诺丽发酵果汁抗氧化实验研究(西沙诺丽酵素).doc

抗氧化活性 诺丽的保健功效国际最新研究进展论文集食品研究与开发. 2010,33(5):175-177.诺丽发酵果汁抗氧化实验研究诺丽发酵果汁抗氧化实验研究李煦照1，于纯淼2，陈佳2，刘树民1（1.黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江哈尔滨150040；2.黑龙江中医药大学药学院，黑龙江哈尔滨150040）摘要研究诺丽发酵果汁对溴代苯所致小鼠急性肝损伤的抗氧化功能。将小鼠随机分组，高、中、低剂量组分别经口给予不同浓度受试样品，空白对照组则给予同体积溶剂，连续给药30 d后取血测抗氧化酶活力。并在第31天，给予受试样品或溶剂1h后，用溴代苯油造模致肝损伤，测肝组织抗氧化酶活力和过氧化脂质含量。结果表明，受试样品高、中、低三剂量组中全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力均高于空白对照组，但无显著性差异；中剂量组血清总超氧化物歧化酶（SOD）活力显著高于空白对照组（P0.05）。中剂量组肝组织中过氧化脂质（MDA）含量显著低于模型对照组（P0.05）。结论显示，发酵诺丽果汁具有一定的抗氧化功能，对肝组织脂质过氧化损伤具有一定保护作用。关键词：发酵诺丽果汁，肝损伤，抗氧化作用，溴代苯诺丽（Morinda citrigolia L.，Noni），也称海巴戟，属茜草科植物，是一种发源于南太平洋岛屿的热带常绿多年生阔叶灌木或小乔木，富含多种营养成分。在太平洋群岛，波利尼西亚人和库克人认为他们的祖先应用海巴戟治疗疾病有2000多年的历史，主要用于抗感染和治疗慢性疾病，是波利尼西亚人和库克人最主要的药用植物之一，在民间广为应用1，传统用于抗衰老、糖尿病、口臭、口腔溃疡、痔疮、肿瘤、结核病、鱼肉中毒和高血压等。本试验研究发酵诺丽果汁对溴代苯所致小鼠急性肝损伤的抗氧化功能。1材料与方法1.1材料与仪器1.1.1材料诺丽果汁：购于海口，自然发酵3个月，用蒸馏水配成所需浓度；溴代苯：天津市光复精细化工研究所，分析纯（临用前用食用油配成适宜浓度的供试液）；MDA、SOD、GSH-Px 测定试剂盒及考马斯亮兰蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所。1.1.2实验动物昆明小鼠，雄性，体重18g22g，清洁级，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK黑2008004。1.1.3主要仪器KDC-160HR高速冷冻离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司；756紫外分光光度计：上海光谱仪器有限公司；XHF-1内切式组织匀浆机：宁波新芝生物科技股份有限公司。1.2方法1.2.1前期给药选18g22g健康成年昆明小鼠，雄性，随机分成空白对照组、模型对照组和受试样品高、中、低剂量组，每组l0只。按成人体重60 kg计，受试样品每次用量为50mL，1d 2次，相当于1.66mL/（dkg）。试验中按成人推荐用量的5、10、20 倍，设高、中、低剂量组。浓度分别为0.21、0.42、0.84 mL/mL，以蒸馏水配制。经口给药，灌胃量为0.2 mL/10 g。30d后取血测抗氧化酶活力（GSHPx、SOD）。空白对照组经口给予同体积溶剂。1.2.2造模方法按保健食品检验与评价技术规范2，给药30d后，取血测抗氧化酶活力，此后动物饥饿过夜，第2天给予受试样品或溶剂1h后，除空白对照组外，各组小鼠经口给护溴代苯油（3mmol/L），灌胃量0.1mL/10 g。20h后处死动物，取肝组织测过氧化脂质含量（MDA）和抗氧化酶活力（GSH-Px、SOD）。1.2.3样品制备1.2.3.1血清样品取血0.5 mL，4 000 r/min离心10 min，取血清备用。1.2.3.2全血样品取血20 L加入到2.48 mL蒸馏水中，充分振摇，使之全部溶血，4h内测定酶活力。1.2.3.3肝组织上清液动物处死后，立即取出所需肝脏，放入冷生理盐水中洗去浮血，剔除脂肪及结缔组织，滤纸吸干后，在冰浴上剪成碎片，称取适量组织，制成10 %组织匀浆，操作在冰浴中进行。匀浆以4000 r/min，4离心10 min，取上清液备用。1.2.4各指标测定本试验测定全血GSH-Px酶活力，血清总SOD活力，肝组织MDA含量，肝组织GSH-Px酶和总SOD活力。1.2.4.1 GSH-Px活力测定采用二硫代二硝基苯甲酸法（DTNB法）。