医学免疫学：11免疫学检测、免疫预防

1、免疫学检测原理,免疫学检测指借助免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子等进行定性或定量检测。,概念：,第一节 抗原-抗体反应的检测方法 (Antigen-antibody Reaction),Immunology,一、抗原抗体反应的特点： 1. 高度特异(specificity)：一切血清学反应的基础。 两种不同的Ag分子上具相同Ag决定簇(共同抗原，common antigen) ，则可发生交叉反应(cross reaction)。,2. 最适比(optimal ratio),3. 可逆性(reversibility) Ag+Ab Ag-Ab 动态

2、平衡，一定条件下可逆。 解离程度，除受环境条件（如低pH、高浓度盐、冻融等）影响之外，主要取决于Ag-Ab的亲和力。,二、影响抗原抗体反应的因素 1.Ab-Ag 性质。 浓度。 种类。 特异性和亲合力。,2. 电解质 适量电解质使抗原抗体结合呈现明显的沉淀或凝集。 常用生理盐水(8.5g/L, 0.9% NaCl)的溶液作为抗原和抗体稀释剂。,Immunology,3. 酸碱度 合适的pH环境。 血清学反应-pH68。,4. 温度 一般1540，最适37。某些需特定最适温度，例如冷凝集素在4与红细胞结合最好，20以上解离。,三、抗原抗体反应的基本检测方法 凝集反应。 沉淀反应。 标记技术。,细

3、菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，此为凝集反应。,（一）凝集反应（agglutination),1 直接凝集反应 细菌和红细胞等颗粒抗原，直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应（direct agglutination）。凝集反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin）。,2、间接凝集试验 将可溶性抗原(或抗体)吸附或偶联于与免疫无关的颗粒上成为致敏载体颗粒，再与相应抗体(或抗原) 出现特异性凝集现象。又称被动凝集试验(passive agglutination test),阳（阴）性对照,胶乳试剂,混匀

4、,实验步骤,RF检测试剂,3：凝集抑制试验HCG检测,原理：待测抗原与特异性抗体先行混合并作用一定时间，再加入相应抗原-载体悬液；若待测抗原与抗体对应，即发生中和，随后加入的相应抗原-载体颗粒不再被凝集，使本应出现的凝集现象被抑制。 HCG 人绒毛膜促性激素,（二）沉淀反应（precipitation ),可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见沉淀,单向免疫扩散(single immunodiffusion),(double immunodiffusion),（三）免疫标记技术（immunolabelling technique）,标记免疫技术=,免疫技术+标记技术,标记免疫技术,示踪物及 标记技术,

5、免疫荧光法(IF) 酶免疫测定(EIA) 放射免疫测定法(RIA） 化学发光免疫分析 免疫印迹法(immunoblot),酶联免疫吸附试验 enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),双抗体夹心法,免疫荧光实验,第二节 免疫细胞的检测,一、免疫细胞及其亚类计数 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞亚群分离 淋巴细胞亚群计数 二、淋巴细胞功能测定,Immunology,Table of Content,S1: 免疫细胞的分离 P1: 外周血单个核细胞分离 P2: 淋巴细胞的分离 P3: T细胞与B细胞的分离 S2: 淋巴细胞亚群的分离,外周血单个核细胞分离,外周

6、血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞 分离原理：不同细胞密度不同 人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞密度为1.075-1.090,密度梯度离心法,稀释的外周血,淋巴细胞分离液,血浆层,单个核细胞层,淋巴细胞分离液,红细胞和粒细胞层,Table of Content,S1: 免疫细胞的分离 P1: 外周血单个核细胞分离 P2: 淋巴细胞的分离 P3: T细胞与B细胞的分离 S2: 淋巴细胞亚群的分离,淋巴细胞与单核细胞的分离,粘附分离法 原理：单核细胞具有黏附玻璃和塑料的特性,Table of Content,S1: 免疫细胞的分离 P1: 外周血单个核细胞

7、分离 P2: 淋巴细胞的分离 P3: T细胞与B细胞的分离 S2: 淋巴细胞亚群的分离,T细胞与B细胞的分离,E花环形成分离法 尼龙棉吸附分离法 原理：不同细胞表面生物学特性不同,Table of Content,S1: 免疫细胞的分离 P1: 外周血单个核细胞分离 P2: 淋巴细胞的分离 P3: T细胞与B细胞的分离 S2: 淋巴细胞亚群的分离,淋巴细胞及亚群的分离,原理：细胞表面分化抗原不同 Th： CD3+CD4+CD8- CTL：CD3+CD4-CD8+ Tr： CD4+CD25+ NK: CD3-CD56+CD16+,流式细胞仪（flow cytometer,FCM) 分离法,FCM

8、能快速、精确地测量通过检测区液流中的各种粒子。 这些粒子可以是细胞、大分子、乳胶滴或其他粒子。 流式细胞术(FCM)是对单细胞定量分析和分选的新技术。,一系列的流式细胞仪可供选择,二、淋巴细胞功能测定 淋巴细胞增殖试验：3H-TdR掺入法、MTT法、形态学计数法 细胞毒试验：51Cr释放法、LDH酶释放法、TUNEL法 分泌功能测定：ELISPOT、溶血空斑试验 体内试验：皮肤试验,Immunology,免疫预防,Immunoprophylaxis,免疫预防 (immunoprophylaxis),通过人工输入抗原物质或直接输入免疫效应物质，从而使用机体获得特异性免疫力的疾病预防方法。,49,

