2012仪器分析咳咳基本囊括所有考点

1、血细胞分析仪 ( Blood Cell Analyzer ) 是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的常规检验仪器。血液分析仪主要完成以下两大功能: 血细胞计数：红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白。 血细胞分类：白细胞中的 淋巴、中性、嗜酸、嗜碱、 单核、幼稚细胞；红细胞中的网织红细胞。 血细胞计数: 早期的血液分析仪主要用来计数红、白细胞 白细胞分类计数:带电脑的显微镜下辨认细胞的图象识别技术效率低，受制片、染色技术的影响大在计数细胞数不多时，重复性较差检测白细胞从二分群、三分群发展到五分群半自动血细胞分析仪； 全自动血细胞分析仪；按自动化程度 血细胞分析工作站；血细胞分析流水线；按检测

2、原理 电容型、光电型、激光、电阻抗型、联合检测型 、干式离心分层型、无创型按对白细胞分类的水平：二分群、三分群、五分群、五分群 + 网织红（红细胞）小孔电阻抗法测定原理 在负压的吸引下血细胞依次通过小孔， 依次排开等体积电解液； 小孔截面内的电解液电阻值的变化，在恒流源的负载电阻上引起等比例的电压变化，产生电压脉冲；电压脉冲的个数与细胞个数相当，脉冲幅度与细胞体积成正比。将脉冲送入相应的计数通道，通过计算得到某类细胞个数。 采用Coulter原理， 即小孔电阻抗法装有宝石小孔的小孔管置与小孔管内外的铂金电极两电极间的恒流电源小孔上端的恒定负压 在进行血细胞分析时，白细胞和血红蛋白为一个检测通道

3、（小孔直径为100m)；红细胞和血小板为一个检测通道(小孔直径为70m）。结果采用直方图显示。 联合型检测法基本原理单纯依靠细胞体积大小来进行白细胞五分类是难以做到的。必须采用一些其他检测手段联合应用来进行白细胞五分类。（联合检测型）常用方法有：高频电磁波（或称射频）传导法、细胞化学染色法、特殊溶血剂法、激光散射法（测不同角度的散射及激发光） 其白细胞总数、红细胞、血小板及血红蛋白的测定方法仍基本沿用“三分类”型分析仪的方法。 绝大多数五分类血细胞分析仪在检测通道上都采用了流式细胞分析技术。流式细胞分析技术的检测光路可分为鞘流通道、激发光源（多为激光）、散射光检测、吸收光检测、荧光检测等几个方

4、面。散点图 ：五分类血细胞分析仪白细胞分类结果均采用散点图的形式来显示。红白细胞总数血小板仍采用直方图显示。图中纵坐标为体积;横坐标为吸光度。各种不同类型的白细胞根据其体积与吸光度的的数值标记在二维坐标的相应位置。几种有代表性的白细胞五分类型分析仪电阻抗DC 高频传导RF和激光散射Scatter联合检测法：即所谓VCS技术V代表体积，采用电阻抗法计数血细胞和测量其体积C 代表传导性，主要测量血细胞内部的结构，细胞内核浆比例S代表散射，用于测量细胞表面不同的结构及颗粒单一通道上同时用着三种方法对同意白细胞进行测量，在三维的图上将个细胞较好地分开，准确分类。激光散射和细胞化学染色联合检测法 稀释液

5、中加入髓过氧化物酶MPO的第五，过氧化氢和色原可使MPO的细胞胞浆染色，由于不同种类白细胞含MPO不同，因此可以通过染色的深浅加以分别。加入特殊溶血剂使得除嗜碱细胞以外的细胞全部裸核化。用两个流式通道进行测定，髓过氧化物酶通道（卤素灯光源，侧吸光度与散射光）；嗜碱性/核叶通道（激光光源，测高角度散射光与低角度散射光）。通道还同时进行红细胞、血小板及网织红细胞的测定。多角度激光偏振光散射检测电阻抗联合检测法完全用激光散射方法进行白细胞分类，其测散射光所用的角度为四个，即0，10，90和90消偏振。电阻抗和射频传导联合检测特殊溶血剂法：淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测通道（DC+RF）嗜碱性细胞