1）取1124全血0.2mL测全血GSH-Px酶活力全血GSH-Px酶活力=（非酶管OD值酶管OD 值）/（标准管OD值空白管OD值）标准液浓度（20 mol/L）5（1+124）/（1+49）2）取0.25 %组织匀浆0.2 mL测组织中GSH-Px酶活力组织中GSH-Px酶活力=（非酶管OD值酶管OD值）/（标准管OD值空白管OD值）标准液浓度（20 mol/L）5/反应时间/（取样量蛋白含量）1.2.4.2 SOD活力测定采用黄漂吟氧化酶法。1）取血清20 L测定总SOD活力总SOD活力/（U/mL）=（对照管吸光度测定管吸光度）/对照管吸光度/50 %反应体系稀释倍数样本测试前的稀释倍数2）取1 %肝组织匀浆25L测定总SOD活力组织匀浆中SOD活力/（U/mgprot）=（对照管吸光度测定管吸光度）/对照管吸光度/50 %反应液总体积/取样量（mL）/组织中蛋白含量（mgprot/mL）1.2.4.3 MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法（TBA法）。取10 %肝匀浆0.1mL测定MDA含量。组织中MDA含量/（nmol/mgprot）=（测定管吸光度测定空白管吸光度）/（标准管吸光度标准空白管吸光度）标准品浓度（10nmol/mL）/组织中蛋白含量（mgprot/mL）。1.2.4.4蛋白含量测定采用考马斯亮兰法1.2.5数据处理数据以xs表示，采用方差分析比较组间差异。2结果与讨论2.1发酵诺丽果汁对小鼠谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响发酵诺丽果汁高、中、低三剂量组中全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力均高于空白对照组，但无显著性差异，结果见表1。肝损伤实验中，发酵诺丽果汁高、中、低三剂量组及空白对照组中肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活力均低于模型对照组，但无显著性差异。高、中、低三组中，随着剂量的增加，谷胱甘肽过氧化物酶活力反而下降，结果见表2。2.2发酵诺丽果汁对小鼠超氧化物歧化酶活力的影响发酵诺丽果汁中、低三剂量组血清超氧化物歧化酶活力均高于空白对照组，中剂量组显著高于空白对李煦照，等：诺丽发酵果汁抗氧化实验研究营养保健照组（P0.05），高剂量组低于空白对照组，结果见表1。肝损伤实验中，发酵诺丽果汁低剂量组中肝组织超氧化物歧化酶活力高于模型对照组，但无显著性差异，高、中及空白对照组均低于模型对照组，结果见表2。表1 发酵诺丽果汁对小鼠抗氧化酶活力的影响(血液)（xs，n=10）组别 GSH-Px/（mol/L） SOD/（U/mL）空白对照组 221.7672.60 138.1012.08低剂量组 245.7280.74 138.9422.24中剂量组 268.3268.36 170.2810.49*高剂量组 244.8383.25 135.4112.46 注：*与空白组对比P0.05。2.3发酵诺丽果汁对肝损伤小鼠过氧化脂质（MDA）含量的影响模型对照组肝组织中过氧化脂质（MDA）含量显著高于空白对照组（P0.05），中剂量组肝组织中过氧化脂质（MDA）含量显著低于模型对照组（P0.05），高、低剂量组组织中过氧化脂质（MDA）含量则高于模型对照组，结果见表2。表2 发酵诺丽果汁对肝损伤小鼠过氧化脂质含量和抗氧化酶活力的影响(肝组织)组别 GSH-Px/（mol/L）SOD/（U/mgprot） MDA/（nmol/mgprot） 空白对照组 103.0127.50144.9224.79 8.992.38 模型对照组 125.0616.31173.9628.13 11.931.85 低剂量组 114.7536.70 193.974.38 13.42.95 中剂量组 103.1936.22158.7456.67 9.162.44* 高剂量组 101.5225.31170.1469.83 13.523.31 注：*与模型组对比P0.05，与空白组对比P0.05。3 结论在正常情况下，机体内有一定数量的自由基，机体内的SOD、GSH-Px等酶可以有效的清除多余的自由基，使体内的氧化与还原反应保持着平衡状态。一旦体内的氧自由基大量产生或抗氧化系统功能减弱，都会导致组织细胞的氧化损伤。本实验肝组织中空白对照组与模型组MDA含量有显著性差异，造成了过氧化损伤模型。肝组织中，GSH-Px活力随着发酵诺丽果汁剂量的增加而降低，总体呈逐渐下降趋势，提示发酵诺丽果汁具有非常强的抗自由基作用，基本能消除自由基对肝组织的伤害，对肝组织具有一定保护作用3。而各剂量组肝组织中的SOD活性无明显变化，推测可能与其在试验中活性代偿性反应有关4。各