【毕业学位论文】（Word原稿）猪Pit-1基因分子遗传多态性研究动物遗传育种与繁殖论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 猪 因分子遗传多态性研究 of of o: of of 猪 因分子遗传多态性研究 摘 要 催乳素（ 生长激素（ 促甲状腺素（ 动物垂体前叶分泌的具有重要生理功能的激素。而垂 体特异性转录因子（ 是动物垂体前叶特异表达的一种具有重要功能的转录因子，它与垂体中 因、 因、 因以及 身的启动子结合，调控这些基因的转录和表达，从而影响动物的生长、发育和繁殖。 本研究的目的是通过分子生物技术手段，寻找猪 因序列中的多态位点，为后续深入研究提供理论依据。试验选用北京黑猪、沂蒙黑猪、莱芜猪、巴马小型猪、滇南小耳猪、五指山猪、香猪 7 个中国地方猪品种以及英系大白猪、长白猪 、法系大白猪、杜洛克 4 个国外引入品种（系）共 11 个试验动物群体 508 头个体。采用 析方法研究猪 因的遗传变异，研究结果如下： 1. 应用 术，利用引物 7 个中国地方猪种 因第 4 外显子上发现 了一个突变位点。序列测定结果表明，其单核苷酸变异是由碱基 C T 的替换造成的，但并没有导致编码氨基酸的改变，均编码组氨酸。对 7 个中国地方猪群体共计 347 头个体的基因型进行了检测与统计分析， 衡适合性检验结果表明：在这 7 个群体中 ，沂蒙黑猪、巴马小型猪群体的基因频率和基因型频率都处于平衡状态（ P而北京黑猪、莱芜猪、滇南小耳猪、五指山猪、香猪群体则未达到平衡状态 (而长白猪和法系大白猪群体未处于平衡状态 ( in in of At so in 747bp of to in . 3. of of by 4, of to in be is of of of we be as to or of NA At we we to in 1 录 第一章 绪论 国养猪生产的发展现状 .子标记在动物遗传育种中的应用 分子标记技术的发展 . 分子标记在动物遗传育种中的应用 . . . . . . . . 因简介 白结构及功能 因在人类中的研究现状 因在鼠中的研究现状 因在猪中的研究现状 . 猪 究前景 研究目的及意义 .二章 猪 验材料 试验猪种的来源及采样方法 主要仪器设备 工具酶及主要试剂 . 14 要药品及试剂的配制 .验方法 试验猪种 . 猪 猪 统计分析方法 1个品种（系）猪的基因组 . 26 外显子的 序结果 . . 外显子扩增产物的 27 性克隆鉴定结果 测序结果 序列结果 分析 内含子的 . 猪 内含子扩增产物的 29 性克隆鉴定结果 测序结果 序列结果分析 31 . 猪 747 . 阳性克隆鉴定结果 测序结果 序列结果分析 对内含子中 . 内含子序列的克隆 . 猪 内含子序列的确定 .因频率和基因型频率的统计 . 40 第三章 讨论与结论 于 隆测序分析 .序结果讨论 .于猪 内含子序列的克隆 46 一个猪群体的遗传特性分析 . .论 48 参考文献 录 55 致谢 61 作者简介 第一章 绪 论 我国养猪生产的发展现状 我国养猪生产已经由现代化养猪生产方式代替了传统的养猪生产方式，从而使养猪生产的水平大大提高。目前，我国养猪生产已经有了较大的发展，主要表现在：第一，猪的存栏数和猪肉产量持续快速增长。 2003年猪的存栏数 47100万头，较 1978年增长 吨，较 1978 年增加 吨；出栏率 较 1978 年提高了 百分点。人均猪肉占有量大幅度提高。 2001 年人均猪肉占有量 1978 年的 二，规模化、集约化、工厂化养猪的迅速发展，开辟了养猪产业化的新局面。通过引进国外先进技术和设施，对养猪业的发展起到了示范和促进作用。规模猪场出栏猪占生猪总出栏量的比例已达到 30%。第三，猪品种选育、品种资源保护和良种引进均得到了加强。为适应养猪生产发展的需要，积极引入国外瘦肉型良种猪，除长白 猪、大约克夏外，还引进了杜洛克猪、皮特兰猪和汉普夏猪，以及迪卡、 格和达兰等配套系猪。通过新品种（系）或配套系培育以及杂种优势利用的研究，已经育成了 40 多个新品种（系）或配套系。