6、检测通道（特殊溶血剂）嗜酸性细胞检测通道（特殊溶血剂）幼稚细胞检测通道（硫化氨基酸）血液分析仪网织红细胞检测原理：用激光流式细胞分析技术与细胞化学荧光染色技术联合对Rct分析，即利用网织红细胞中残存的碱性物质-RNA，在活体状态下与特殊的荧光染料结合，激光激发产生荧光，荧光强度与DNA含量成正比，用流式细胞技术检测单个的网织红细胞的大小和细胞内RNA的大小和细胞内RNA的含量及Hb的含量，由计算机数据处理系统综合分析检测数据，得出网织红细胞计数及其他参数。血细胞分析仪结构机械部分：自动进样器、分血器、稀释器、混匀器、定量装置、正负压泵、马达、电磁阀。电子部分：主电源、温度控制、液位控制、压力控

7、制运动控制、信号处理、故障报警。血细胞检测系统：小孔法电阻抗检测系统，主要用于白细胞“二分群”、“三分群” 。光散射检测系统，与小孔阻抗检测系统联合使用，用于白细胞“五分群”。血红蛋白测定系统：由光源、透镜、滤光片、流动比色池、光电传感器构成波长为530nm-550nm的流动比色系统。计算机存储处理系统：白细胞“五分群”的血细胞分析仪多采用仪器内部微处理器加外部计算机的系统形式。采用这种方式能够使仪器处理标本的速度更快，存储量更大，图形结果显示更为方便。 微生物检验净化工作台是一种装有高效过滤器(HEPA)能够在工作台面上保持提供洁净空气的装置。根据不同规格的高效过滤器分别提供100级，100

8、0级，10000级的空气洁净度。净化工作台根据气流方向分为垂直气流通风方式和水平气流通风方式两种。净化工作台只能在工作台面保持洁净空气，但不能对操作人员和环境提供保护。生物安全柜是进行生物实验最常使用的操作设备，是防止操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物发生气溶胶散逸的箱形空气净化负压安全装置。功能：可以为操作人员提供一个安全的屏障，对可能导致感染的病原体与实验验室人員加以隔离，並使实验室的內外环境均可获得过滤的干净空气。生物安全柜的基本工作原理特殊的气流设计使柜体开口处将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流保护工作人员；外界空气经过高效过滤器进入安全柜，产生洁净垂直向下的气

9、流形成洁净工作区，以避免处理样品被污染；柜内的空气经过另一高效过滤器再排放到大气（环境保护）安全柜的使用其最终目的在于提供人员、环境及样品适当的防护与品质生物安全水平(1-4级)是由美国疾病预防控制中心(CDC)和国家健康研究院 (NIH) 共同颁布的。生物安全1级的媒质：普通无害细菌、病毒等微生物 ；生物安全2级的媒质：一般性可致病细菌、病毒等微生物；生物安全3级的媒质：烈性/致命细菌、病毒等微生物，但感染后可治愈；生物安全4级的媒质：烈性/致命细菌、病毒等微生物，感染后不可治愈。生物安全柜的分类目前根据欧洲 EN12469标准；美国 NSF49标准，中国YY0569-2005 标准， 生物

10、安全柜可分为三个级别。 分类生物安全级别应用Class1、2、3低,中等生物风险样品Class1、2、3低,中等生物风险样品Class4高等生物风险样品NSF分类一般描述ClassType A170%气体循环，30%气体经HEPA过滤排出（正压）ClassType A270%气体循环，30%气体经HEPA过滤排出（负压）ClassType B130%气体循环，70%气体经HEPA过滤专用风道排出ClassType B2无气体循环，100%气体经HEPA过滤专用风道排出Class生物安全柜能够提供对人和环境及样品的保护，该级别的生物安全柜广泛应用于医院临床、生命科学、和制药业实验室。Class生

11、物安全柜采用特殊的气流设计，使进入操作区可能遭受污染的气体以不流经操作台面为原则，为柜內提供一个洁净环境使无菌的操作得以完成。前部工作开口可以维持合适的箱内气流，箱内有经过HEPA过滤垂直向下无指向的气流。排出的气流经过HEPA过滤排到室内或专用管道。细胞培养箱是一种进行细胞培养的实验室仪器。其主要功能是通过模拟生物体的温度、湿度、调节培养液pH值等条件进行生物细胞的培养。细胞培养箱根据其模拟生物体功能的不同可以分为温度培养箱、霉菌培养箱、二氧化碳培养箱、三气培养箱，厌氧培养箱等分类1电热恒温培养箱 550 隔水式 气套式 没有制冷装置 所以实际温度高于环境温度582 低温恒培养箱 加入制冷装

