普通生物化学

1、1) 生物化学是用化学的原理和方法，从分子水平来研究生物体的化学组成（多糖，脂肪，蛋白质，核酸等），及其在体内的物质代谢转变规律（生长，发育，生殖，代谢，遗传，运动等）从而阐明生命现象本质的一门科学。2) 糖（葡萄糖，果糖，半乳糖，核糖脱氧核糖）氨基酸及侧链碱基及相应核苷，核苷酸，环核苷酸脂类元件（甘油，脂肪酸，胆固醇，胆碱，肌醇）3) 氨基酸的平均分子量1204) 催化、结构、运输、运动、调节、贮存、防御、感觉、遗传调控、其他5) 谷胱甘肽：谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸，谷氨酸以-羧基成键 SH 酸性肽 还原剂6) 神经肽 环状八肽 莪蒿素 环状十肽蛋白质 许多氨基酸通过肽键连接而成的大分子含氮

2、化合物。干重45% 脾肺80%蛋白质含量=6.25*样品含氮量茚三酮：570nm 含苯环氨基酸 280nmAnfinsen 的核酸酶A的变性复性实验溶剂 PH 氨基酸序列弱相互作用 非共价键 次级键 氢键 范德华力 疏水相互作用 盐键离子键 二硫键1) 疏水塌缩模型、自由能漏斗模型 2) 分子伴侣：与部分折叠、错误折叠的蛋白质结合并帮助其正确折叠和成熟的一类蛋白质。热休克蛋白 伴侣蛋白 二硫键异构酶 肽酰脯氨酸顺反异构酶囊肿性纤维化 疯牛病 3) 测定蛋白质三维结构的方法： 蛋白质晶体学 核磁共振波谱学 电镜三维重构4) 两性解离 等电点、胶体性质（透析、超滤、盐析法）5) 蛋白质的测定： 双

3、缩脲反应 酚试剂反应 茚三酮反应 280nm紫外吸收光谱6) 丙酮沉淀 盐析沉淀 免疫沉淀 超速离心 沉降系数7) 分离纯化： 抽提 粗分离 纯化柱层析 分子排阻层析 分子量大的先流出离子交换层析亲和层析 抗体-抗原 凝集素-糖蛋白 底物类似物-酶酶活力单位：在25C 和最适条件下，一分钟催化1.0mol底物转化所需的酶量为一个酶活力单位.总活力 比活力8) 电泳 分离 鉴别蛋白质纯度 测定分子量 测定等电点9) 质谱SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳 等点聚焦电泳 双向凝胶电泳1) 纤维蛋白 简单规则的线性结构 支持保护作用 高抗拉强度 角蛋白、丝蛋白、胶原蛋白卷曲螺旋-原丝-初原纤维-中间丝 螺旋

4、 二硫键 丝心蛋白 反平行折叠 富含Ala Gly胶原蛋白 左手螺旋 3条 Gly-X-Y 2) 肌红蛋白 血红蛋白结合蛋白 辅基 脱辅基蛋白血红素辅基 Fe2+肌红蛋白 含一个血红素的单链球蛋白 游离的血红素Fe2+可以被O2不可逆氧化 配基 结合位点 配基结合分数空间位阻 氢键 O2 CO T-state R-state 别位效应S形曲线 协同效应齐变模型 序变模型血红蛋白 别构蛋白 别构调节 H+ CO2 BPG2,3-二磷酸甘油酸 -6 Glu Val3) 免疫系统 免疫球蛋白抗原：能引起免疫应答的分子或病原体，如病毒、细胞、细菌细胞壁、其它大分子。诱导契合：配基的结合往往诱导蛋白构象

5、发生变化，使结合更紧密多克隆抗体 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析 免疫印迹 免疫荧光4) 肌动蛋白 肌球蛋白 分子马达肌球蛋白 六个亚基 两重四轻 头部 尾部 粗肌球蛋白丝肌动蛋白 细肌动蛋白丝模体(motif): 数个至数十个AA组成的具有自身相对独立构象和功能的小区域，模体可构成结构域，也可独立存在。 核酸 吸收波长260nm酸水解 糖苷键磷酸酯键 嘌呤嘧啶 RNA碱水解 酶促水解 RNA DNA 内切酶 外切酶 DNA限制性内切酶肺炎双球菌转化实验 T2噬菌体共价闭合环状 开环 线性DNA 三级结构连环数L=扭转数T+超螺旋数WDNA链 核小体链 纤丝 玫瑰花结 螺线圈 染色体tRNA CCA原核 先导区 翻译区 多顺反子 末端序列 真核 帽子 单顺反子 尾巴1OD 260 50mg/ml DNA双链 40mg/ml RNA离子强度 碱基组成 碱基错配DTm = 16.6 log Na1+ / Na2+ Tm = 0.41 (%GC) + 69.3DTm = -1C x % mismatch for n 50 bp核酸的凝胶电泳 溴乙锭EB变性 95 退火50-60 延伸72 模板 一对引物 DNA