同时，还研究和实施了我国地方猪种的保护及利用方法和途径。第四，饲料和添加剂工业发展迅速，跃居世界第二位。目前，我国已成为世界第二饲料工业大国。 2002年全国配合饲料产量达 8000万吨，其中，猪的配合饲料占很大比重。第五，市场的开放使养猪业运转体制发生了根本性的转变，牧工商一体化经营，产、学、研的结合，促进了养猪产业化的发展。 据有关部门统计，到 2010 年，我国人口将达到 ，如人均肉类消费水平为 70目前中等发达国家计算 )，其中猪肉约占 65%，即 国猪肉需求量为 每头胴体重 76需出栏肉猪 按出栏率 150%计算，需养存栏猪 于此，培育生长快，胴体组成性状好的品种则正是我们所追求的目标。 分子遗传标记的应用，为畜禽遗传改良带来了新的机遇，不仅可以对生长和肉质性状进行早期选择，还可以提高育种效率，加快新品种的选育。随着分子标记研究的逐渐深入，其必将会 在畜禽遗传育种中起到更重要的作用。 分子标记在动物遗传育种中的应用 子标记技术的发展 遗传标记 (指一些等位基因或遗传物质 ,其表型易于识别且遵循简单的孟氏遗传 (张细权等 1997)。遗传标记被学者们广泛地应用于动物遗传育种方面的研究，大致经历了以下的发展历程： 态遗传标记和生理生化遗传标记 形态遗传标记是遗传标记的最早形式。从形态学或表型性状上来检测遗传变异是最简单易行的方法，表型和基因型之间存在着密切的联系，根据表 型上的差异来反映基因型上的差异就成为形态学方法检测遗传变异的常用手段。尽管形态遗传标记简单直观，但它受表型、环境影响较大，导致其准确率低，而且畜禽众多经济性状多为数量性状，形态遗传标记则显得无能为力。生理生化遗传标记包括染色体、血型、蛋白质等的多态性。染色体多态性主要是指正常畜群中经常见到的多种染色体结构和形态的微小变异。染色体多态性又分为 态性、 Y 染色体多态性、染色体带型多态性及染色体多脆性位点这几种主要的多态性。血型是指红细胞表面抗原类型。确定家畜红细胞抗原型的血清学反应，主要包括凝集反应 和溶血反应两种方法。凝集反应是使红细胞与凝集素发生凝集的一种检查方法。溶血反应是使红细胞与溶血素以及补体相互作用，检查有无溶血的一种方法。目前已经发现猪的红细胞抗原型共有 15个系统。蛋白多态性是由 产生核苷酸改变而导致肽链上氨基酸改变而造成的，通过一定介质电泳分离可以检测出这种多态性。 1955年， 功地采用淀粉凝胶电泳方法分离血清蛋白，开辟了遗传标记的新天地。随着各种电泳技术的发展，以 代表的一批学者在动物血液、体液、脏器等部位检测出多种蛋白质遗传变异。自从 1958年牛的血 清淀粉酶多态性报道以来，在牛中已发现了 28 种蛋白质（酶）的 36 个座位存在多态性（ ， 1992），在猪、绵羊、山羊以及马中发现的多态座位数分别为 24、 27、 13 和 14（张细权等， 1997）。但是随着研究的不断深入，蛋白多态性的不足之处也被逐渐认识，蛋白多肽链中 1/4的氨基酸取代可采用电泳方法检测出来，但其余 3/4则无法得知。 子遗传标记 1953年沃森（ 克里克 （ 提出了 子双螺旋结构模型，预言了 遗传特性，宣 布了分子遗传学时代的到来。从 20 世纪 80年代开始，分子生物学和分子克隆技术的飞速发展带来了更为直接的遗传多态性检测方法，即测定遗传物质本身 变异，拓宽了遗传标记的研究领域，从而使得由基因产物的研究到基因本身的结构、组成和定位的研究成为可能。在长期的生物自然进化中，有许多因素能引起生物体 变化，可能出现一个碱基的突变，也可能由于倒位、易位、缺失或插入等导致多个乃至一段碱基对的变化。由于各种遗传信息都储存在 子中，所以生物个体间的差异在本质上就是 子的差异，因此，从理论上讲， 平上 的分子标记是最为可靠的遗传标记。 20世纪 80年代初， （ 1980） 发现了第一个 子水平上的遗传标记，即限制性片段长度多态性（ ,并被迅速广泛的应用于遗传分析中。随后， （ 1985） 发现了另一种分子标记，即 1985年多聚酶链式反应（ 术的创立（ ， 1985）对 分子生物学的研究具有划时代的意义。