12、置 -1050 霉菌培养箱3 二氧化碳培养箱 最为广泛 PH值可调 浓度控制在020%（热导T/C传感器；红外IR传感器）湿度95%4 三气培养箱 CO2基础上再加入氧气氮气。自动血培养仪 工作原理:主要通过自动监测培养基中的混浊度、PH值、代谢终产物CO2的浓度，荧光标记底物或代谢产物等的变化，定性地检测微生物的存在 培养系统 培养瓶（需氧 厌氧 小儿专用 结核菌 高渗中和抗生素 ）培养仪（恒温装置，震荡培养装置） 数据管理系统 检测系统 自动血培养检测系统的工作基础：检测细菌和真菌生长时所释放的CO2来作为血液中有无微生物存在的指标。 仪器采用的原理： 1导电性和电压为基础的血培养系统2应

13、用测压原理的血培养系统：ESP系列；灵敏的自动化菌血测试系统 3用光电原理检测的血培养系统 Bio-Argos系统Bact/Alert系统Bacter9000系列（荧光增强技术）Vital系统（荧光衰减技术）Alert原理：每一个培养瓶底部都有特殊的Novel CO2感应器，有半渗透性薄膜将培养基与感应器隔离，只有CO2能通过薄膜。当培养瓶内有微生物生长，其释放的CO2可渗透至感应器，经水饱和后产生H+,使pH发生变化，感应器的颜色也随之改变，可从原来的深绿色变为黄色。9000原理：用荧光探测技术连续测定封闭培养瓶内微生物代谢引起的CO2浓度变化以检测是否有微生物生长繁殖。微生物在生长过程中消

14、耗培养瓶内的营养物质，代谢引起的CO2浓度变化，而CO2浓度改变可直接激活培养瓶底部包埋的对CO2浓度变化高度敏感的荧光物质，在二极管的激发下荧光物质释放荧光，LED（光电比色检测仪）将连续探测到的荧光强度输入计算机，绘出微生物生长曲线。荧光强度变化可直接反应培养瓶内CO2浓度变化。 阳性瓶的判断：荧光的线性增加或荧光产量的增加Vital系统(荧光衰减技术)原理：采用均质荧光技术检测微生物的生长。液体培养基内含有荧光物质的分子，微生物在生长代谢过程中可产生质子（培养基变酸）、电子(培养基还原)和各种带电荷的原子团（CO2 、HCO3-），荧光分子接受了这些物质后，结构发生变化而成为无荧光的化合

15、物。用一个独特的光学系统检测每个培养瓶发出的荧光，用于判断其中有微生物存在。微生物数码分析鉴定系统 微生物数码分析鉴定是一种微量、快速的微生物鉴定系统。根据细菌的生物学性状及代谢产物的差异，采用多种生化反应系统鉴定细菌，一般由1024项生化指标组合而成，通过对结果的判定，得出一个37位得数据，查阅编码手册即可获得相应的细菌名称。与计算机联合应用，快速简便。 种类API系统；Micro-ID系统；Minitek系统；肠杆菌-MB12E系统；氧化发酵鉴定系统API鉴定系统原理：半自动化鉴定系统，采用数值鉴定法，将测试菌加入试验条，在普通孵育箱孵育1824h再加入附加试剂，根据各种颜色变化，人工判读

16、结果，再转换成数码 API采用的是新型显色（荧光）底物，快速检测细菌的胞外或胞内酶（E）Vitek鉴定系统：原是美国宇航局太空计划中用于细菌分析的一部分，90年代由bioMerieUX Vitek生产为自动化鉴定仪。工作原理：采用有数码原理，30个微量生化反应池、细菌生长池内浊度增加，透光度减少，仪器一小时自动测定一次透光度，最终与计算机内模型菌透光度比较，得出阳性结果：Microscan鉴定系统常规显色板 快速荧光板 菌种接种到测试板上，35 2h孵育，通过荧光底物的水解以及底物被利用后pH值的变化、特殊代谢副产物的生成率进行菌种鉴定。其他三种快速显色板（苛氧菌板、厌氧菌板、酵母菌板） 抗菌

