诊断临床常用免疫学检查

临床常用免疫学检查,免疫学检测分体液免疫检测和细胞免疫检测。血清免疫球蛋白检测血清补体细胞免疫检测肿瘤标记物检测自身抗体检测,第一节 血清免疫球蛋白检测,是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白,由浆细胞产生,存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的表面，与相应抗原结合后发挥其生物学功能。IG根据其功能及理化性质分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。一般用免疫比浊法测定。、,一.免疫球蛋白G（IgG）检测,IgG为人体内含量最多的Ig，占Ig的70-80%，也是唯一透过胎盘的抗体。1.增高 多克隆升高 （Ig多项同时升高）：慢性感染、慢性肝病、肺结核、自身免疫病（RA、SLE等） 单克隆升高：免疫增殖病如MM2.降低 先天或获得性体液免疫缺陷、重链病、轻链病、使用免疫抑制剂等,二、免疫球蛋白A（IgA）检测,IgA分血清型和分泌型，血清型占Ig的10-15%，分泌型在外分泌系统中具有重要的免疫功能，如呼吸道、消化道、泌尿生殖道的局部感染密切相关。增高：IgA型MM、SLE、RA、肝硬化、肾病等降低：IgA缺陷反复呼吸道感染、泌尿道感染等。,三.免疫球蛋白M（IgM）检测,IgM是五聚体，为分子量最大的Ig，称为巨球蛋白，占Ig的5-10%，凝集反应和强大的补体激活能力，在机体早期免疫防御中具有重要作用。增高：感染早期、RA、SLE等，巨球蛋白血症。降低：非IgG型重链病，其他类型的MM，免疫缺陷、肾病综合症、使用免疫抑制剂等。,四.免疫球蛋白E（IgE）检测,IgE是血清中含量最低的一类Ig，属于亲细胞抗体，可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgEFc受体结合，介导I型超敏反应；抗寄生虫免疫中介导ADCC作用，杀伤寄生虫。IgE增高见于：IgE型MM，各种过敏性疾病，寄生虫感染等；,第四节 肿瘤标记物检测,肿瘤标记物（Tumor marker)是在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。临床主要应用于肿瘤普查、诊断、疗效观察。主要包括蛋白质类、糖类、酶类、激素类等，不反映机体免疫功能状态，用免疫学的方法进行检测。,一.甲种胎儿球蛋白,甲种胎儿球蛋白（AFP）是胎肝合成的一种糖蛋白，出生后AFP的合成很快受到抑制。当肝细胞或生殖腺组织发生恶性病变时，癌细胞出现返祖现象，以致血液中AFP含量明显升高，对原发性肝癌的而言，是特异性最强的标记物。参考值 500g/L持续4周，排除妊娠、生殖腺胚胎肿瘤即可确诊。慢性活动性肝炎和肝硬化病例有30%的低浓度阳性，多不超过200g/L。,AFP异质体：临床上也出现良性肝病的AFP值明显升高400g/L，或原发性肝癌的AFP值偏低400g/L。根据血清AFP浓度不易区别良恶性肝病。采用扁豆血凝素LCA亲和双向放射免疫电泳检测，显示血清AFP可分为LCA结合型和LCA非结合型两种异质体，两者同时存在但各占总量的比值因病而异。LCA结合型AFP 25% 肝癌,二.癌胚抗原,癌胚抗原（CEA）由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞合成，妊娠6个月后渐减少，出生后含量极低，在部分恶性消化道肿瘤中异常升高。消化道肿瘤如胰腺癌、结肠癌和某些肺癌、乳腺癌等常明显升高。,三.前列腺特异抗原,前列腺特异抗原（PSA）是前列腺分泌的单链糖蛋白，存在于前列腺管道的上皮细胞中，血清中80%以结合形式（C-PSA）存在时，20%以游离形式存在（F-PSA）。是前列腺癌最有价值的肿瘤标志物，已被广泛应用于前列腺癌的筛选、早期诊断。60-90%前列腺癌患者血清PSA升高，手术后明显下降。前列腺良性增生、前列腺炎可轻度升高，一般20ug/L。