实验设计包括的内容有: 、 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 以及时间安排等的综合考虑和安排。的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗? 在实验过程中, 。 不同种类的微生物,9往往需要不同的培养 和培养 这是因为土壤中各类微生物的数量(单位:株/

23、kg)是不同的,例如在干旱土壤中的上层样本中: 可落,菌隔一般每24小时统计一次落数目选取菌数目稳定时的记这样果作为结,录好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万,放线菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。因此,为获得不同 。 以 类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 ”之称,同其他生物环境相比,土壤中微生 土壤有“10 P25 结果分析与评价 。 物 、 1培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 潮湿土壤中生长。 11土壤中的微生物约 是细菌,细菌适宜在酸碱度接近 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长,说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏

24、培养基的菌落数 的稀释度不同。 土壤中微生物的数量不同,分离不同微生物采用的 目明显大于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些菌落。 一般来说,在一定的培养条件下,同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落122样品的稀释操作是否成功 等方面。 和 、 的 、 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行 在进行多组实验过程中,应注意做好标记,其目的是13 。 菌落的计数。 对所需的微生物进行初步筛选,只是分离纯化菌种的第一步,要对分离的菌种进行一步的鉴143重复组的结果是否一致 定,还需要借助 的方法。 如果学生选取的是同一种土样,统计的

25、结果应该接近。如果结果相差太远,教师需要引导学生一 氨会使培养基的 将尿素分解成了 在细菌分解尿素的化学反应中,15细菌合成的 。起分析产生差异的原因。 PH , 。因此,我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。 碱性 P26练习 升高,指示剂将 为唯一氮源的培养基中加入 在以 指示剂。培养某种细菌后,如果PH 2.提示:反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微 变 ,说明该细菌能够 。生物多为厌氧菌,接触空气后会死亡,因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外, 4 还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 的另一缺点是:有些微生物

26、具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分。 课题3 分解纤维素的微生物的分离 2.为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?1纤维素是 类物质, 在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应 是自然界中纤维素含量最高的天然产物,此外,木材、 作物秸秆等也富含纤维素。 这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用。 2纤维素酶是一种 酶,一般认为它至少包括三种组分,即 、 P29 六、课题成果评价 正是在这 。 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落:对照的培养基在培养过程中

27、没有菌落 和 ,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成 三种酶的协同作用下,纤维素最终被水解成葡萄糖,为微生物的生长提供营养,同样,也可以为人类 如果观察到产生透明圈的菌落,则说明可能获得了分解纤维素的微生物。生长则说明培养基制作合格。 所利用。2.分离的结果是否一致:由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量,因此最容易分直接对微生物进 3筛选纤维素分解菌可以用 离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同,学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。 法,这种方法能够通过 行筛选。 可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ,但并不和水解后的 P30 练习 分解纤维素,从而使菌

28、落周围形 2.答:流程图表示如下。 发生这种反应。纤维素分解菌能产生 和 。 土壤取样选择培养(此步是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定)梯度稀释 成 4分离分解纤维素的微生物的实验流程图如下: 梯度稀释 将菌悬液涂布到有特定选择作用的培养基上挑选单菌落发酵培养 专题三 植物的组织培养技术 。 课题1 菊花的组织培养 的实验。纤维素酶的发酵 为确定得到的菌是否是纤维素分解菌,还学进行5 方法有 发酵和 发酵。测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 进行定量测定。 1有某种生物全套 的任何一个活细胞,都具有发育成 的能力,即每个生物细胞 都具有 。但在生物体的生长发育过程中

29、并不表现出来,这是因为在 条件下, 通过基因的 P28旁栏思考题 ,构成不同组织和器官。 2. 植物组织培养技术的应用有:实现优良品种的 2中的实验流程有哪些异同? ;培育 作物;制作 种子;培1.本实验的流程与课题 育作物 以及细胞产物的 2本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为惟一 等。 3. 细胞分化:个体发育中细胞在 氮源的选择性培养基上,直接分离得到菌落。本课题通过选择培养,使纤维素分解菌得到增殖后,再 上出现 差异的过程。 4. 愈伤组织是通过 形成的,其细胞排列 将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 ,高度 呈 状态的 为什么要在富

30、含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌?2. 细胞。 5. 植物组织培养的过程可简单表示为:由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分解菌的含量相对提高,因此 诱导丛芽 (脱分化) 愈伤组织 ) ( (生长) 移栽生根新个体 从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 将滤纸埋在土壤中有什么作用?你认为滤纸应该埋进土壤多深?3.6.材料:植物的种类、材料的 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。和 等都会影响实验结果。菊花组织培养一般 选择 作材料。左右腐殖土壤中。10 cm一般应将纸埋于深约 7. 旁栏思考题P29营养:常用的