17、药物敏感性试验的检测原理 微量肉汤稀释法测定； 根据回归分析法的原理，计算机将各小池每小时细菌生长的结果进行回归分析，所得斜率值与经典方法所测MIC值进行比较，最后测出测试菌对某抗菌药物的MIC值。根据NCCLS标准得到相应敏感度：S、I、R。1) 常规测试板 比浊法 通过细菌不同生长量而引起菌液浊度的变化测定MIC值2）快速荧光测试板 荧光法 通过测荧光的增加间接地测MIC值流式细胞分析仪FCM流式细胞分析仪是集计算机技术、电子物理技术、光电测量技术、激光技术、流体力学技术、细胞荧光化学计数、细胞免疫技术与一体的高科技细胞分析仪。基本原理：细胞染色 待测标本制成单细胞悬液通过荧光染色后加压进

18、入充满鞘液的流动室鞘液技术 鞘液压力与样品流压力差异达到一定比例时，鞘液包裹着样品中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。激光光源 通过激光检测区的细胞受激光照射，产生散射光；部分被标上热议性荧光染料的细胞，产生特定波长的荧光散射光检测，荧光检测 通过一定波长选择通透性的滤光片，将散射光、不同波长的荧光信号区分开来，并送到不同的光电检测通道。各项参数及散点图 经过一系列吸纳后转换、放大、数字化处理，就可以在计算机上直观的得到染上各种荧光染料的细胞各自的百分率细胞分选 细胞分选功能可以将具有某种特征的细胞分选出来，以便进一步培养、研究。生物芯片技术生物芯片是把生物活性大分子（目前主要是核酸和蛋白质）或

19、细胞等密集排列固定在固相载体上所形成的微型检测器件。蛋白质芯片（protein chip ）是采用原位合成、机械点样或共价结合的方法将多肽、蛋白、酶、抗原、抗体固定于固相载体表面形成的生物分子点阵。蛋白质芯片的分类蛋白质表达芯片（protein expression chip）PEC能通过观察在不同条件下哪种蛋白质被合成而获得基因表达的详细信息蛋白质功能芯片（protein function chip）PFC能分析众多蛋白质的性质。多肿瘤标志物蛋白芯片目前临床研究表明不存在性别特异性指标 单个指标阳性不能完全说明特定意义，需多项指标联合诊断影响肿瘤标志物测定的因素 1、 引起假阳性的因素：（1

20、）良性疾病：炎症性疾病一些肿瘤标志物表达增加。（2）生理变化：妊娠时AFP、CA125、HGH和月经时CA125也会升高。（3）肿瘤手术/放疗/化疗过程中：由于肿瘤组织受到破坏或肿瘤坏死时某些肿瘤标志物产生增加造成假阳性。（4）样本中的免疫球蛋白可通过与测定中所使用的特异性抗体发生反应而影响测定结果。2、 引起假阴性的因素：（1）产生肿瘤标志物的肿瘤细胞数目少。（2）细胞或细胞表面被封闭。（3）机体体液中一些抗体与肿瘤标志物（肿瘤抗原）形成免疫复合物。（4）肿瘤组织本身血循环差，所产生的肿瘤标志物不能分泌到外周血中。 多肿瘤标志物蛋白芯片优点提高肿瘤检测的敏感性和特异性，减少漏检率和误诊率，提

21、供相对全面和客观的临床信息，是其它肿瘤诊断技术的理想补充。PCR扩增仪PCR(polymerase chain reaction）即：聚合酶链式反应PCR技术：选择性体外扩增DNA或RNA片段引物（primer）：与待扩增DNA片段两翼互补的寡核苷酸，其本质是DNA片段PCR的特异性：由两条人工合成的引物序列决定PCR的过程：变性退火延伸PCR原理94 55 70热变性 退火 引物延伸PCR技术的特点：高度敏感性 高度特异性 操作简便快速 适用样品广泛TaqDNA聚合酶的功能是：以DNA为模板，以四种脱氧核苷酸为原料，以引物3端为出发点，按5-3的方向，以碱基配对方式合成新的DNA链。TaqD

22、NA聚合酶的三大特性：热稳定性 可靠性 耐久性基线 baseline：背景曲线的一段范围从反应开始不久荧光值开始变得稳定，直到所有反应管的荧光都将要但还未超过背景阈值 Threshold：荧光(Rn)超过本底时的临界数值（即：根据荧光信号基线的平均值和标准差，计算出99.7%的置信度大于平均值的荧光值）荧光定量实时PCR与普通PCR的比较1实时在线监控：对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时地观察到产物的增加，直观地看到反应的对数期2降低反应的非特异性：使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合，提高了PCR反应的特异性3增加定量的精确性：全程监控，准确的算法进行定量4结果分析更加快捷方便，无

