马传染性贫血课件.ppt

马传染性贫血EquineInfectiousAnemia(EIA )、马传染性贫血概要，马传染性贫血是由马传染性贫血病毒引起的马属动物的慢性传染病，以病毒的持续传染、反复发热和贫血为特征，能够进行人畜相互传染，一发生就难以消失。 流行病学、病马和毒马是本病的感染源，血液、肝、脾、淋巴结等中存在病毒，发热期的病马分泌物和排泄物中也含有病毒。 吸血昆虫(蚊子、虻等)是主要的传播媒体，通过消化管、呼吸器、交配、胎盘感染，或从被病毒污染的注射针和诊疗机器等散布。 只有马对动物敏感，其中马敏感性最高，其次是驴、骡子，没有品种、年龄和性别差异。 本病主要呈地方流行或散发。 一般来说虽然没有严格的季节性和地域性，但是多在吸血昆虫多的夏秋季节和森林、湿地发病。 新疫区多见急性型，病死率高，旧疫区多为慢性型、隐性型，病死率低。 病原学、马传染性贫血病毒(EIAV )是RNA病毒，属于逆转录病毒科慢病毒。 病毒粒子呈圆形，有囊膜，出芽成熟，放出。 病毒有群特异性抗原，可以通过补体结合反应和琼脂扩散反应检测出，主要用于本病的诊断。 另外，型特异抗原是各型毒株间不同的抗原，存在于病毒粒子表面，可以通过病毒血清中和试验检测出，主要用于病毒型的鉴别。 本病至少有14型。 病毒只在培养了马属动物的白血球和驴子胎儿骨髓、肺、脾、皮肤、细胞腺等细胞时才能复制。 马属动物以外的动物人工感染和细胞培养不成功。 病毒对外界的抵抗力很强。 在粪便中生存2个半月，使粪便堆积发酵，30分钟就死亡。 2%4%的氢氧化钠液和福尔马林液都可以在510分钟内杀，3%的新生儿液都可以在20分钟内杀。 阳光照射14小时就会死。 -20左右，病毒可以保存6个月到2年。 病毒对热的抵抗力弱，煮沸后就会死亡。 临床症状、临床特征以发热(检查热和间歇热)为主，有贫血、出血、黄疸、心力衰竭、浮肿、消瘦等症状。 血相变化：红血球显着减少，血红蛋白减少，血沉加速。 白血球减少，c型球蛋白增高，外周血中出现了铁细胞。 发热期嗜酸性粒细胞减少或消失，解热后淋巴细胞增加。 根据临床表现，可分为急性、亚急性、慢性和隐性4种病型。 病理变化、急性型呈全身败血症的变化。 浆膜、粘膜、淋巴结和实质器官上有弥漫性出血点(斑)。 脾急性肿大，暗红或紫红，红髓软化，白髓增殖，切面呈颗粒状。 肝肿大、黄褐色或紫红色，肝细胞索变性与中央静脉、窦状间隙淤血交织，在肝切面形成豆蔻状或槟榔状花纹，称为“豆蔻肝”或“槟榔肝”。 亚急性和慢性病主要是脾、肝、肾、心脏和淋巴结等网状内皮细胞的增殖，肝内可见大量吞铁细胞。 长骨的骨髓红区扩大，黄髓内有骨髓增殖巢，慢性重症例的骨髓呈乳白色果冻状。 马传染性贫血驴白血球活性疫苗，马传染性贫血病毒(EIAV )是由驴白血球的人工驯化制成的疫苗。 中国首次刺激马和驴明显的体液和细胞免疫应答，保护率分别达到85%以上(马)和100% (驴)。 接种马和驴后免疫力产生得很慢，但免疫持续时间长，免疫保护率高。 这是目前国际上唯一的马传染性贫血生毒疫苗，这一成果达到国际先进水平。 毒种选择，毒种：马传贫驴白血球弱毒。 (毒性弱，免疫原性好。)