9、本章主要内容,人工免疫的概念及种类 疫苗的原理与基本要求 疫苗的种类与应用 疫苗接种的临床注意事项,50,人工免疫(artificial immunization)及种类,概念 有计划、有目的地给人体接种抗原或输入免疫细胞(或抗体)，使机体获得对某种传染病的特异性抵抗力，从而达到预防或治疗某些疾病的方法。 分类 分为人工主动免疫和人工被动免疫,51,人工免疫(artificial immunization)及种类,人工主动免疫 人工给机体接种抗原物质，使其产生特异性免疫应答，从而获得对某种传染病的特异性抵抗力。 用于人工接种抗原性物质，叫疫苗vaccine 人工被动免疫 人工给机体接种免疫效应

10、分子，使其获得特异性抵抗力。,52,人工主动免疫与人工被动免疫的比较,53,本章主要内容,人工免疫的概念及种类 疫苗的原理与基本要求 疫苗的种类与应用 疫苗接种的临床注意事项,54,疫苗的原理与基本要求,激发保护性免疫应答条件 保护性抗原 佐剂 (第二信号) 接种途径、接种对象、接种时间、接种剂量、次数与间隔,55,56,作为疫苗的基本要求,安全 无致病性 接种后副作用少 接种禁忌症 有效 能够激发特异性免疫应答 能够激发保护性免疫应答 实用 便于制备、保存、运输、接种,本章主要内容,人工免疫的概念及种类 疫苗的原理与基本要求 疫苗的种类与应用 疫苗接种的临床注意事项,57,传统疫苗,减毒活疫

11、苗（live-attenuated vaccine） 用人工诱变或从自然界筛选出的毒力高度降低或无毒的活的病原微生物制成的疫苗。 可模拟自然发生隐性感染，诱发理想的免疫应答而又不产生临床症状,58,传统疫苗,灭活疫苗（inactivated vaccine） 又称死疫苗，是用化学或物理的方法，将具有感染性的完整的病原微生物杀死，使其失去传染性而保留抗原性而成。,59,灭活疫苗与减毒活疫苗比较,60,传统疫苗,类毒素（toxoid） 细菌外毒素经去毒处理而制成。 白喉类毒素、破伤风类毒素,61,新型疫苗,亚单位疫苗 由病原体有效成分制备而成 结合疫苗 细菌多糖与载体蛋白偶联而制成 合成肽疫苗 人

12、工合成抗原肽而制成,62,新型疫苗,基因工程疫苗 重组抗原疫苗乙肝疫苗 重组减毒活疫苗 核酸疫苗 转基因植物疫苗,63,核酸疫苗,突出优势 省去抗原蛋白制备的过程 可激发CTL应答 最大顾虑 进入动物体内后所引起基因突变的可能性,64,本章主要内容,人工免疫的概念及种类 疫苗的原理与基本要求 疫苗的种类与应用 疫苗接种的临床注意事项,65,疫苗接种的临床注意事项,适应证与禁忌证 接种时间 接种剂量、次数 接种途径 接种后副反应 疫苗事故,66,乙肝疫苗的适应证,所有儿童和18岁以下青少年，如既往未接种过乙肝疫苗，应予以接种。此外，应对有乙肝感染高度危险的特定人群进行接种，如有高危性行为者、HB

13、sAg阳性者的伴侣和家人、注射吸毒者、需要频繁使用血液和血液制品者、实体器官移植接受者、职业暴露于HBV感染者（含医务人员）、前往HBV流行国家的国际旅行者。WHO,接种禁忌证,免疫缺陷病、恶性疾病、严重心血管疾病及免疫功能受抑制者，不能接种减毒活疫苗 正患发热或明显全身不适的急性疾病者，应推迟接种 过往接种有严重不良反应者，不应继续接种 有神经系统疾病患儿，不能接种含百日咳抗原的疫苗 孕妇不应接种减毒活疫苗,68,疫苗接种的临床注意事项,接种时间 婴幼儿应按国家计划免疫的规定时间进行接种 对特定传染病的预防，一般在流行季节到前1个月完成接种。 突发传染病则应尽快接种。,69,疫苗接种的临床注

14、意事项,接种剂量、次数 不同类别的疫苗有所不同 死疫苗接种剂量大，需2-3次，间隔7-10天 活疫苗一般只需接种1次 类毒素接种2次，间隔4-6周,70,疫苗接种的临床注意事项,71,接种途径,疫苗接种的临床注意事项,接种后副反应 接种后不良反应 常在24小时内发生 局部表现为红肿、疼痛、淋巴结肿大、 全身反应可见发热、恶心等 通常在数天内自愈或仅需一般处理 不会引起受种者机体组织器官、功能损害,72,疫苗接种的临床注意事项,接种后副反应 预防接种后的异常反应 指合格疫苗在规范接种过程中或接种后造成受种者机体组织器官、功能损害。 异常反应的发生率极低，病情相对较重，多需要临床处置。 我国每年预防接种大约10亿剂次，但是经调查诊断与疫苗有关且较为严重的异常反应很少，发生率很低。,73,疫苗接种的临床注意事项,