五甾体激素类药物的分析.ppt

药物分析,XiangnanUniversity,第十五章:甾体激素类药物的分析,基本要求,1掌握本类药物的化学结构、特征官能团与分析方法的关系。2掌握高效液相色谱法、紫外分光光度法、四氮唑比色法、异烟肼比色法、Kober反应比色法等含量测定方法。3熟悉本类药物常用的鉴别试验和特殊杂质的检查方法。,甾体激素类药物的分析,甾体激素类药物,环戊烷并多氢菲母核的激素类药物,SteriodHormones,甾体激素类药物的分析,1.甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质,发现史,2.1932年至1939年间，从腺体中获得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睾酮(1935年)及皮质酮(1939)等的纯品结晶。,3.随后，发明用薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行半合成生产甾体药物，使生产规模扩大，成本降低,4.发现肾上腺皮质激素治疗风湿性关节炎及其在免疫调节上的重要价值，使甾体药物成为医院中不可缺少的药物,5.甾体口服避孕药的研究成功，使人类生育控制达到了新水平,Contents,第一节基本结构与性质,母体结构,第一节基本结构与性质,母体衍生结构,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,分类,药理作用,第一节基本结构与性质,一、肾上腺皮质激素,3,11,17,20,21,氢化可的松(hydrocortisone),醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate),16-甲基,21-酯化,17-羟基,9-氟,3-酮,1,2-双键,11-羟基,20-酮,本类药物结构特征,A环4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药物在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收,本类药物结构特征,C17位上为-醇酮基,具有还原性.多数药物有C17-羟基,部分药物-醇羟基与酸成酯.,本类药物结构特征,部分药物的C6或C9位由卤素取代,呈相应的卤化物反应,本类药物结构特征,部分药物C11位上有羟基或酮基取代,二、雄性激素及蛋白同化激素,第一节基本结构与性质,甲睾酮(methyltestosterone),丙酸睾酮(testosteronepropionate),苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate),17-羟基作用更强,吸收减缓,甲睾酮(methyltestosterone),A环4-3-酮基,C17位上为羟基,部分药物的羟基被酯化,雄性激素上的母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基,母核只有18个碳原子,二、雄性激素及蛋白同化激素,本类药物结构特征,第一节基本结构与性质,三、孕激素,黄体酮(progesterone),醋酸甲地孕酮(megestrolacetate),乙酰氧基，具口服活性,C17位-羟孕酮类,第一节基本结构与性质,炔诺酮(norethisterone),左炔诺孕酮,三、孕激素,C19位去甲睾丸酮类,第一节基本结构与性质,三、孕激素,黄体酮(progesterone),A环4-3-酮基,C17位上有甲酮基或乙炔基.,多数在C17位上有羟基,部分药物的羟基被酯化,第一节基本结构与性质,四、雌性激素,第一节基本结构与性质,四、雌性激素,有些药物在C17位上有乙炔基,构成19-去甲孕甾烷母核,A环为苯环,C3位上有酚羟基,有的药物C3位上的酚羟基成酯,C17位上有羟基有些药物C17位羟基成酯.,第一节基本结构与性质,总结如下,第二节Identification,物理常数的测定化学鉴别法制备衍生物测定熔点UVIRTLCHPLC,理化性质与鉴别试验,第二节Identification,一、物理常数的测定,1.熔点,第二节Identification,第二节Identification,二、化学鉴别法,2.比旋度3.吸收系数,1.与强酸的呈色反应,与硫酸显色反应,显色荧光加水稀释,泼尼松龙深红絮状灰,泼尼松橙黄蓝绿,炔雌醚橙红黄绿红色,炔雌醇橙红黄绿絮状玫红,醋酸可的松黄或微褪色并澄带橙清,第二节Identification,2.官能团的反应,C17-醇酮基还原性,第二节Identification,C3酮基和C20酮基,甲酮基或活泼亚甲基,第二节Identification,专属鉴别反应,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化钠,其他甾体,淡橙色或不显色,第二节Identification,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,有机卤素,茜素氟蓝硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈蓝紫色,第二节Identification,乙炔基,第二节Identification,酯基,酚羟基,-3-酮、苯环、其他共轭结构,结构依据,240nm左右,280nm左右,三、UV,第二节Identification,结构特征：酚羟基、C17OHC17乙炔基,炔雌醇,四、IR,第二节Identification,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羟基,醇羟基,1615cm-1,苯环的骨架振动,黄体酮,结构特征：-3-酮、C17-酮基,四、IR,第二节Identification,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,双键,五、TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,第二节Identification,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,六、HPLC法,第二节Identification,一、有关物质的检查,检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.,检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）,第三节PurityTest,第三节PurityTest,氢化可的松中其他甾体检查,CHCl3-MeOH(9:1)溶剂硅胶GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水385:60:15:2展开后晾干105干燥10min碱性四氮唑蓝显色,（一）TLC,判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色,（二）HPLC,第三节PurityTest,黄体酮中有关物质检查,供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4,第三节PurityTest,二、硒的检查,来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,三、溶剂残留,甲醇和丙酮(GC),0.3%,0.5%,第三节PurityTest,四、游离磷酸盐检查,740nm，UV-Vis,第四节Assay,HPLCUV比色法,非水溶液滴定法,第四节Assay,一、HPLC,己烯雌酚,黄体酮,第四节Assay,二、UV-Vis,醋酸地塞米松,苯环,第四节Assay,三、比色法,2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)氯化三苯四氮唑,三苯甲(Formazan),深红色max480490nm,（一）四氮唑比色法,第四节Assay,蓝四氮唑BluetetrazolineBT,BT-单甲,BT-双甲,蓝色max525nm,氢化可的松软膏的含量测定,第四节Assay,精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25的暗处放置40min45min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得,第四节Assay,（1）基团对反应速度的影响,（2）溶剂、水分的影响,无水乙醇(无醛),（一）四氮唑比色法,第四节Assay,（3）O2与光线的影响反应及其产物对光敏感，避光，隔绝空气,（4）碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳,（5）温度与时间,t甲分解%,（一）四氮唑比色法,室温（25）反应4045min,(二)异烟肼法(Isonicotinicacidhydrazide),第四节Assay,肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,第四节Assay,讨论,专属性强,无水,4-3-酮,甲醇对试剂的稳定性好、呈色强度较无水乙醇中高、但对植物油的溶解度小,第四节Assay,(4)酸、异烟肼的量,盐酸:异烟肼=2:1,第四节Assay,(三)Kober反应比色法,第四节Assay,采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量,加入铁酚试剂,(NH4)2Fe(SO4)2+H2SO4+H2O2+苯酚,Iron-phenolReagent,第五节生物样本中甾体激素的分析,GC-MS:尿样SPE萃取衍生化GC/MS分析HPLC-MS:血清HPLC/MS分析,练习与思考,A型题,1.黄体酮的专属反应是A.与硫酸的反应B.斐林反应C.与亚硝基铁氰化钠的反应D.异烟肼反应E.硝酸银反应,练习与思考,A型题,2.与碱性酒石酸铜试液反应生成砖红色沉淀的药物是A.黄体酮B.醋酸地塞米松C.炔雌醇D.甲睾酮E.苯丙酸诺龙,B型题,A.四氮唑比色法B.硫酸呈色反应C.气相色谱法D.硝酸银-氢氧化钠滴定法E.异烟肼比色法3.利用分子中的乙炔基所建立的分析方法为4.利用4-3-酮基所建立的分析方法为5.利用C17-醇酮基所建立的分析方法为,D,E,A,B