31、培养基是 培养基,其中含有的大量元素是 ,微量元素 是这两种方法各有哪些优点与不足?你打算选用哪一种方法?想一想,1(两种刚果红染色法的比 ,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。 较)、 、 等植物激素,其 和 激素:在培养基中需要添加8. 方法一是传统的方法,缺点是操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂;其优点是这样等都影响结果。,光照条 PH PH9.环境条件:、等环境条件。菊花组培所需为,温度为 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 方法二的优点是操作简便,不存在菌落混杂问题,缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀。件为 ,计算用粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微

32、生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透 10. 配制各种母液:将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。使用时根据母液的 明圈较为模糊,因为培养基中纤维素占主要地位,因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二稀释。 量,并加 5 2.、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液,你打算做几组重复?你打算设置对照实验吗?11. 配制培养基:应加入的物质有琼脂、 答:教师可以安排学生分组,做不同的材料或配方,最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少,原因是菊花茎毫升。在菊花组织培养中,可以不添加 并用 定容到 要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶,与接

33、种操作后的段组织培养比较容易。 锥形瓶一同培养,用以说明培养基制作合格,没有被杂菌污染。灭菌:采取的灭菌方法是 。 12. (二)练习发酵操作 13答:植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差,对培养条件的要求较高。用于植物组织1.13.1前期准备:用 消毒工作台,点燃酒精灯。注意所有接种工作都必须在酒精灯旁进 培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物。 行,器械使用前后都要用火焰灼烧 朝上,每个锥形瓶接种 个外植体。的污染,就会导致实验前功尽弃,因此要进行严格的无菌操作。接种操作:接种过程中插入外植体时13.2 答:外植体的生理状态是成功进行

34、组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好,容 2.外植体接种与细菌接种相似之处是 。 中进行,并定期进行消毒,保持适宜的 和 。 易诱导脱分化和再分化。13.3培养过程应该放在 课题2 月季的花药培养,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗根部培养基。然后 13.4移栽前应先打开培养瓶的 1. 等环境中生活一段时间,进行壮苗。最后进行露将幼苗移植到 天栽培。(n) 个精子 ) ( 小孢子母细胞(2n )分裂 )分裂 ( ( 课题成果评价 )细胞(n ( (一)对接种操作中污染情况的分析 ( )细胞(n) ( )时期(n) 4 3d后,在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。请

35、学生适时统计污染接种 )细胞核(n ( n)细胞核( ( )期() 单核( n 率,分析接种操作是否符合无菌要求。 (二)是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 ( )分裂 双核期 n)期( 单核( 观察实验结果,看看是否培养出了愈伤组织,记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈 伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。等阶段。花粉是由花粉母细胞经 和 (三)是否进行了统计、对照与记录 育被子植物花粉的发育要经历2. 、 而形成的,因此花粉是 做好统计和对照,填好结果记录表,培养严谨的科学态度。从实验的第一步开始就要求学生做好过 。 个花粉。 个精子;一个小孢子母细胞可以产生 实验记录,可以让

36、学生分组配制不同培养基,如诱导愈伤或直接分化丛芽的培养基,然后做不同配方3.在正常情况下, 在一枚花药中可以产生 产生花粉植物的两种途径的比较。 4. (四)生根苗的移栽是否合格 ) 脱分化 ( 花药中的花粉 生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基,又不能伤及根系。一般使用无土栽培 ) 脱分化 ( 5%可以向培养基质喷洒质量分数为培养基质要提前消毒,的办法。的高锰酸钾,12 并用塑料薄膜覆盖 花药中的花粉 丛芽 是:主要因素中多受种因素影响,其才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天,等壮苗后再定植大田或进行24 hh。掀开塑料薄膜后影高成功株导5. 诱花粉植能否成及诱导功率的低,

37、 盆栽。学生可以在课后统计自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。 等。和 答案和提示 材料的选择:6. (一)旁栏思考题、盛花期、晚花期)的花药;从花药来看,应当选择( 初花期 、双核期、萌发期)的花粉;从花粉来看,应当选择(四分体期、培养基的配方有哪MS中微生物培养基的配方相比,2你能说出各种营养物质的作用吗?同专题1.单核期 、略微开放、完全盛开)的花蕾。从花蕾来看,应当选择(完全未开放 些明显的不同?确定花粉发育时期,此时需要对花粉细胞核进行染色,最常用的染色选择花药时一般通过 7.答:微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐;蔗糖提供碳源,同时能够维持细胞 色。 色和 ,它们分别

