药物分析

药物的杂质检查,2,第一节 概述第二节 一般杂质的检查方法,第一节 概述,3,药物的纯度药物的杂质,第一节 概 述,4,1. 药物的纯度：指药物纯净的程 度。是判定药品质量优劣的一个 重要指标。,药物纯度综合评价： 外观性状 理化常数 杂质检查 含量测定,一、药物的纯度,5,概念：指药物中存在的无治疗作用、 影响药物的疗效和稳定性、甚 至对人体健康有害的微量物质。,检查杂质、控制纯度是保证药品质量、确保用药安全、有效的一个重要方面。,6,2. 杂质的分类,(1)按来源分：一般杂质和特殊杂质,一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如：H+、OH-、H2O、Cl-、SO42-、砷盐、重金属等,特殊杂质：指在该药物的生产或贮存过程中,根据药物的性质、生产方法和工艺条件,有可能引入的杂质.,7,（2）,按结构分：无机杂质和有机杂质,无机杂质 Cl-、SO42-、铁盐、As、重金属。,有机杂质 中间体、副产物、分解物、 异构体、残留溶剂.,8,(3)按性质分:信号杂质和有害杂质信号杂质：指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理. 如：氯化物、硫酸盐等.有害杂质：对人体有毒害的杂质.在质量标准中严加控制,以保证用药安全.如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等.,9,3. 杂质的来源,药物生产过程引入,药物贮存期间引入,10,（1）药物生产过程引入a:原料、反应中间体及副产物。 b:试剂、溶剂、催化剂类。c: 生产中所用金属器皿、装置所带来的杂质。d:从植物原料中提取分离药物时，引入的结构类似物及其他杂质。e:药物在制成制剂的过程中产生新杂质。,11,例1 盐酸普鲁卡因注射剂制剂生产 过程中产生新杂质,（1）,（2）,12,（2）药物贮藏过程引入a: 保管不善或贮存时间过长水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 b: 包装不当,13,例2:麻醉乙醚在日光、空气及湿气作用下,易氧化分解为醛及有毒的过氧化物 CH3CH2OCH2CH3 CH3CHO + CH3CH(OH)-O-O-CH(OH)CH3 （二羟乙基过氧化物） 药典规定: 起封后24小时内使用,14,例 3：四环素在酸性条件下可发生差向异构化反应,生成差向四环素(毒性高、活性低),pH 26,15,4. 杂质的限量检查（limit test) （1）杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量. （2）限量表示方法百分表示( %)百万分表示( ppm) （part per million）,16,（3）杂质检查方法(限量检查法),17,标准对照法,原理：取限度量的待检杂质对照品溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理后, 比较反应结果, 以确定杂质含量是否超过规定。,操作:平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.,18,灵敏度法,原理：以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量.,操作：在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应。,19,如：蒸馏水中氯化物的检查,5滴（1mL）,0.2mg Cl- /50mL 4g/mL 规定水中氯化物含量4g/mL,20,比较法,操作：取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质吸光度（旋光度）, 与规定限量比较, 判断供试品中杂质限量。,21,例：肾上腺素中肾上腺酮的检查,盐酸溶液,规定：0.05,22,（4）杂质限量计算,注意: 单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法%或ppm,23,例1. 对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,样品溶液:,对照品溶液: 标准NaCl溶液(10g/mlCl-)，取5.0ml同法操作比较,浊度不得更大.计算氯化物限量是多少(% )？,24,L=,CV,=,S,100%,10 10-6 5.0,2.0 ,25,100,100%,=0.01%,25,例2. 葡萄糖中重金属的检查,方法：,规定：含重金属百万分之五(5ppm)计算：应取标准铅溶液(10g/mlPb)多少ml？,26,第二节 一般杂质的检查方法,一般杂质检查包括： Cl-、SO2-4、 Fe3+ 、 砷盐、酸碱度、溶液澄清度与颜色、炽灼残渣，干燥失重、有机溶剂残留量检查法等。,27,1、来源：生产过程用到盐酸或药物呈 盐酸盐。2、目的：作为信号杂质，反映药物的 纯净程度，及生产过程是否 正常。,28,3、原理 标准对照法,药物：,对照：,白色浑浊,白色浑浊,HNO3,HNO3,29,4、操作方法(对照法),样品管,0.60g,对照管,0.010%,30,暗处放置5 min (避免光线使 AgCl分解),5、结果观察方法,黑色的背景上 自上而下的观察,31,6、注意事项及讨论,（1）测定条件, 氯化物的最适检测浓度范围：,50ml供试液中含5080g的Cl-所显浑浊梯度明显,相当于标准NaCl溶液5.08.0ml。,(10gCl-/ml),32,加稀硝酸的目的,a: 加速AgCl生成并产生较好的乳浊 b: 避免弱酸银盐如：Ag2CO3Ag3PO4 、Ag2O 的形成而干扰检查。