病原性球菌及检验.ppt

对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症 又称化脓性球菌 G C 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌G C 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 卡他布兰汉菌 第十七章病原性球菌及检验 1 了解病原性球菌的概念及种类 2 熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性 致病性和免疫性 3 掌握葡萄球菌 链球菌 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法 学习目的与要求 第一节葡萄球菌属 Staphylococcus 一 形态与染色G 球形 无鞭毛 无芽孢 呈葡萄串状排列 一 生物学特性 二 培养特性营养 要求不高 耐盐 液体 均匀浑浊生长普通琼脂平板 血液琼脂平板 高盐甘露醇平板 金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落 其他葡萄球菌为白色菌落 三 生化反应活泼分解多种糖类 蛋白质 氨基酸 如 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 甘露醇 触酶 区别于链球菌属 四 抗原构造 蛋白抗原 多糖抗原金黄色葡萄球菌 核糖醇磷壁酸 检测磷壁酸 有助于金葡菌感染诊断 凝固酶 甘油磷壁酸 五 分类 个种及亚种 按色素分类 金 白 柠 按凝固酶分类 凝固酶阴性 凝固酶阳性葡萄球菌 按噬菌体分类 金葡菌分为5群26型4 据色素 生化反应分 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 三种葡萄球菌的主要性状 六 抵抗力无芽胞菌中最强 耐干燥 对石炭酸 升汞 龙胆紫敏感 易产生耐药性变异 如 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA MRSA常呈多重耐药 对青霉素 氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1 3 3 及14 长期住院 反复使用各种广谱抗菌药物 烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素 MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源 MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA 二 致病性和免疫性 一 致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素 1 血浆凝固酶 coagulase 分 结合型凝固酶 游离型凝固酶 鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标 2 葡萄球菌溶血素 staphylolysin 3 杀白细胞素 leukocidin 4 肠毒素 enterotoxin A B C1 C2 C3 D E G H9个血清型 5 表皮剥脱毒素 exfoliativetoxin 6 毒性休克综合征毒素1 toxicshocksyndrometoxin1 TSST1 二 所致疾病1 侵袭性疾病 1 皮肤软组织感染特点 病灶局限且脓汁粘稠 2 内脏器官感染 3 全身感染 4 尿路感染 2 毒素性疾病 1 食物中毒 2 烫伤样皮肤综合征由表皮剥脱毒素引起 3 毒性休克综合征由TSST1引起 4 假膜性肠炎 人类凝固酶阴性葡萄球菌 CNS 感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见 CNS主要引起以下几种感染 泌尿系感染 细菌性心内膜炎 