38、可以将细胞核染成剂是 和 的渗透压;甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产 8. 在使用焙花青铬钒溶液时,需要首先将花药用 处理培养基则需提供大量无MS生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同,20min。该试剂的配制方法是将 机营养,无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 按体积比为的比例混合均匀。 6 消毒后的花蕾,要在 条件下除去花萼、花瓣。剥取花药时,一是注意不要损伤花药,原因9. ;二是要彻底除去花丝,因原 是 。 是 10. 剥取的花药要立刻接种到 上。 个花药。花药培养利用的培养基是每个培养瓶接种

39、,幼苗形成之前(需要、不需要)光照。在花药培养基中,温度为 培养基,pH为 ;在用量最高的激素是 ;在诱导丛芽或胚状体培养基中,用量最高的激素是 诱导生根的培养基中,用量最高的激素是 。 上进行前者还要转移到20 培养30d后,花药开裂,长出 或释放出胚状体。11. 并转移到新的培养基上。通过愈伤组织形成的植株,常分化培养成再生植株;后者要尽快 的变化,因而需要鉴定和筛选。常会出现 课题成果评价 (一)选材是否恰当 概念: 选材是否成功是花药培养成功的关键。学生应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 原理:细胞的全能性 基础: (二)无菌技术是否过关 如果出现了污染现象,说明某些操作步骤,

40、如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 条件: 脱分化 再分化 (三)接种是否成功 幼苗植物组织培养的基本过程: 外植体 愈伤组织 胚状体 要适时转换培养基,如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体,花药培养的第一步就成功了。菊 花 以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。 外植体的选择的 答案和提示组 营养、环境等影响植物组织培养的因素: 织 (一)旁栏思考题培 植物激素的用法 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难?养 答:花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药,给材料的消毒带来困难。 pH、光照等温度、植物 (二)练习 栽培接种 移栽 培养 MS实验操作: 制备培养基 外植体消毒组 1.答:

41、AAsusuAasusu代紫色甜玉米的基因型组成可能为或。如果运用常规育种方法,将F2F2织培 代中的紫色甜玉米与白色甜玉米(aasusu)进行测交,可以选择出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。粉母细胞减数分裂小孢子母细胞四分体时期花被子植物花粉的发育: 养 但这种方法比较繁琐,耗时也较长,需要至少三年的选种和育种时间。如果利用花药培养的技术,在 单核期双核期精子 代产生的花粉中就可能有F1Asu的组合,再将花粉植株进行染色体加倍,就可以直接得到紫色甜玉米月 产生花粉植株的两种途径:季 AAsusu的纯合体()。这种方法可以大大缩短育种周期。 分化 脱分化的 2.答:植物组织培养技术与花药培

42、养技术的相同之处是:培养基配制方法、无菌技术及接种操作 胚状体 花药中的花粉 诱导丛芽花 移栽生根药 再分化 等基本相同。两者的不同之处在于:花药培养的选材非常重要,需事先摸索时期适宜的花蕾;花药裂 脱分化培 花药中的花粉 丛芽愈伤组织 开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基;花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些养 都使花药培养的难度大为增加。 主要因素:材料的选择与培养基的组成 影响花药培养的因素: 重要因素:选择合适的花粉发育时期 低温处理和接亲本植株的生长条件、影响因素: 种密度等 5 DNA和蛋白质技术专题 材料的选取:确定花粉发育时期的方法 7 实验操作: 材料的消毒:

43、接种和培养: (一)DNA的粗提取与鉴定 (2)要提取洋葱等的DNA时,加入洗涤剂后,动作要,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤地操作。 1. 实验原理(3)加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要,以免,导致DNA提取生物大分子的基本思路是。分子不能形成絮状沉淀。 等在物理和化学性质方面的粗提取而言,就是要利用与、对于DNA(4)二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。 ,去除其他成分。的差异,提取DNA(5)当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,随浓度的升高,DNA的溶解度;当NaCl溶 DNA的溶解性(1)液浓度高于0.14mol/L时,随浓度升高,DNA的溶解度。 和蛋白质等其他成分在不同浓度的溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的DNA 盐浓度就能使充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。专题六 植物有效成

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