动物细胞与组织培养

动物细胞与组织培养, 动物细胞融合, 单克隆抗体制备, 细胞核移植技术和动物体克隆动物,动物细胞工程,(1) 动物细胞与组织培养,1、定义:,2、选材：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,动物细胞培养指在体外模拟动物体内环境，将动物细胞或组织在无菌，温度适宜和营养充分的条件下，使其继续生长，增殖并维持原有结构和功能的技术。,原因:细胞生命旺盛，分裂能力强.,肿瘤组织或细胞 正常组织或细胞,动物组织或细胞培养的难易程度,分化程度低的组织或细胞 分化程度高的组织或细胞,幼体组织或细胞 老龄组织或细胞,3、动物细胞培养条件：,(1)、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素 定期更换培养液 ）,防止培养过程中污染 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害,(2)、培养基成分：种类：,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等,?,?,(3)、温度和PH 37 左右, 7.2-7.4(4)、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,和植物组织培养基相比有何独特之处？,液体培养基 、成分中有动物血清（补充合成培养基所缺乏的物质）等,4.动物细胞生长特性：,细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,5.过程：,原代培养：一般细胞繁殖1-10代，就发生接触抑制不在分裂，这种培养就要原代培养。,传代培养：贴满瓶壁的细胞由于接触抑制不再分裂，需重新用胰蛋白酶处理，再分瓶培养让细胞继续增殖。,细胞株：原代细胞一般传至10代左右生长停止，大部分细胞衰老死亡，少数存活到4050代，这种传代细胞为细胞株，,细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶,10代细胞,原代培养,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,5.过程：,动物组织块,细胞悬液,原代培养,传代培养,胰蛋白酶处理,幼龄动物的器官组织；动物胚胎,动物细胞培养,1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？2.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？3.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,胰蛋白酶水解蛋白质,蛋白质,蛋白质和磷脂,能,注意时间的控制,不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近,问题与思考,5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养，使每个细胞与培养液接触,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制,4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？,7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。,将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。,这样的过程叫做传代培养,8、如何理解原代培养和传代培养？,9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？,10、有些为何能一直传下去？,在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养,不能,遗传物质发生改变，向癌细胞方向发展。,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,获得细胞或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物组织和动物细胞培养的比较,6、动物细胞培养应用,大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据,1、下列属于动物细胞工程中的工具是（ ） A限制性内切酶 BDNA连接酶 C胰蛋白酶 D果胶酶,C,2、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（ ）A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D培养至50代后继续传代的细胞是细胞株,B,3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养为胚状体。,A,4、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答,(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是_，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是_. (3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有_ _等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第 代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为_.,幼龄动物的器官、组织或动物胚胎,原代培养,10,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清,使每个细胞能与培养液接触,胰蛋白,剪碎,(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_处理，然后配置成_，再分装。(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是_。,细胞没有发生癌变,胰蛋白酶,细胞悬浮液,5某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_。（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是_ 。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用_。,多,补充合成培养基缺乏的物质,维持溶液的PH,（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长_。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用_消化处理。（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_。,停止,多,胰蛋白酶,抗生素,（5）已知癌细胞X过量表达与肝肿