败血症等 其中大多为医院内感染 此外 心脏起搏器安装 置换人工心脏瓣膜 长期腹膜透析 静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染 3 凝固酶阴性葡萄球菌的致病性 三 微生物学检验 一 标本采集 二 检验程序 三 检验方法 三 微生物学检验 一 标本采集根据病情采集标本种类 脓液 伤口分泌物 穿刺液 血液 尿液 痰液 脑脊液 粪便等 注意 无菌操作 避免污染 二 葡萄球菌检验程序 脓液 咽拭子 穿刺液尿液 痰液 脑脊液血液 粪便 呕吐物 直接涂片染色 增菌培养 分离培养 血平板 分离培养 高盐甘露醇平板 取可疑菌落 鉴定试验药敏试验 涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验 报告 初报 三 检验方法 1 直接涂片适用于 正常情况下无菌的标本 如脑脊液 伴有炎症细胞的其他体液标本 脓液等 初步报告 查见革兰阳性葡萄状排列球菌 疑为葡萄球菌 或 查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌 2 分离培养50ml葡萄糖肉汤 增菌 浑浊 无菌 7天 报告 无菌生长 脑脊液 脓液 穿刺液 咽拭 尿液 血平板 血液标本5ml 粪便 呕吐物 高盐甘露醇平板 三 检验方法 3 鉴定试验 1 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌 2 甘露醇发酵试验 金黄色葡萄球菌 3 耐热核酸酶试验 金黄色葡萄球菌 肠毒素测定 金黄色葡萄球菌产生 5 SPA检测 金黄色葡萄球菌 6 凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定 7 API葡萄球菌鉴定试剂盒 四 结果评价和报告 1 金黄色葡萄球菌 无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床 2 表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌 从输液导管 人工植入组织中分离到 应视为致病菌 3 尿培养计数 103 104为阳性菌尿标准 4 其他凝固酶阴性葡萄球菌 引起感染流行或治疗失败时 应鉴定到种 5 金黄色葡萄球菌 MRSA 头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时 不应报告 因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药 第二节链球菌属 Streptococcus 一 链球菌 一 生物学特性 一 形态与染色G 球形或椭圆形 呈链状排列 无鞭毛 无芽胞 有荚膜 一 生物学特性 二 培养特性条件 营养要求较高 多数为兼性厌氧菌 少数专性厌氧 液体 沉淀生长 絮状或颗粒状 普通琼脂平板 不生长 血液琼脂平板 三 生化反应活泼分解多种糖类 蛋白质 氨基酸 菊糖 胆汁溶菌试验 optochin敏感试验 触酶 区别于葡萄球菌属 区别甲链与肺链 四 抗原构造 多糖抗原 C抗原 群特异性 蛋白抗原 M T R S 型特异性 与致病有关的是M蛋白抗原 3 核蛋白抗原 无特异性 多糖抗原 蛋白质抗原 核蛋白抗原 链球菌抗原构造模式图 荚膜 五 分类40个种及亚种 按溶血情况分类 1 甲型溶血性链球菌 菌落周围有1 2mm宽的草绿溶血环 称甲型溶血或 溶血 为条件致病菌 2 乙型溶血性链球菌 菌落周围形成一个2 4mm宽的透明溶血环 称乙型溶血或 溶血 又称溶血性链球菌 致病力强 引起多种疾病 3 丙型链球菌 无溶血环 不致病 按抗原结构分类 按C抗原分群 ABCD 20群 对人致病的以A群为主 按M蛋白分型 如A群 100个型 B群 4型 C群 13个型 五 分类 六 抵抗力不强 60 30min杀死 对多种消毒剂敏感 乙链 对青霉素 四环素 红霉素等敏感 二 致病性和免疫性 一 致病物质1 链球菌溶血素 1 链球菌溶血素O