细菌常用的几种试验ppt课件

临床细菌检测常用的几家试验点心市立医院，常用的实验方法，克染色法拉丝试验抗氧化酶试验接触酶试验凝血酶试验催产素试验卫星试验CAMP杆菌肽敏感试验硝酸盐还原试验DNA酶试验生化反应血清单位型(志贺、沙门氏菌、霍乱、链球菌)、古2、媒染：革兰碘液染色10秒、水洗、甩干3、脱色： 95%醇脱色1020秒、水洗、脱水4、再染：沙黄或再红染色10秒、水洗、干后镜检查。 5、结果： g为紫色，G-菌为红色，g菌为G-菌，氢氧化钾拉丝试验，“氢氧化钾拉丝试验”快速鉴定革兰阳性菌1，原理：革兰阴性菌细胞壁肽数量少于稀碱溶液内容易破裂，释放未破裂的DNA螺旋，使KOH菌悬浊液表现粘性，搅拌2、试剂：4%KOH水溶液。 必须新鲜配制。 3 .方法：取1滴4%KOH水溶液于清洁玻璃板中，用接种环在固体培养基中取少许新鲜制备的菌落，在KOH溶液中搅拌，每隔数秒抽出接种环，观察是否拉丝。 4、结果：接种环抽丝阳性，悬液阴性。 大部分的革兰阴性菌在5秒到10秒之内出现阳性，有的需要30秒到45秒。 革兰氏阳性菌在60秒后也是阴性。抗酸染色、1、初染：酚复红加热染色35分钟、水洗、甩干2、脱色：3%盐酸醇脱色3060秒、水洗、脱水3、复染：碱性美兰60秒、水洗、干后镜检查。 4、结果：抗酸菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色，意义：抗酸菌和非抗酸菌，抗酸染色-抗酸菌，氧化酶试验，原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素c氧化，用氧化型细胞色素c氧化对苯二胺，生成有色的醌类化合物。 方法：取少许干净滤纸，涂点菌苔，加入氧化酶试剂(对苯二胺溶液)，观察颜色变化。 判断：即呈粉红色，即呈紫红色阳性，未变色为阴性。 含义：肠杆菌科细菌与气单球、假单胞菌的鉴别、过氧化氢酶试验、原理：具有过氧化氢酶(过氧化氢酶)的细菌催化过氧化氢，释放出新的生态氧，形成分子氧，形成气泡。 2 .方法：用接种环选取固体培养基菌落置于清洁玻璃板上，滴加3%过氧化氢溶液，观察结果。 3 .结果表明，5秒内释放大量气泡是阳性的。 4 .意义：大多数球菌接触酶试验阳性，但链球菌阴性，主要用于葡萄球菌和链球菌鉴别。血浆凝固酶试验，1 .原理：金黄色葡萄球菌能产生两种凝固酶。 一种是结合凝固酶，结合细胞壁，血浆中纤维蛋白原作为纤维蛋白附着在细菌表面，凝集，用玻璃板法测定。 另一种是菌体生成后释放培养基中的游离凝固酶，以凝固酶原为凝血酶类物质凝固血浆，用试管法测定。 2 .方法： (1)玻璃板法：将血浆和生理盐水逐滴滴加入清洗玻璃板，选择待检测菌落与血浆和盐水混合，血浆中出现明显凝集颗粒，盐水中无自凝现象者阳性。 (2)试管法：取试管2根，分别加入0.5ml血浆(用生理盐水1:4稀释)，去除菌落数，将测定管仔细研磨混合，将阳性菌株放入对照管中，在37下用34小时。 血浆凝固者为阳性。 原理：肺炎链球菌对Optochin (乙基氢化诺贝尼)敏感，作用机制阻碍肺炎链球菌叶酸的合成，抑制其生长，其他链球菌如草绿色链球菌对此不敏感。 可以鉴别肺炎链球菌和草绿色链球菌。2 .方法：将检测对象a溶血链球菌均匀涂抹于血平板，35温育Optochin纸片(含药5mg )，观察抗菌环大小。 3 .结果：抗菌环14mm为肺炎链球菌，狭窄的抗菌环为草绿色链球菌。卫星试验、1 .原理：流感菌生长需要x、v两种因子，在血液平板上形成极小、圆形的透明菌落，与金葡萄菌同时培养，金葡萄菌产生v因子，促进流感菌生长，金葡萄菌周围细菌菌菌落大，形成卫星生长现象。 在普通培养基上不能生长。 2 .方法：在采集菌环中选取可疑菌落，分别接种血小板、MH平板，用采集菌针垂直牵引金葡萄菌和原线接种平板。 3524小时观察结果。 3 .结果金葡萄菌周围细菌菌落大，卫星试验阳性4 .意义：血平板上仅出现卫星现象的流感菌； 血小板和MH都是卫星现象的流感菌。 是用来区分流感和流感菌的。，CAMP试验，1 .原理： b组链球菌在血小板上产生CAMP因子，为促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，血小板上两种细菌的边界溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。 由于其他链球菌一般不产生CAMP因子，实验可作为b组链球菌鉴定指标之一。 2 .方法血小板用金黄色葡萄球菌划过横线，在距该直线约5mm处接种受检菌，35下观察24。 3 .结果：被检菌接种线与金葡萄接种线之间箭头状或半月状透明溶血区阳性，可推测为b组链球菌。 无溶血区阴性。杆菌肽敏感性试验、1 .原理： a组链球菌对杆菌肽非常敏感，其他链球菌对杆菌肽通常具有耐药性，因此试验可鉴定链球菌。 2 .方法：将被检链球菌紧密涂抹在血平板上，将剑杆菌肽纸贴在血平板表面，3524小时观察结果。 3 .杆菌肽周围出现明显的抗菌环10mm为阳性时，推测为a组链球菌，10mm为阴性，为其他组链球菌。硝酸盐还原试验、1 .原理：某些细菌还原培养基中的硝酸盐生成亚硝酸盐、氨、氮等。 亚硝酸盐和乙酸生成亚硝酸，亚硝酸和对氨基苯磺酸形成重氮苯磺酸，可以结合甲萘胺和红色的n-a氨基苯磺酸。 2 .方法：将受试菌接种硝酸盐培养基，在35下滴加硝酸盐还原试剂甲基液(对氨基苯磺酸和乙酸)和乙基液(a-萘胺和乙酸)，观察结果。 3 .判定结果：红色为阳性。 不出红色，加点锌粉，不出红色者阳性，红色阴性。 4 .意义：肠杆菌科细菌，硝酸盐还原试验阳性，DNA酶试验，1 .原理：某些细菌能产生DNA酶。 DNA酶将DNA长链水解成几个核苷酸组成的寡核苷酸链。 水解形成的寡核苷酸可溶于酸，在DNA平板上加入酸，菌落周围形成透明环