在 术的基础上建立了许多新的分子遗传标记及相应的检测技术。若从分子遗传标记在基因组作图方面的贡献考虑，可以认为分子标记主要经历了三代的发展历程，即 微卫星多态性及单核苷酸多态性（ 子标记在动物遗传育种中的应用 分子标记一出现就引起了动物遗传育种学家的广泛注意，展示了诱人的前景，为动物育种提供了新的策略，其应用几乎涉及到动物遗传育种的所有领域 : 动物基因定位：基因定位就是确定基因在遗传图（ 的位置 。可以利用分子标记将控制动物某一数量性状的微效多基因剖分为不同的数量性状位点 （ 将它们一一定位于染色体上，并进而分析各 效应及互作关系。 动物的标记辅助选择：分子标记可对 行标记或连锁分析，通过增加选择的准确性，缩短世代间隔，充分利用非加性效应，从而提高动物经济性状的遗传进展。 动物遗传资源的研究：分子标记在动物遗传资源研究中主要有以下几方面的用途： a. 优良品种或品系的鉴定。 b. 动物遗传多样性及分类研究。 c. 动物遗传资源的保护 。 d. 家养动物遗传资源的创新。 杂种优势分析：分子标记的出现，为探讨杂种优势基因的作用和表达，阐明杂种优势产生的机理，提出预测方法，提供了可能。 述 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现，尤其是 术问世以来，各种与 结合的基因检测技术的完善推动了基因研究的发展，如不对称 物的直接测序，核糖核酸酶切法等已成为基因分 析的有效工具。但这些方法操作比较繁琐，局限性较大，或要求实验条件高，因此不适合一般实验室使用。 1989 年问世的 为检测基因突变的方法，经不断改进和完善，更为简便、快速、灵敏，不但被用于检测基因点突变、短序列的缺失或插入，而且被用于 量分析、监测 断实验中的交叉污染情况以及传染源的调查等。 其简便、快速、灵敏等特点在动物遗传育种中已得到广泛应用。 （ 1994） 用 术检测人工受精和自然配种出生的奶牛生长激素基因的多态性，并探讨了将检测结果应用于育种选择 的可能性； （ 1995） 通过 法研究马的核糖体 态性，并指出该技术可应用于品种分类、血缘关系鉴定等领域； 普夏、长白和约克夏四个品种猪为材料研究单倍型生长激素基因的 态性与日增重、胴体瘦肉率及脂肪含量等性状的关系； （ 1994） 进一步研究了猪生长激素基因的 胴体瘦肉率、眼肌面积、日增重、胴体背膘厚等性状之间的关系；刘佳健（ 1996） 研究了猪的 因的 态性，发现了 2 个等位基因； 法检测了牛的 因的 3 非转录区多态性，发现了 3 个等位基因； 999)用 法检测了绵羊 因的第二外显子，分别发现了 2、 3、 4 个等位基因。 基本原理 析技术的基本程序为：首先 增特定的靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时， 链的迁移率除了与 的长短有关外，更主要的是取决于 链所 形成的构象。在非变性条件下， 链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象，这种构象由 链碱基决定，其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用（主要为氢键）来维持。相同长度的 链其顺序不同，甚至单个碱基不同，则所形成的构象不同，电泳迁移率也就不同。 性后，单链产物经中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，因靶 发生单碱基置换或个别碱基插入或缺失时，因迁移产生变化会出现泳带的变位，从而可将变异 正常 分开。由此可见， 析技术是一种 链凝胶电泳技术，它根据形成同一构象的等长 链在中性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。 特点 优点 ： 原理及操作简便，不需特殊仪器，操作步骤少。周期短。成本低，所用试剂价格相对低廉。适用于大样本筛选。常规方法在研究基因突变时需 序，术在测序前对 本进行筛选，从而大大避免了盲目测序时带来的人力，物力和时间上的浪费。