SLO SLO抗体抗链球菌溶血素O试验 协助诊断风湿热 1 400 2 链球菌溶血素S SLS 无抗原性 2 致热外毒素 猩红热毒素 红疹毒素 3 M蛋白 4 透明质酸酶5 链激酶6 链道酶 二 所致疾病主要由A群链球菌引起 1 化脓性感染 由皮肤伤口侵入 经呼吸道侵入 其他途径 如产褥热 蜂窝组织炎 特点 病灶界限不清 脓汁稀薄 2 中毒性疾病 猩红热由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病 3 变态反应性疾病 风湿热急性肾小球肾炎 二 致病性和免疫性 4 其他疾病 甲型 草绿色 链球菌 引起亚急性细菌性心内膜炎 三 微生物学检验 一 标本采集 二 检验程序 三 检验方法 一 标本采集根据病情采集标本种类 脓液 鼻咽拭子 血液等风湿热查血清抗体 二 链球菌的检验程序 痰 脓 穿刺液咽拭子等 脑脊液 血液 直接涂片染色 测抗原 分离培养 增菌培养 5 CO2葡萄糖肉汤 血平板 5 CO2 可疑菌落 鉴定试验 初步报告 血清学鉴定 分群 杆菌肽试验optochin胆汁溶菌试验其他鉴定敏感试验试验 三 链球菌的检验方法 1 直接镜检 痰 脓 穿刺液 咽拭子等 初报 发现G 球菌 呈链状排列 2 分离培养 血液 脑脊液肉汤增菌 脓液 咽拭子等血平板分离 3 鉴定链球菌的主要试验 根据形态 菌落 溶血情况进行 杆菌肽敏感试验 A群敏感 d 10mm Optochin敏感试验 肺炎链球菌d 18mm d 15mm为阴性 胆汁溶菌试验 肺炎链球菌 CAMP试验 群无乳链球菌为 血清学鉴定 试剂盒STREPTEX 用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原 分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应 抗O试验 风湿性关节炎 急性肾小球肾炎 效价 400为 二 肺炎链球菌 S pneumoniae 属链球菌科 链球菌属 广泛分布于自然界 主要寄生于人类上呼吸道 多数不致病 一 生物学特性 一 形态与染色G 矛头状 成双 或短链 排列 无鞭毛 无芽胞 有荚膜 二 培养特性条件 营养要求较高 兼性厌氧菌 5 10 C02生长最好 产生自溶酶 液体 培养24h呈均匀混浊 后期因产生自溶而变得澄清 普通琼脂平板 不生长 血液琼脂平板 灰白色 圆形 扁平 较小 周围有草绿色溶血环 溶血 三 生化反应活泼分解多种糖类 菊糖 多数 胆汁溶菌试验 Optochin试验 区别甲链与肺链 四 抗原构造 荚膜多糖抗原 据此将肺炎链球菌分85型 对人致病的有20多型 型引起大叶性肺炎 菌体多糖抗原 可与CRP反应 产生沉淀 3 M蛋白抗原 型特异性 五 抵抗力较弱 加热56 20min即死亡 对一般消毒剂敏感 对干燥抵抗力较强 荚膜变异 有荚膜的光滑 S 型菌有毒力 失去荚膜的粗糙 R 型毒力减低或消失 六 变异性 二 致病性和免疫性 一 致病物质1 荚膜 肺炎球菌的致病力 主要是荚膜的抗吞噬作用 2 蛋白粘附素 脂磷壁酸 肺炎链球菌溶素O等溶血毒素 O 自溶后释放 能溶解人和动物的红细胞 高浓度对动物有坏死及致死作用 二 所致疾病存在于正常人上呼吸道 为条件致病菌 仅在人体抵抗力下降时才引起疾病 可引起 大叶性肺炎 胸膜炎 脓胸 慢性支气管炎 中耳炎 脑膜炎 败血症等 三 微生物学检验 一 标本采集痰液 脓液 血液 脑脊液等 二 检验程序 三 检验方法 检验程序 痰 脓 脑脊液 血液 直接涂片分离培养 革兰染色 美兰染色荚膜肿胀试验 增菌培养 葡萄糖肉汤 硫酸镁肉汤 血平板 挑选可疑菌落 纯培养 初报 兔血清肉汤 小白鼠毒力试验 涂片荚膜肿胀试验 胆汁溶菌试验菊糖发酵Optochin试验 药敏试验 报告 检验方法 1 直接镜检适用于 痰 脓 脑脊液标本 报告 找到肺炎链球菌 2 分离培养硫酸镁肉汤 均匀混浊生长 有绿色荧光 血平板 灰白色 圆形 扁平 较小 周围有草绿色溶血环 溶血 3 鉴定试验 1 荚膜肿胀试验 2 胆汁溶菌试验 3 Optochin试验 