,33,试剂：硝酸银, 稀释到40mL后加AgNO3试液的目的：,使生成均匀的白色浑浊而非白色沉淀。, 避光、暗处放置5分钟后比浊的原因：,氯化银见光易分解。,平行操作,34,（2）干扰及排除,供试品溶液有色时的处理方法,a.内消色法如：枸橼酸铁铵（棕黄色）氯化物的检查,b.外消色法,向供试品溶液中加入某种试剂,使溶液颜色褪去后再依法检查。,35,供试品溶液显碱性的处理方法,先中和为中性后再检查 作用：避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。,36,1、原理 标准对照法,白色浑浊,白色浑浊,HCl,HCl,37,2、操作方法(对照法),样品管,对照管,样品,比浊,K2SO4（0.1mgSO42-/mL),25%BaCl2,50mL,5mL,用,水,稀,至,38,3、注意事项及讨论,（1）测定条件, SO42-的最适检测浓度范围：,50ml溶液中含0.10.5mg的SO42-所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4(0.1mgSO42-/mL)溶液15ml。,39,加盐酸的目的,稀盐酸：2mL/50mL,防止BaCO3、Ba3(PO4)2等沉淀生成。,BaCl2的浓度为25%,呈现稳定的浑浊度。,40,（一）硫氰酸盐法,1. 原理标准对照法,红色,红色,HCl,HCl,41,2. 操作,比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,42,3. 讨论,（1）测定条件, Fe3+的最适检测浓度范围：, 铁标准溶液10 gFe3+/ml硫酸铁铵加入硫酸配制(防止铁盐水解）,仪器分析线性范围5 90g Fe3+ /50ml目视比色浓度范围1050g Fe3+ /50ml,43,加盐酸的目的（稀盐酸：4mL/50mL),防止Fe3+水解。,加入过硫酸铵的目的,44,加入过量硫氰酸铵的目的,a.增加生成配离子的稳定性,提高 反应灵敏度。b.消除氯化物等与铁盐生成配位 化合物所引起的干扰。,45,（2）干扰及排除,为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。,具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。,46,干扰离子的影响：Cl-，PO43-，SO42-,a: 适当增加酸度b: 适当增加硫氰酸铵的加入量C:正丁醇萃取后比色,47,重金属指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属。 如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、 Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等.,中国药典（2005年版）共收载四法。,48,第一法:硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸、乙醇的药物最常用第二法:炽灼后检查法 适用在水、乙醇中难溶或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物.第三法:硫化钠法 适用于难溶于稀酸但能溶于碱性溶液药物(巴比妥类、磺胺类)第四法:微孔滤膜法 适用于重金属限量低(2-5mg) 药物.,49,第一法 硫代乙酰胺法,1.原理 标准对照法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。,50,2. 操作方法,样品管,对照管,51,3. 讨论,（1）测定条件, Pb2+的最适检测浓度范围：,目视比色的浓度范围：10 20g/27ml 相当于Pb2+标准溶液12ml(10g/ml),52,反应试剂：硫代乙酰胺试液,H2S试液：恶臭和毒性,不稳定,易被空气氧化而析出硫,浓度难以控制。,53,醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5,pH在3.03.5时, 硫化铅沉淀较完全.酸度增大, 呈色变浅甚至不呈色.若样品用强酸溶解, 在加入硫代乙 酰胺前, 加氨水至中性.,54,（2）干扰及排除, 供试品溶液有颜色,a. 内消色法,b.外消色法,55,无铅杂质相同颜色澄清液,样品pH3.5,硫代乙酰胺,过滤,滤液,标准Pb液,对照管,样品管,除去PbS,硫代乙酰胺,a. 内消色法,56,b.外消色法,. 稀焦糖溶液调节,. 指示剂调节,57,第二法 灼烧后检查,适用于在水、乙醇中难溶或能与重金属离子形成配位化合物的有机物。,58,1.原理,供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完全，而重金属游离，再按第一法检查。,59,缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试品 炭化 加热 HNO3 500-600H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液注意：做空白试验,放冷,2.操作,60,3. 讨论,（1）HNO3处理后必须蒸干除尽氧化氮。,（2）炽灼温度严格控制500-600。,61,第三法 硫化钠法,适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查. 如：磺胺类与巴比妥类药物,62,1.原理 标准对照法,63,2.