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文档简介

1、液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书。色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督。总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料;另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好。对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考。C18柱(包括预柱)对于未启用的新的色谱柱,先用甲醇或乙腈以小流速(0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min)不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱

2、60分钟,然后不断降低有机相的比例(如80%、50%、10%甲醇或乙腈)各冲洗至少30分钟。若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中(如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中);色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水)冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析。样品分析完后,色谱柱维护与保养方法:流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,1.0ml/min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里(具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保

3、存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相)。如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里。对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统(水:90-10;乙腈:10-90)冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈。需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上)冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱。大多数反相色谱柱的pH稳定范围是28,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可

4、选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱。在每次进行样品分析时,要保证流动相(包括盐、缓冲盐、酸等)与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂(不低于10%)或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子。硅胶柱、正相手性色谱柱【包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA系列(如OA-3100、OA-3300)】 对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速(流速为0.10.3ml/min)冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析。硅

5、胶柱及正相手性柱不能过水相(对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相(有机相不低于50%),接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相【如是不含盐的反相溶液(如水/乙腈;水/甲醇),先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱;若反相流动相中含有缓冲盐(如缓冲盐/乙腈;缓冲盐/甲醇),先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱。】使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,(或者直接用正己烷异丙醇(90:10)冲洗,并保存在正己烷异丙醇(90:10)中)。如长时间未用,则保存

6、在正己烷中。需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱(对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱),最后保存在纯的有机溶剂中。在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子。反相手性色谱柱(如:CHIRALCEL OZ-3R):同C18柱阴离子柱和阳离子柱: 目前常见的阴子柱有waters IC-PakTM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱(钙型)。对于waters IC-PakTM anion

7、 和waters阳离子交换柱(钙型),新柱子使用前用高纯水小流速(0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min)冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱。在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相。对于磺酸基阳离子柱(含有硅胶基柱的),使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱。分析完样品后,对于waters IC-PakTM anion和waters阳离子交换柱(钙型)用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中。对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中(参照柱子说明书)。冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整。

8、需要特别强调的是waters IC-PakTM anion和waters阳离子交换柱(钙型)是不能过有机相(纯有机溶剂或有机溶液),否则会损坏色谱柱。氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同。对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析。液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统(具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相)一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟(若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水(有时候用温水效果更好)冲洗至少30分钟

9、后再用10%乙腈冲洗)。若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中。2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂(如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇洗针液洗针的外壁,流动相一直走内壁);清洗柱塞杆的溶剂(为了清洗流动相中析出的盐),一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈。3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路(包括进样器和检测池)若被污染,系统应做清洗和钝化处理。一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化。清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢。钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。30%磷酸水溶液制备:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀。6mol/L硝酸的制备:取浓硝酸40ml与60ml水混匀。方法:将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以1.0ml/min流速过渡(至少30分钟),待管路中有机溶剂洗脱干净;再换用30%磷酸清洗系统(约45分钟),再换高纯水冲洗,

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