对 始材料纯度要求不高，且所需量较少。可用非同位素进行检测。 缺点 ： 不能检测变异的 位置，且随 段长度增加，检测的敏感性逐渐降低。可能出现假阴性结果，这是由于点突变引起的空间构象变化甚微，迁移率相差无几所致，尤其是点突变发生在扩增片段的两端时。设置阳性和阴性对照，其结果应该是可信的。 述 限制性片段长度多态性（ 泛地应用于人类基因图谱的制备和致病或缺陷基因的探测与定位。而且，作为一种分子标记，在畜禽遗传图谱的构建、早期标记辅助选择等方面日益展现 出广阔的应用前景。 在于多种生物基因组 ，例如：人、家禽、玉米和西红柿等。根据 估计，在人类基因组中约有 1%的碱基对是多态的，其中又有 1%是由 法识别的。如果除去人类基因组中约 80%的高度重复序列不计，则含 3 109 个碱基对的人类基因组是约有60000 个可识别的 位。家畜具有与人类相似大小的基因组，理论上，家畜的 位数也是可以预测的。早在 1990 年之前，人类基因组就已经有至少 390 个 记基因被克隆出来。 基本原理 生物基因组中， 子的碱基顺序（除突变外）是稳定遗传的，在个体一生中和上下代传递间保持不变。 制性内切酶可以识别并切割 定碱基序列，并生成一定长度的段。对某一个体或基因型而言，由限制性内切酶切割而生成的限制性 段的长度也是固定不变的。在不同基因型的个体间由同一种限制性内切酶切割而生成的 段的长度可能不同，因为任何一个碱基的替代都可能破坏一个内切酶识别位点，使该位点免于被切割；亦可产生一个新的切割位点，从而导致生成较短的切割片段。此外， 列的插入或缺失都直接影响包含该序列的 制性酶切片段的长度。在不同个体或群体间，酶切片段的长度是多态的。这种多态性称为 制性片段长度多态性（ 异的显示和检测是通过 胶电泳和用克隆的 段作为探针进行分子杂交，再通过放射自显影（或非同位素技术）实现的。 特点 优点 ： 无表型效应， 记的检测不受性别，年龄的局限，也不会因为表达的组织，发育阶段或外界环境的不同而受影响。 记座位的等位基因之间呈共显性，因此，通过 电泳，杂交后的带型可以直接分析基因型。非等位的 间不存在上位互作效应，因而互不干扰。只要选用特异的探针或限制性内切酶就可产生足够的 记。 缺点： 一次只能检测一个位点。多态信息含量低，绝大多数多态信息含量数值在 2 3 之间。技术复杂，耗时费力，需用放射性同位素或非同位素标记探针。成本高，且对模板 5 10 g）。 因的研究现状 因简介 垂体特异性转录因子 垂体前叶表达，是 构域 (几种同源（异型）蛋白之一。参与调节机体细胞的生长与发育，并对垂体激素分泌细胞的基因转录起重要调节作用。 挥生物学功能的关键在于能够识别特异的基因顺序并与之结合，从而引起细胞内基因的转录，促进垂体前叶生长激素（ 催乳素（ 促甲状腺素（ 细胞基因的转录。 垂体特异性转录因子包含两种，即 者互为蛋白异构体，均存在于人和动物的垂体细胞内。基因组 析表明： 源于同一个基因，其第 2 号内含子经选择性剪接产生 因。在大鼠的研究中发现， 留了 因启动子 却失去了激活 因启动子的功能，这可能是由于 稳定性较差所致。白对垂体前叶 胞的发育、增殖起一定作用，但正常垂体前叶细胞 表达量仅是 达量的七分之一。 因在哺乳动物的垂体发育和激素表达过程中起重要作用。通过生物化学和个体发育学的研究表明， 重要的组织特异性转录因子，是畜禽垂体前叶特异表达的一种具有重要功能的转录因子。在哺乳动物的垂体前叶腺中参与激活 因的表达，它与垂体中因、 因、 因以及 身的启动子结合，调控这些基因的转录，通过调节这些基因的表达而对畜禽的生长、发育、繁殖和免疫等方面产生重要的影响，即对上述三种激素起到正调控作用。在由多种垂体激素缺陷而导致侏儒的鼠和人类中均已发现缺少 因的活性。由此可推断， 因的变异可导致垂体发育不全和阻碍 种 激素的分泌，引起矮小现象（ 出现。 表 在人类，牛及鼠中 因功能区域的同源性比较 he of of 2 94 94 96 95 90 0 94 91 94 90 91 6 92 86 88 87 85 白结构及功能 白属于 白族中的一员，其结构与 白结构很相似，由 291 个氨基酸组成，分子量为 33 3 个功能区组成，其一是含 129 个氨基酸的 N 端区；其二是含 142 个氨基酸的 白区；其三为含 20 个氨基酸的 C 端区。 