人类免疫缺陷病毒抗体测定SOP模版.doc

.项 目人类免疫缺陷病毒抗体（Anti-HIV）测定方 法化学发光法编写人日 期审核人审核日期批准人批准日期文件分发部门和/或个人保 管 人本规程自XXXX年X月X日起实施，每n年复审一次复审者复审日期批准者批准日期修改次数修改内容修改人批准人生效日期目 录1 实验方法2. 检测原理3标本要求4检测试剂5储存条件及有效期6 检验仪器7. 检验方法8. 质控9.结果计算10.参考值11. 产品性能指标12. 处理及报告13.临床意义14.验方法的局限性15.注意事项1实验方法 采用双抗原夹心法.化学发光免疫测定（CLIA)技术定性检测人血清或血浆中人类免疫缺陷病毒1型和2型抗体的含量2检测原理 以HIV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原抗体酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。3 标本要求1). 应用正确医用技术收集血清或血浆样本。血浆样本推荐使用EDTA、枸橼酸钠或肝素的抗凝血浆。2). 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去。3）.严重溶血、脂血或浑浊的样本不能用于测定。4). 样本收集、处理后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。4 检测试剂编 号组份名称100人份/盒1磁微粒混悬液（包被有HIV抗原）包被有HIV抗原2.3ml2酶结合物（含有酶标记HIV抗原）11.0ml3样品稀释液（含有蛋白的缓冲液）5.5ml4阳性对照（含有HIV抗体）1.0ml5阴性对照（含有蛋白的缓冲液）1.0ml6说明书1份5储存条件及有效期:1). 试剂盒应保存于28，防止冷冻，避免强光照射，有效期为12个月。2). 试剂机载稳定性 试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在210环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在210 环境下稳定期为28天。 阴阳性对照开瓶后保存于28，稳定期为1个月；若需使用更长时间，应分装冻存。6检验仪器AutoLumo A2000化学发光分析仪。7 检验方法7.1、消耗品检查： 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 参考相应的仪器系统操作说明。7.2、试剂包装载： 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 参考相应的仪器系统操作说明。7.3、测试： 将样本容器放置在仪器配套样本架中。 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 参考相应的仪器系统操作说明。7.4、定Cutoff值： 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。 Cutoff值有效期为28天。 参考相应的仪器系统操作说明。 出现以下情况需要重新生成Cutoff值：1) 质控结果经重复测定后仍然超出范围；2) 试剂盒或发光底物液的批号更改；3) 超出Cutoff值有效期限；4) 仪器重要部件更换或维修。8质控： 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 出现以下情况需要进行质控：1) 测试试剂盒使用超过24小时；2) 更换新的试剂盒；3) 重新生成新的Cutoff值；4) 停机。 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。9结果计算：1. Cutoff值=阳性对照孔平均发光值*0.4。仪器操作时，自动计算并保存每批试剂的Cutoff值。2. 待测样本发光值Cutoff值时，检测呈阴性反应。3. 待测样本发光值Cutoff值时，检测呈阳性反应，严格按照全国艾滋病检测技术规范进行复检及确认。4. 有效性判断：阳性对照孔平均发光值/阴性对照孔平均发光值应大于10，否则应重新试验。10参考值 1 S/CO 建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。11产品性能指标1). 阴性符合率：符合中国食品药品检定研究院阴性参考品的规定；2). 阳性符合率：符合中国食品药品检定研究院阳性参考品的规定；3). 精密性：符合中国食品药品检定研究院精密性参考品的规定；4) . 最低检出限：符合中国食品药品检定研究院最低检出限参考品的规定；5) .干扰物质：1g/L血红蛋白、0.4g/L胆红素和30g/L甘油三酯对本试剂盒检测结果无显著影响；HBsAb、HBeAb IgG、HBcAb IgM、HCV IgG抗体、HAV IgG抗体、HEV IgG抗体、梅毒特异性抗体、ANA、类风湿因子、EB病毒IgG抗体、TORCH IgG抗体、TORCH IgM抗体阳性样本对检测结果无显著影响；6) . 抗凝剂的影响：使用EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂对检测结果无显著影响；7) . 方法学对比：与SFDA批准上市的试剂盒对比检测1256份临床样本，阳性符合率99.29%，阴性符合率：99.28%，总体符合率：99.28%。12处理及报告12.1 免疫室操作人员打开LIS系统，录入待测样本的相关信息。12.2 在LIS结果处理系统中接收、处理相应的检测结果，发出报告。12.3检验结果的解释a. 检测为阴性的样本，提示未感染或未产生足够可以检测到的抗体。b 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告中注明所用试剂特征。系列监测中如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。c. 本试剂盒检测结果不是确认指标，用本试剂盒检测结果为临界值附近的可疑标本以及阳性标本，应严格按照全国艾滋病检测技术规范进行复检及确认。12.4 结果报告格式： 项目名称 缩写 结果 参考值 人类免疫缺陷病毒抗体 Anti-HIV 0-1 S/CO 在报告中包含完整的受检者信息，申请医生、样本信息、检验者、复核者等必要信息。13临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤1。有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤2。14检验方法的局限性1).本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。2). 严重溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的结果，避免使用此类标本。3). 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。4). 本品用于血清和血浆样本的测定，用于其他体液样本测定的可靠性尚未得到充分确认。15注意事项1). 操作前仔细阅读使用说明书，严格按照试剂盒内说明书进行试验操作。2). 避免在恶劣的环境（如含有84消毒液、次氯酸钠、酸碱或乙醛等高浓度腐蚀性气体及灰尘的环境）条件下进行试验。3). 加样前应保证磁微粒混悬液充分混匀，无肉眼可见沉淀。4). 微量移液器吸嘴不可混用，以免交叉污染。5). 样本中若存在沉淀物、悬浮物等可见杂质会影响试验结果。此类样本不得使用。6). 加入底物前，反应容器内的磁微粒必须震荡散开。7). 处理试剂和样本时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。所有样本及使用后的