操作,取供试品适量，加NaOH试液5ml和水 20ml使溶解后，置纳氏比色管中，加Na2S试液5滴，摇匀，与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较.,3.讨论,Na2S临用新配。,64,第四法 微孔滤膜法,原理 标准对照法,同第一法 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。,本法适用于重金属限量低的药物(2-5g).,65,(二) 白田道夫法,(一) 古蔡法(CHP),(三) Ag-DDC法(CHP),66,(一) 古蔡法（Gutzeit）,1. 原 理标准对照法,遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较，不得更深。,67,2.装置：,检砷瓶A导气管B具孔塞C, 导气管B中装入醋酸铅棉球60mg,3.操作, 旋塞C的平面上放一片溴化汞试纸, 样品、对照品分别置于检砷瓶中, 加浓盐酸5ml与水21ml, 再加2.5%碘化钾试液5ml 与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴, 在室温放置10分钟, 加锌粒2g, 立即将装妥的导气管 B 密塞于A 瓶上, 置25-40 水浴, 反应45分钟, 取出溴化汞试纸, 比较砷斑.,68,69,4. 讨 论,（1）KI的作用,还原剂As5+As3+,以增大AsH3的生成速度.,4.1 测定条件,70,（2）酸性SnCl2的作用 (3方面), 还原剂,. As5+As3+,71,. 将KI被氧化生成的I2再还原为I-,进而促进AsH3不断生成,：使I与Zn+形成稳定的络离子促进反应正向进行,72, 消除锑化氢干扰,SnCl2与KI可抑制锑化氢的生成， 100g锑存在下不干扰测定,73, SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐,起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生,74,（3）PbAc2棉花的作用,PbAc2棉花用量60mg, 高度60-80mm, 使砷化氢以适宜的速度通过。,75,（4）HgBr2试纸的作用,HgBr2试纸与AsH3作用生成砷斑. HgBr2试纸较HgCl2试纸灵敏 但生成砷斑不够稳定 保持干燥避光,立即比较,76,（5）反应的最佳条件, Zn粒的大小及用量 大小：能通过1号（8502000m） 用量：约2g, 标准砷溶液 2 ml (1 g /ml),临用新配,根据限度不同改变取样量：,取样量：,L为2ppm；S=1g L为1ppm；S=2g, 反应温度： 2540C、45min,77,4.2 古蔡氏法特点,优点：灵敏度高(1 g As),缺点：Sb干扰,本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。,78,(二) 二乙基二硫代氨基甲酸银法 (Ag-DDC法， silver diethyldithiocarbamate),砷盐的限量检查, 微量砷盐的含量测定。,本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,79,1. 原 理,第二步：,第一步：同古蔡氏法生成砷化氢,目视比色法 仪器分析 510nm,6Ag,红色胶态银,80,2. Ag-DDC法的特点,优点： a. 灵敏度高 0.5 gAs/30mL. b.可限量还可定量（仪器测定） c. Sb干扰小,81,与第一法相比，前者生成与溴化汞生成砷斑，后者则被吸收反应。,结果较稳定，重现性好。,本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,82,(三) 白田道夫法,对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡法,需用白田道夫法.,83,1、目的：控制药物中有色杂质限量。,2、方法：ChP采用三种方法检查。,第一法 目视比色法 即与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察。,84,标准比色液的配制,不同量水稀释,85,第二法 分光光度法 单一波长定量,第三法 色差计法 全波长范围定量,86,七、易碳化物检查法,2.7,1、目的：检查药物中遇H2SO4易炭化 或易被氧化呈色的微量有机杂质。,87,对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液（2）由CoCl2，K2Cr2O7，CuSO4液按规 定方法配成的对照液,88,1、目的：检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。,2、检查方法：对照法,3、判断： 供澄清度= 溶剂澄清度， 供浊度 0.5号浊度标准液。,澄清,89,4、讨论：,浊度标准液的配制,（白色浑浊）,配制原理：,90,1、目的：检查有机药物中混入的各种无机杂质(金属氧化物或盐类)。,限量一般为0.1%0.2%,2、原理：,炽灼残渣量一般为12mg.,91,3. 操作方法,92,4. 讨论,（1）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。,（2）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化。,93,十、干燥失重测定法,2.10,1、干燥失重：是指药物在规定条件下，经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。,2、测定方法：,（1）常压恒温干燥法（2）常压室温干燥法（干燥剂干燥