前列腺癌患者血清中F-PSA总PSA比值明显较前列腺增生患者低，当PSA值为420ng/ml时，应用F-PSA总PSA比值来区别癌和增生，F-PSA和PSA联合检测对诊断前列腺癌更有意义。,四.糖链抗原19-9,糖链抗原19-9（CA-199) 是一种糖蛋白，胚胎期分布于胎儿胰腺、肝胆、肠等，成人胰、胆等有少量存在。胰腺癌和消化道癌时升高，可辅助诊断这类癌。尤其对胰腺癌有较高特异性和灵敏度。,五.癌抗原125,癌抗原125（CA125）是一种糖蛋白，存在于卵巢癌的上皮细胞内。当患有卵巢癌和子宫内膜癌时，患者血清CA125水平可明显升高。卵巢癌病人血清CA125水平可明显升高，尤其作为疗效观察和判断复发的标准。,六、癌抗原15-3,癌抗原15-3（CA15-3）是一种糖蛋白，在乳腺癌患者血清中可见升高。乳腺癌30-50%明显升高，常用于观察乳腺癌治疗疗效及判断有无转移。,七.神经元特异性烯醇化酶,神经元特异性烯醇化酶（NSE）在糖酵解途径中，烯醇化酶催化甘油分解。由三个亚基（、）组成，并形成5种同工酶（ 、 、 、 、 ），亚基同工酶存在于神经元和神经内分泌组织，与神经内分泌起源的肿瘤有关。小细胞肺癌NSE水平明显升高神经母细胞瘤NSE水平也明显升高,第五节 自身抗体检测,正常情况下机体免疫系统不对自身组织、细胞产生免疫应答称为免疫耐受；某些因素可导致的免疫耐受破坏，机体免疫系统对自身抗原产生免疫应答，产生自身抗体。自身抗体检测主要用于诊断自身免疫性疾病（AID）。主要包括SLE、RA、干燥综合征、系统性硬化病、多发性皮肌炎和混合结缔组织病等。,一.类风湿因子,类风湿因子（RF）是变性的IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。类风湿性关节炎约70%阳性，其它自身免疫性疾病也有一定的阳性率，故特异性不高，但对诊断明确的RA，RF的滴度可判断其活动期。,二、抗核抗体,抗核抗体（ANA）是指血清中存在的能和自身组织细胞核不同成分发生反应的自身抗体总称。各种细胞核成分包括脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等。自身抗体主要是IgG，也可IgM、IgA、IgD、 IgE，无器官、种属特异性，因此可以用鼠肝细胞核或Hep-2细胞核作抗原，用IFA进行检测。根据细胞核的荧光图像可分为均质型、边缘型、颗粒型、核仁型,ANA阳性：最多见于未治疗的SLE，阳性率达80-90%，活动期SLE几乎100%阳性，也可见于药物性狼疮、混合性结缔组织病、系统性硬化症、多发性肌炎等SLE常见边缘型、均质型颗粒型多见于混合结缔组织病核仁型多见于系统性硬化症,边缘型,均质型,颗粒型,核仁型,三.抗DNA抗体,抗ds-DNA：抗双链DNA抗体，见于活动期SLE病人，阳性率70-90%，阳性与SLE活动期及狼疮性肾炎发病机制有关。抗ss-DNA：抗单链DNA抗体，见于SLE，阳性率70-95%，尤其合并狼疮性肾炎患者。,四.可提取核抗原多肽抗体谱,可提取核抗原（ENA）是细胞核蛋白的提取物，根据相对分子量的不同分为不同的组分。如Sm、核糖体、Scl-70、Jo-1、SS-A、SS-B等。自身免疫性疾病时机体对它们产生不同的抗体。一般用IBT检测。抗Sm抗体：SLE标记抗体。仅在SLE可检出此种抗体，阳性率 20-30%，称为肾保护性抗体，阳性时肾损发生率低或肾损程度低，预后较好。 抗RNP抗体：抗核糖核蛋白抗体。MCTD阳性率最高。抗SS-A/抗SS-B：抗干燥综合症A抗原及B抗原抗体，在SjS检出率最高60%左右，一般抗SSB与抗SSA同时存在。抗JO-1抗体：多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)标记抗体，检出率10-25%。抗Scl-70抗体：系统性硬化症(PSS)标记抗体，检出率30-40%。,病毒性肝炎标志物检测,病毒性肝炎(viral hepatitis)是由多种肝炎病毒引起的，以肝脏炎症和坏死病变为主的一组传染病。按照病原分类，目前已经确定的病毒性肝炎共有5型，即甲型(HAV)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)、戊型(HEV)。