23、需跑胶检验仪器主要性能指标 精度：对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价，指检测值偏离真值的程度。定性概念，误差大则精度低，分为准确度，精密度，精确度。 误差 当对某物理量进行检测是，所测得的数值与真实值之间的差异。准确度：检测仪器试剂测量对象对理想测量的符合程度，是仪器系统误差大小的反映，是评价仪器精密的最基本的参数。 灵敏度 检测仪器在稳态下输出量与输入量之比，反映仪器能够检测的最小被测量。 重复性(cv) 生化分析仪自动生化分析技术是将生物化学分析过程中的进样、加试剂、去干扰、混合、保温反应、自动检测、结果计算、数据处理、打印报告及实验后的清洗等步骤进行自动化操作的技术。一、自动生化分析

24、仪的特点自动生化分析仪是集电子学、光学、计算机技术和各种生物化学分析技术于一体的临床生物化学检测工具。自动生化分析仪的特点：灵敏、准确、快速、节约和标准化等。二、自动生化分析仪的功能 条形码识别功能，简化工作程序，提高工作准确率，同时保障了操作人员的安全性 比色杯的自动清洗功能，有效防止交叉污染 任选式功能，即多通道任选多个化验项目功能，使工作灵活性大大提高 各种自检、自动重检功能和警告功能 急诊样本插入功能 实验程序管理、数据管理、质控管理功能生化分析仪组成 光源 卤素灯（氢灯、氘灯、氙灯）检测系统 单色器 光栅、棱镜、滤光片接受器 光电管、光电倍增管、光电二极管、光电二极管阵列比色杯光路

25、进样、加样系统清洗系统反应系统操作系统生化分析仪主要技术参数 自动化水平 分析速度 分析项目 精度准确度 污染率 相关性原理：Lamber-Beer定律 T=I/I0=10-kcl A=-lgT=lg(1/T)=kclA吸光度 T透射率C浓度 l光径K吸光系数公示表明：用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液体层厚度及溶液浓度的乘积成正比。双波长的特点和优点双波长的特点 在整个反应全过程监控中，主副波长同时检测，全过程每点主波长吸光度值都同时减去同点副波长吸光度值。双波长的优点 消除背景吸收 减少样本干扰 补偿光源波动AU生化分析仪工作原理、终点法(end assay) 被测物质在反应过程中完

26、全被转变为产物，到达反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。一点终点法 当样本和试剂混合后，待测物与试剂的物理化学反应达到终点时，即在时间-吸光度曲线上，吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值，用于计算结果。（不扣除样本空白） 计算公式：CU =（AUAB） F 两点终点法 在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度A1，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度A2，此两点吸光度之差用于计算结果。（扣除样本空白） 计算公式：CU =（A2A1） F 、两点法 两点法：又称为一级动力学法

27、、固定时间法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=kS。由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反期。 计算公式：CU = (A2-A1) FA-单试剂两点法 B-双试剂两点法、速率法（rate assay） 是指在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取酶促反应进程中线性期（各两点间吸光度差值相等）的吸光度值，并以此线性期的单位内时间吸光度的变化值（A/min），计算待测物的浓

28、度或活性。酶促反应的线性期A-单试剂速率法 B-双试剂速率法 两点速率法 在酶促反应进程的零级反应期（线性反应期，酶促反应以恒定的速率进行，不受底物浓度的影响）测定两个时间点的吸光度，通过单位时间内吸光度的变化量，计算出待测物的浓度或活性。多点速率法 在酶促反应进程的零级反应期，每隔一定时间（230秒）进行一次检测，连续检测多次，用最小平方二乘法（拟合成直线计算出单位时间内的吸光度的变化量，从而求出待测物的浓度或活性。、透射比浊法 抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物，在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法进行透射比浊（transmission turbidimetry）测定，可用于某些