条件应满足：毒种病毒液的含量为培养的驴白细胞106TCID50/ml； 病毒液对驴的最小感染量和免疫量10-5/ml； 病毒液需要标准约翰扩散，补体结合反应的阳性血清具有抗原性，即使接种了与补体抗原的有效值在3.0以上的健康马属动物，也不会出现马的贫困症状，虽然不会发生死亡，但有血清学反应。 制造要点，驴白血球培养：动物选择，提取驴白血球的驴是25岁的马没有感染贫困的健康者。 无菌提取血浆分离白细胞，用绢云母液(Seligmarls )和牛血清混合的营养液培养48小时。 接种以3%的量接种后，继续培养。 收获病毒再培养57d，收毒冻融。 质量标准，疫苗必须无菌，补体结合试验有效价格在2.0以上的驴白血球，必须向毒性测定在105TCID50/ml以上的原苗5ml皮下注射健康马，观察3个月，每天测温两次，每2Od进行补体结合反应检测的马传达贫困症状的血清阳性率保存和使用，液体苗可以在04下保存7d，-20以下保存1年。 冷冻干燥苗可以在04下保存6个月，在20以下保存2年。 液体苗用微黄色澄清液体。 冻干苗是微黄色的海绵状团块，容易从瓶壁脱离，加入稀释液马上溶解。 用瓶子标签标明头，用PBS缓冲液稀释，皮下注射马、驴、骡子2毫升。 注射苗后，马要3个月，驴、骡子产生免疫力需要2个月，免疫持续时间为2年。 诊断制剂，1、马传贫寒天扩散反应抗原毒种：用驴胎儿肺、真皮、胸腺二倍体细胞培养传代适应，抗原性好的马传贫病毒。 毒种条件：收毒后冻融，无菌收集。 由1.5%沉淀物制造抗原，用免疫扩散法测定有效值，扩散环直径为10mm以上。 制造要点：将6月龄前后驴胎肺、皮肤、胸腺等组织制成二倍体细胞，变成等量维持液，以2%-5%接种，培养10-15d。 将pH调整到5.0、4，透析15h，抛弃离心、上清，用pH8.6硼酸缓冲液稀释沉渣，用醚研磨，反复处理一次直到醚挥发，就成为抗原。 抗原检查：配置含有8单位标准阳性血清、1%标准阳性血清的1%琼脂平板，反应后出现沉淀环者合格。 2、马传染贫困补体结合反应抗原的独特特征：将利用驴白细胞、驴胎肺、骨髓传代细胞生产抗原的牛犊血清变成大牛血清的醚处理病毒培养物改为吐温80 (非离子表面活性剂)和与醚同量的共同处理，大大增加了抗原产量。 3、ELISA抗原、马传贫疫苗的研究意义、马传贫疫苗的研究成功，突破了慢病毒免疫不能的理论，为慢病毒免疫预防提供了战略理论依据，包含慢病毒免疫的巨大信息，为一系列人畜慢病毒免疫的研究开辟了新的途径，为马原本，马传贫疫苗是使用传统的细胞学方法开发出来的，这种病毒在细胞传代培养过程中降低毒性的方法，不仅需要时间，而且受到技术手段的限制，研究者只能看到其最终结果，但不能理解其免疫机制目前，应用现代分子生物学技术，可以弥补传统细胞学技术知道其原因，不知道其原因的遗憾。马传染贫困病毒和艾滋病病毒的主要遗传信息的基因结构完全相同，只要找到马传染贫困病毒基因的有毒部分，就能确定HIV中有毒基因的位置，扣除HIV的这一部分的基因，毒性就没有了，艾滋病杀人的谜团就会解开。 因此，首先找出马传贫困病毒的重要原因基因很重要。此时保存了20年的马传贫困疫苗的数百代样品，代病毒的毒性如何减少，免疫原性如何提高，这些信息对艾滋病疫苗的开发有重要的指导作用。 完成一系列不同水平的基因比较后，研究人员终于发现了它们的缺失和突变的基因部位，实验证实了马传染贫困疫苗的减毒原理：这些部位中的一些突变