N 端区内的转录激活区（ ）由 75个氨基酸组成，为富含羟基氨基酸的高保守区，其中羟基氨基酸占 30%以上，该区结构很像 的 C 末端的大亚基。含有数个脯氨酸，没有 螺旋 结构，在功能上为 活靶基因启动子的主要部位。实验表明，该区内 24 位的脯氨酸若被亮氨酸替代，其激活靶基因的作用就会丧失。 白区的主要功能是识别 异序列，并与之呈高亲和力结合，从而启动靶基因转录，该区又分为 源区（ 异区（ 部分。 源区由 59 个氨基酸组成，其中有 22 个氨基酸在 族中高度保守。 源区内可形成 3 个 螺旋结构。第一个 螺旋的碱性氨基酸作为核转运信息调节细胞功能；第二、三两个 螺旋形成进一步的转折螺旋样 结构；在第三个 螺旋中则包含一个六聚体（ 构。非常保守的碱性氨基酸镶嵌于 螺旋小沟内，与 亲和力结合。 已测出 源区与 架相结合的碱性氨基酸，它们分别为 13 位的赖氨酸、 25 位的赖氨酸、 46 位的精氨酸、 55 位的精氨酸、 57 位的赖氨酸以及 58 位的精氨酸。 半胱氨酸及色氨酸能稳定 源区内的 螺旋，如掺入脯氨酸破坏 螺旋，则 源区与 结合能力即完全消失。因此，位于 源区内的 螺旋和某些碱性氨基酸是 的识 别元件相结合的两大要素。 单独 源区与 合后的特异性远远不如完整的 白高， 异区对之起决定作用，该区能明显提高 白与 合的特异性达 1000倍以上。 异区的这种高度特异性取决于它能特异的识别 的核苷酸顺序。其识别顺序的特点是富含 A/T 区， )4。这种元件广泛存在于垂体细胞的基因上。 异区比 源区更保守，在 白域中 异区的 68 个氨基酸中的 27 个氨基酸无变化，根 据极性氨基酸的分布， 异区可分为 异区 A 和 异区 B 两个亚区，每个亚区各形成一个 螺旋。在溶液中， 异区 A 和 异区 B 又各自形成一长一短两个 螺旋。如果删除或替代 异区 A 和 异区 B 亚区内的碱性氨基酸，则异区与 异结合的能力大大下降。 白除了 N 端区和 白区外，由 20 个氨基酸组成的 C 端区对 白也很重要。它与 N 端区的 相对应，形成下游转录激活区。 在蛋白结构和功能上，各种动物的 很保守，它们在氨基酸水平 上有 96的同源性，在 平上有 90%的同源性。 因在人类中的研究现状 类 因的结构和定位 有关人类 因的研究日本学者报道的较早。 首先将 因定位在人的 3 号染色体上的 3域。该基因全长约 14 6 个外显子及 5 个内含子组成。其 列长1262码 291 个氨基酸。 因的突变及其与人类综合性垂体激素缺乏症 由于在缺少 泌细胞类型的矮小鼠系中发现了 因的突变，所 以这个基因内的突变是否在人类中也会导致相似的垂体激素的缺乏已引起了各国学者的高度重视。以综合性垂体激素缺乏症（ 人的 因突变为目标开展了广泛的研究。 1992 年， 对一个患有 陷症病人进行了研究。此病人表现为一系列精神发育阻滞和身材矮小，而患者母亲的体格和垂体激素水平均正常。利用特异的寡聚核苷酸引物扩增 异性和同源性区域，被扩增的 域对应于小鼠 因的外显子 4到 6 的区域，包括完整的 源性区域（ 大部分的 异性区域（ 取 3个正常的基因组 为实验对照，克隆产物的测序结果表明，在 异性区域没有发现异常，然而，密码子 271 位的 C 到 T 的变异，在大约二分之一病人的克隆产物中被发现。由此说明，在这个基因座只存在一个等位基因的突变。利用等位基因特异性扩增在 源性区域确定了这个变异，而病人母亲的 则没有这个变异。该突变使预测的 271 密码子的氨基酸由 变为 了进一步检测这个突变是否将改变 结合以及这个突变的白能否激活垂体基因的表达， 将含有编码 动子基因的荧光素酶报告基因与野生型和突变型 达载体进行共转染，导入到一个 失的细胞系中，结果野生型的 达载体激活了 动子的表达。证明突变的 够正常地结合 对 垂体中的功能起到了明显的抑制作用。随后，在 3个不相关的患有 者的 因中进一步证实了外显子 6 的 变。 