29、蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做多点校准，再经非线性回归，求出抗原或抗体的含量。几种主要生化反应1.有辅酶参加的反应 如：ALT、AST、LDH、CK、Urea、GLU（HK法）等。2.有色素原参加的反应 如：ALP、GGT、AMY。3.有H2O2参加的反应（Triner反应） 如：TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、GLU（GOD法）等。4.免疫比浊法 如：Apo-A1、Apo-B、LP(a)、Cys-C、RBP 等。5.化学比色法 如：TP、ALB、Ca、Phos、Mg等。双试剂的优点抗干扰反应能力强增强了工作试剂的稳定性提高了测定结果的重复性电泳是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着

30、与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。 临床免疫检验仪器免疫分析法：以抗原抗体相互结合的免疫学反应作为基础的分析法称为免疫分析法。标记免疫分析：酶免疫分析，发光免疫分析，放射免疫分析，免疫金（银）免疫分析非标记免疫分析：免疫浊度分析技术酶免疫分析法enzyme immunoassay，EIA是用酶标记的抗体（或抗原）用于免疫学反应，并以相应底物被酶分解的显色反应，用来对样品中的抗原（或抗体）进行定位分析和鉴定；亦可根据酶催化底物显色的深浅，测定样品中待测抗原或抗体的含量。根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与未结合的酶标记物,分类如下：均相；

31、非均相 ELISA （酶联免疫吸附测定）是一种以微孔板为载体的固相酶免疫测定。酶 标 仪我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为酶标仪。一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能。全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。酶标仪工作原理总结酶免疫分析法：是用酶标记的抗体（或抗原）用于免疫学反应，根据酶催化底物显色的深浅，测定样品中待测抗原或抗体的含量。酶标仪可用比色法来分析抗原或抗体的含量，依照比色原理进行工作。以微孔板固相酶免疫测定仪为例。 光源灯发出的光线经过滤光片或单色器后成为一束单色光。该单色光经过塑料微孔板中的待比色溶液到达光电检测器，把光信

32、号的强弱转变成电信号的大小。经前置放大、对数放大、模数转换等模拟信号处理后，送入微处理器进行数据处理和计算。从而达到判断出抗原或抗体的有无或计算含量的目的。全自动酶免分析仪简介自动化系统: 加样系统 温育系统 洗板系统 判读系统 液路动力系统 软件控制系统等酶免疫测定出现假阳性的原因1操作及仪器因素：加样、洗板、自动化加样系统的标本间“交叉污染”2标本因素：RF、补体、异嗜性抗体、动物抗体、动物抗体、高浓度Ig等；溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全临 床 应 用 病原体及其各种抗体的检测（病毒、细菌、寄生虫等）。 各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等。 肿瘤标志物 如甲胎蛋白、癌胚抗原

33、、前列腺特异抗原、CA125、CA50。 多种激素 如HCG、FSH、TSH、T3、T4、雌二醇、皮质醇。 药物和毒品 药物如地高辛、茶碱、苯巴比妥，毒品如吗啡等。发光免疫分析仪化学发光(chemiluminescence, CL)某些化学反应产生的能量能使其产物或中间态分子激发，形成激发态分子，当其衰退至基态时，所释放的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为CL。化学发光免疫分析法：利用化学发光系统作为抗原抗体反应的指示系统，借以定量或定性检测抗原或抗体的方法。根据反应的体系和标记物不同，分为以下四种基本类型：n 化学发光免疫分析：吖啶酯，不需催化剂，在H2O2的碱溶液中即能发光。化学发光

34、酶免疫分析：HRP催化鲁米诺和H2O2。微粒子化学发光免疫分析：磁性微珠作为载体，ALP的发光底物环1,2-二氧乙烷衍生物:AMPPD。电化学发光免疫分析：化学发光剂三联吡啶钌在电极表面发生氧化还原反应而发光。一、全自动化学发光免疫分析系统仪器检测原理1在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。2仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析称为化学发光免疫分析。3吖啶酯用作标记物时固相磁粉颗粒免疫复合物被磁铁吸附于反应杯底部，上清夜吸出后，加入碱性试剂，其免疫复合物被激发，发射出430nm波长的光，再由光电倍增管将光能转变为