4 菊糖发酵试验 5 小鼠毒力试验 有毒力的菌株 接种后12 36h 死亡 胆汁溶菌试验阳性 加入胆汁或10 去氧胆酸钠 37 5 10min 激活本菌的自溶酶 出现溶菌现象 Optochin敏感试验阳性 取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央 或分区划线法 纸片贴于1 2区 35 需氧培养过夜 抑菌圈 18mm Optochintest 肺炎链球菌的主要鉴定依据 1 镜下形态 革兰阳性球菌 矛头状成双排列 平端相对 尖端向外 2 血平板菌落特点 直径0 5 1 5mm 灰白色 半透明 光滑 有些菌株为粘液状 扁平 周围有草绿色溶血环 培养或放置24h以上 菌落中央可塌陷 呈脐窝状 3 生化鉴定 Optochin试验 胆汁溶菌试验 肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别 形态菌落血清胆汁菊糖Opto 小鼠肉汤溶菌chin毒力试验 肺链甲链 矛头状 稍大 湿润浑浊 成双 扁平 有荚膜脐窝状 圆形 较小 稍干 沉淀 无荚膜圆 凸起 四 结果评价和报告 乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌 无论从任何临床标本中分离出均应报告临床 及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌 有利于早期治疗 以减少并发症 如风湿热 肾小球肾炎 的产生 草绿色链球菌在重症感染时 应鉴定到种 第三节肠球菌属 是肠道中的正常菌群导致医院内感染 如尿路感染 腹部和盆腔感染 败血症 脑膜炎 一 生物学特性 一 形态染色G 球菌 单个 成双或短链状排列 无荚膜 芽胞 部分菌株有鞭毛 营养要求较高 能在高盐 6 5 NaCl 高碱 PH9 6 高胆汁 40 10 45 生长 菌落 圆形 中等大小 灰白色 不透明 S型 有 或 溶血 二 培养特性 能分解多种糖类触酶 PYR 吡咯烷酮 萘基酰胺 试验 三 生化反应 目前分18种 引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌 常用的分型方法 rRNA基因探针分型法 四 分型 五 抵抗力对理化因素抵抗力弱 但对大多数抗生素天然耐药 二 微生物学检验 一 标本采集尿液 血液 脑脊液 脓汁分泌物等 二 检验程序 尿液 脓汁 穿刺液 血液 涂片染色分离培养 血平板 5 CO2 初报 挑选可疑菌落 增菌培养 葡萄糖肉汤 5 CO2 PYR试验 胆汁七叶苷试验 6 5 NaCl生长试验 血清学试验 其他鉴定试验 报告 三 检验方法 1 直接镜检适用于 痰 脓 脑脊液 穿刺液标本 2 分离培养血平板 灰白色 圆形 中等大小 不透明 S型菌落 周围有 溶血或 溶血 选择培养基 叠氮胆汁七叶苷琼脂平板 3 鉴定试验 1 菌属鉴定试验 PYR试验 肠球菌 A群链球菌 某些凝固酶阴性葡萄球菌为 胆汁七叶苷试验 盐耐受试验 4 种间鉴定试验 P175表17 3 第四节奈瑟菌属 Neisseria 特点 为一群G 双球菌 无鞭毛 无芽胞 有菌毛 需氧 氧化酶及触酶 种类 共九种 主要致病菌是脑膜炎奈瑟菌 merningococcus 淋病奈瑟菌 gonorrhoeae 一 脑膜炎奈瑟菌 N meningitidis 即脑膜炎球菌 是流行性脑脊髓膜炎的病原体 一 生物学性状 1 形态结构2 培养特性3 生化反应4 抗原结构5 抵抗力特点 一 形态结构 G 肾形成双排列在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内无芽胞 无鞭毛 具有荚膜 菌毛 2 培养特性 营养要求高 必须在含有血清或多种氨基酸 无机盐的培养基上生长良好 血平板 半透明 灰褐色 圆形 湿润光滑露滴样菌落 易自溶 巧克力平板 圆形 扁平 蓝灰色 半透明 光滑湿润的菌落 卵黄双抗 EPV 平板 较大 无色 光滑湿润 扁平 边缘整齐的菌落 血清肉汤 呈微混浊 3 