1998 年， 发现了一个父母为近亲的 38岁的妇女表现为生长缓慢 和甲状腺机能减退，生长缓慢的症状早在幼年时就有所表现，而甲状腺机能减退的症状则仅从青春期开始表现。在其体内几乎检测不到生长激素和催乳素，且促甲状腺素的水平也极低。通过核磁共振发现其垂体发育不正常。分析发现同样在外显子 6 存在 C 到 T 的点突变，从而导致第 271 号密码子的氨基酸的转变。 在 源区的另一个重要突变是 无义突变。 在一对患有呆小症的姐妹中发现：姐姐患有 陷症，两姐妹中的姐姐在出生后 2个月就由于肺炎而死亡。其父母是第二代的堂兄妹，都是杂合子。突 变基因导致合成的截短肽链缺失了全部的 在此处人和鼠肽链的氨基酸序列是高度保守的。此为在人类中由于转录激活剂的缺失而导致大量靶基因缺失的首次描述。 1996 年， 对由健康父母生下的 4个患有 同胞进行了研究。通过对 因 6 个外显子的测序分析，在外显子 3 中发现了一个新的 T 到 G 的碱基改变，引起 135号密码子（ 白的 异性 合区域疏水核心内的 转换。所有患病的孩子在此突变点均为纯合型，而母亲却是 杂合型，因此认为这是一个隐性的遗传模式。 2001 年， 进一步证实了 突变产生了一个可以与 应元件结合的蛋白。 （ 1992）证实了一个单个的胞嘧啶对鸟嘌呤的颠换从而导致了第 158 位碱基的突变，使丙氨酸变为脯氨酸。 突变发生在 异域的 螺旋内并产生了一种蛋白，此蛋白能结合到 应元件上，但不能有效地激活其靶基因、生长激素及催乳素。此突变蛋白对生长激素细胞，催乳素细胞和促甲状腺素细胞的增生是必需的。此 异域的突变对 基因的亚型具有选择效应。 （ 1992）证实了 因的 3 个突变，即 中 突变发生在主要的反转录激活区域，碱基 C 到 T 的转换使得 为 基因突变的产物可以正常地与 合，但却显著地抑制了 活性。第 143 位碱基的突变是 G 到 A 的碱基替换，从而使密码子由 为 143 位氨基酸的突变发生在对于 合有重要功能的 异区域，使 为 变基因可产生显性或隐性的 表型。 （ 1995）发现了位于纯合位点的谷氨酸 250 被终止密码子（ 换的突变，突变导致了基因产物的 源区域的全部螺旋 3 的丢失。螺旋 3 直接涉及到 结合，因此该突变蛋白丧失了结合 能力及其转录活性。 （ 1998）发现了一个 因密码子 239 位的突变，突变位于 源区域第2 个 螺旋的起始部位，并且在所有的 白中高度保守。 突变蛋白产物可正常地结合 但不能刺激转录。 （ 2001）发现了两个新的 变点。一个是只有一个碱基突变的移码突变（ 747 可导致 源区域的 短蛋白缺失全部的 别螺旋。另一个是第 193 位氨基酸的错义突变，发生在 异区域的第 4 螺旋末端的 结果为 合蛋白和转录激活蛋白中 500 个折叠的还原。 在上述众多的突变中，其中第 172 位、第 143 位、第 158 位的突变为纯合子突变，均发生于 白区域。这些突变可部分或完全损害 合的能力，影响 致 失了转录激活功能。第 271 位和第 24 位的突变为单等位基因杂合子突变，突变产生的 够拮抗正常 功能，已突变的 然可以象正常 样高亲和力地与 合，但却以抑制剂的形式起作用。 由于突变产生了无功能的 白，破坏了 因转录的正向自我调节机制，因此 失了激活 及 泌细胞的基因转录功能，从而表现为激素分泌明显减少，垂体功能不全及垂体前叶萎缩，进而导致了侏 儒症的发生。 表 类 因的突变 in 置（氨基酸） 碱基变化 氨基酸变化 参考文献 1 4 C T et 1998) 2 4 C T et 1992) 120 C T et 1998) 135 T G et 1996) 143 G A et 1992) 158 el 1989); et 1992） 172 et 1998) 193 el 2001) 239 el 1998) 250 et 1995) 271 C T el 1992) et 1998) 因在鼠中的研究现状 因的结构与定位 因定位在鼠的第 16 号染色体上。其 长 1261码 291 个氨基酸。其 76