35、电能，以数字形式反映光量度，计算测定物的浓度。免疫学方法的选择： 夹心法 ：正相关反应，测定大分子的抗原或抗体。 竞争法 ：负相关反应，测定小分子抗原物质。 二、电化学发光免疫分析仪（ECL） 采用链霉亲和素包被的磁性微粒，配以生物素结合的抗原或抗体，使反应几乎在液相中进行。 具有敏感、快速和稳定的特点。在固相标记免疫测定中技术上居领先地位。放射免疫分析的缺点一 半衰期短，试剂货架期不长。二 标记物不断变化，试剂批间，批内变化大。标准曲线不能保存。三 反应时间长，操作步骤很难自动化。四 使用放射性核素，需要一定防护。由于剂量低，不会对人员造成多大危害。五 分析的限度为 10 mol/ml 或

36、10 g/ml。免疫浊度分析仪抗原抗体反应类型1)沉淀反应：免疫浊度分析2)凝集反应3)补体参与的反应4)中和反应5)标记免疫免疫浊度法基本原理 免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合 在二者比例合适、并有一定浓度的电介质存在时，产生一定大小的不溶性的复合物颗粒 使反应液出现浊度，形成光的折射或吸收 测定这种折射和吸收后的光作为计算单位，推算出复合物的量，最终计算出抗原的浓度 (二)免疫浊度法的分类按抗原抗体复合物形成的速度分：速率浊度法；终点浊度法按测定形式分： 透射比浊法 ：在光源的光路方向（0）测量透射光强度和被检溶液微粒浓度关系的方法称透射比浊测定法。透射光强度与抗原抗体复合物的

37、量成反比。散射比浊法：在光路的596角的方向上测量散射光强度和被测溶液中微粒浓度关系的方法称散射比浊测定法。散射光的强度与复合物的含量成正比散射免疫比浊的基本原理：一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。散射光强度与复合物的含量和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。(一) ARRAY分析系统1.基本原理利用速率散射比浊分析原理。检测悬浮于缓冲液中的抗原抗体免疫复合物颗粒。在抗体过量的前提下，悬浮颗粒通过光束时所产生的散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比。即速率峰值的高低与抗原的量成正比。(二)BN特定蛋白测定系统

38、定时散射比浊分析（ fixed time nephelometry)（抗原过量检测系统）定时散射比浊分析基本原理1.采用的是免疫沉淀反应与散射比浊分析相结合的技术。采用抗体过量的原理来保证抗原抗体反应中形成不可溶性小分子颗粒。2.由于免疫沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即开始，在极短的时间内反应介质中散射信号变动很大；此时计算峰值信号而获得的结果会产生一定误差，因此在测定散射信号时不与反应开始同步，而是推退几秒钟。时间分辨荧光免疫分析仪荧光免疫技术的分类荧光抗体染色技术；荧光免疫测定荧光发射的特点：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光现象也随之在瞬间内消失。荧光寿命

39、：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。从几ns、s到ms不等。荧光色素：指能产生明显荧光的有机化合物 时间分辨荧光免疫测定概念：时间分辨荧光免疫测定(tTRFIA)是用镧系稀土元素及其螯合物作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。是以抗原抗体反应、荧光物质发光和时间分辨技术相结合的近代荧光光谱技术。时间分辨：待短寿命的非特异性本底荧光衰退后，再测定长寿命阳性荧光信号。非特异性荧光：如血清蛋白、胆红素等化合物发射的短寿命荧光：1-10ns稀土螯合物荧光寿命：10s-1.0ms，比背景荧光长了3-4个数量级（一

40、） TRFIA分析原理/免疫学原理稀土离子-螯合剂-抗原或抗体流程：固相载体包被抗体待测抗原铕螯合抗体 双抗体夹心复合物 去除未结合铕螯合抗体 形成新的铕螯合剂 发射613nm的荧光 仪器测定信号强度 换算成待测物质的浓度。Eu3+螯合物发射荧光的测定需专门光学检测系统。（二）时间分辨信号原理l 镧系元素有较大的Stokes位移。 Stokes位移（）：激发光谱和发射光谱之间的波长差。最大达290nm（三）解离增强原理铕标记的抗原抗体复合物 很稳定，荧光信号弱 铕完全解离 新的具高度荧光的稳定螯合物利用两个螯合剂；改变pH值解离增强步骤使检测信号增强上百万倍，是TRFIA能实现超灵敏分析的主要原因TRFIA的特点（优势）l 特异性强：荧光信号测量的特异性l 灵敏度高：荧光强度+半衰期l 标记物稳定：双功能螯合剂l 荧光信号强：线性范围宽、重复性好缺陷由于其反应在固相载体上进行，检测时需在