生化反应 分解葡萄糖 麦芽糖 硝酸盐还原试验阴性 不分解尿素氧化酶试验阳性 4 抗原结构 可分9个血清群 对人致病的主要是A群 5 抵抗力特点 对寒冷 光 热力 干燥等十分敏感 室温3h 60 5min死亡 采集标本 注意保温迅速送检 对磺胺类 青霉素 链霉素均敏感 二 致病性与免疫性 1 致病物质 菌毛 荚膜 内毒素2 所致疾病 传染源 传播途径寄生在正常人鼻咽部 存在易患人群 与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关 约2 3 的人表现为流脑症状 3 免疫性病原可产生群特异性抗体 但不持久 三 微生物学检验 1 标本采集菌血症期病人采集血液有出血点或瘀斑者 可取瘀斑渗出液有脑膜刺激症状 抽取脑脊液带菌者 咽拭子 注意事项 立即送检注意保温 勿放冰箱 防干燥防紫外线 脑膜炎球菌的检验程序 血液 增菌培养 葡糖肉汤 分离培养 巧克力 血平板 鉴定试验 涂染检氧化酶葡 麦糖多价血清药敏试验 结果报告 鼻咽拭子 卵黄双抗平板 5 10 co2 37 18 24h 37 18 24h 37 18 24h 脑脊液瘀血点 离心 上沉清淀液物 5 10 2 涂片染色 初步报告 直接凝集 脑膜炎球菌的鉴定依据 菌落特征符合形态染色符合分解葡 麦糖产酸氧化酶 触酶阳性血清凝集试验阳性 二 淋病奈瑟菌 N gonorrhoeae 即淋球菌为淋病的病原体 人是唯一天然宿主和传染源 一 生物学性状 1 形态结构2 培养特性3 生化反应4 抵抗力特点 1 形态结构 G 球形或肾形 成对排列有荚膜 无芽胞和鞭毛 2 培养特性 营养要求高 30 37 生长 须在含有血液或血清的培养基上培养 常用血液 巧克力等培养基初次分离 须5 10 CO2才能生长发育菌落 凸起 光滑 圆形 灰褐色 半透明 3 生化反应 氧化酶试验 触酶 葡萄糖 麦芽糖 易自溶 4 抵抗力特点 抵抗力弱 在干燥环境中仅能存活1 2h 湿热55 5min 100 立即死亡 室温下存活1 2d 对消毒剂极敏感 致病物质 菌毛 外膜蛋白 等 所致疾病 侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病 首位性病 新生儿眼炎 二 致病性与免疫性 1 标本采集 标本 男性 尿道分泌物女性 阴道分泌物全身性淋病 血液 泌尿 生殖道的各种分泌物 尿液立即送检 检验程序 三 微生物学检验 脓汁 分泌物 直接涂片染色 分离培养血 巧克力 TM平板 5 10 co2 35 18 24h 鉴定试验 涂染检氧化酶糖发酵药敏试验 报告 初步报告 35 18 24h 直接涂片镜检 急性淋病 嗜中性粒细胞内大量G 肾形双球菌 具有诊断意义慢性淋病 镜检较困难 检验方法 分离培养 即采集即培养 常用含有两种以上抗生素 万古霉素 粘菌素 磺胺类等 的选择培养基上培养 如ML TM 5 10 CO2培养基先预温 氧化酶试验 触酶 多数奈瑟菌为阴性 葡萄糖 麦芽糖 PCR 灵敏 特异 标本不受限制 不需活菌 鉴定 1 名词解释 血浆凝固酶 SPA 抗链 o 试验 Optochin试验 2 根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种 3 金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些 4 根据链球菌在血平板上的溶血现象 将其分成哪些类型 甲链和乙链有何区别 5 简述链球菌的检验程序和检验方法 6 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点 7 采集脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题 为什么 复习思考题 中等大 突起 有色素 S型菌落 葡萄球菌菌落形态 普通琼脂平板 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 金黄色葡萄球菌有透明溶血环 表皮葡萄球菌无溶血环 葡萄