近年来还发现庚型(HGV)和输血传播病毒(TTV)，但其致病性还有待进一步确定。,7种病毒中，除HBV和TTV属于DNA病毒外，其余均属于RNA病毒。甲型和戊型肝炎是粪-口传播途径，传染源是食物和水，以急性感染为主，未见慢性患者和病毒携带者。乙型、丙型和丁型肝炎是垂直传播、血液传播和性传播途径，传染源是慢性患者和病毒携带者，绝大多数属于慢性感染和亚临床感染。,甲型肝炎病毒抗体测定IgM型抗体阳性是特异性的早期诊断指标，感染后约1-4周后出现，存在于起病后6个月之内。IgG型抗体出现于恢复期，可持久存在，是保护性抗体，即获得免疫力的标志，也是既往感染的标志。,丙型肝炎病毒抗体测定IgG型抗体和IgM型抗体并非保护性抗体，阳性说明血液有传染性，抗病毒治疗后， IgG型抗体一般不会在短时间内转阴，不能作为早期诊断指标和疗效监测指标。IgM型抗体可作用于早期诊断，可反映病情的活动性。,乙型肝炎标志物检测,HBV基因组结构,pre-s1,pre-s2,S,P,C,pre-c,X,HBV DNA 3.2 kb,乙 肝,pre-S1 pre-S1蛋白pre-S2 pre-S2蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPX HBxAg,编码,HBsAg,pre-S2,pre-S1,S,P,pre-s1,出现时间：HBV感染后26个月,持续时间：,急性自限性肝炎：6个月内可消失,慢性肝炎或病毒携带者：可持续阳性,1. HBsAg,HBsAg 有抗原性而无传染性,HBV,S 基因,整合,肝细胞DNA,持续表达,“空心汤团”,HBsAg,有无传染性要看HBV-DNA是否同时存在,慢性乙肝患者HBsAg的表达模式,2. 抗-HBs,出现时间：急性感染后期或HBsAg 消失后,抗-HBs为保护性抗体,其出现标志着HBV感染进入恢复期,HBV C区基因,前C区,C 区,前C / C 蛋白,HBeAg,HBcAg,表 达,分泌到细胞外,HBeAg进入血液中,3. HBeAg,HBeAg是病毒复制和传染性强的标志,4. 抗-HBe,出现时间：随着HBeAg的消失而出现,抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低。抗- HBe（+）多见于HbeAg转阴的病人，但非保护性抗体，不能抑制HBV增殖。,5. HBcAg,乙 肝,HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或Dane颗粒 核心中，进入血液中很快分解。,一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc,6. 抗-HBc,抗HBc-IgM：是HBV感染者病毒活动的标志,抗HBc-IgG：凡 HBV感染者均可阳性,HBcAg的免疫原性最强,不是保护性抗体，有IgM、 IgA、 IgG,可终身阳性,7. HBV DNA,是病毒复制和有传染性最直接的证据,乙 肝,测定DNA，等于测定HBV，它与HbeAg同时升高，对判断病情和肝炎疗效有实用价值。,8. pre-s1、pre-s2抗原测定,是HBV侵入肝细胞的主要结构成分，pre-s1、pre-s2蛋白阳性提示HBV复制活跃，乙肝活动期标志物。,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,急性肝炎早期，传染性强,乙肝病毒标志物的常见组合分析,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,急性或慢性现症感染，传染性强。,“大三阳”,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,有无传染性应结合HBV DNA检测结果,“小三阳”,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc ,有过HBV感染，目前有无传染性应结合HBV