天然药物化学第二章 糖和苷-2.ppt

第三节糖和苷的理化性质 物理性质一性状 形 苷类化合物多数是固体 其中糖基少的可以成结晶 糖基多的如皂苷 则多呈具有吸湿性的无定无形粉末 味 苷类一般是无味的 但也有很苦的和有甜味的 如甜菊苷 stevioside 是从甜叶菊的叶子中提取得到的 属于贝壳杉烷型四环二萜的多糖苷 比蔗糖甜300倍 临床上用于糖尿病患者作甜味剂用 无不良反应 色 苷类化合物的颜色是由苷元的性质决定的 糖部分没有颜色 物理性质二溶解性 化合物糖苷化以后 由于糖的引入 结构中增加了亲水性的羟基 因而亲水性增强 苷类的亲水性与糖基的数目有密切的关系 用不同极性的溶剂顺次提取药材时 在各提取部分都有发现苷类化合物的可能 碳苷与氧苷不同 无论在水中还是在其他溶剂中溶解度一般都较小 第三节糖和苷的理化性质 物现性质三旋光性 多数苷类化合物呈左旋 但水解后 由于生成的糖常是右旋的 因而使混合物呈右旋 因此 比较水解前后旋光性的变化 也可以用以检识苷类化合物的存在 但必须注意 有些低聚糖或多糖的分子也都有类似的性质 因此一定要在水解产物中肯定苷元的有无 才能判断苷类的存在 第三节糖和苷的理化性质 糖和苷的化学性质 与糖的分离和结构鉴定密切相关的反应 氧化反应糠醛的形成反应羟基反应羰基反应硼酸络合反应 第三节糖和苷的理化性质 一 氧化反应 过碘酸反应 适用范围 邻二醇 氨基醇 羟基醛 酮 邻二酮和某些活泼次甲基等结构 特点 定量 一个邻二醇 消耗一分子过碘酸 水溶液或亲水有机溶剂中进行 邻二醇顺式反应比反式快 第三节糖和苷的理化性质 第三节糖和苷的理化性质 第三节糖和苷的理化性质 反应机理 酸性或中性介质 五元环状酯中间体 第三节糖和苷的理化性质 甲基 D 甘露糖甲基 D 半乳糖甲基 D 葡萄糖 在弱酸性或中性介质中 顺式1 2 二元醇比反式的反应快的多 第三节糖和苷的理化性质 应用 常用于糖类和多元醇结构研究 从过碘酸的消耗量到甲醛或甲酸等的生成量测定 对糖的结构推测等都有很大的作用 游离的单糖按Fisher式 成苷的糖按Haworth式估算消耗的过碘酸的克分子数 第三节糖和苷的理化性质 二 糠醛的形成反应 单糖在浓酸作用下 脱水 生成具有呋喃环结构的化合物 多糖先水解成单糖 然后再脱水生成相同的产物 糖醛酸先脱羧 再形成糠醛 第三节糖和苷的理化性质 应用 检测糖类原理 糖在浓酸的作用下发生糠醛反应 所生成的糠醛衍生物和许多芳胺 酚类可缩合生成有色物质 试剂 有机酸 三氯乙酸 草酸等 或无机酸 硫酸 磷酸等 酚或胺类 含有活泼亚甲基并有共轭未饱和系统的化合物 如 苯酚 萘酚 苯胺 第三节糖和苷的理化性质 Molish反应 浓硫酸和 萘酚 糠醛与 萘酚缩合物 紫色 常用的层析显色剂 邻苯二甲酸和苯胺 第三节糖和苷的理化性质 三 羟基反应 糖的羟基反应包括 醚化反应 酰化反应和缩酮 醛 反应 羟基的活泼性 半缩醛羟基 C1 OH 伯醇基 C6 OH C2 OH 其它仲醇基e OH a OH 第三节糖和苷的理化性质 羟基反应 一 醚化 甲基化 反应 常采用的有 甲醚化 三甲硅醚化和三苯甲醚化反应 甲基化常用的方法 Kuhn改良法 在二甲基甲酰胺 DMF 溶液中用CH3I和Ag2O 或 CH3 2SO4和BaO Ba OH 2进行反应 箱守法 Hakomori 在二甲基亚砜 DMSO 中用NaH和CH3I进行反应 第三节糖和苷的理化性质 羟基反应 二 酰化反应 包括 乙酰化和对甲苯磺酰化 反应条件 在醋酐加醋酸钠 或醋酐中加氯化锌或在醋酐加吡啶溶液中反应 得到全乙酰化的糖 将糖作成缩醛 酮 可进行部分乙酰化 用途 NMR测定 鉴别羟基数目 GC MS连用 决定多糖连接点 羟基反应 三 缩酮和缩醛反应 酮或醛在脱水剂存在下和多元醇的两个有适当空间位置的羟基易形成环状缩酮或缩醛缩酮反应 一般酮类易与顺邻羟基形成五元环状物缩醛反应 醛类易与1 3 双羟基生成六元环状物 第三节糖和苷的理化性质 糖与丙酮生成的五元环缩酮称为异丙叉衍生物 又称丙酮加成物 D 半乳糖1 2 3 4 二 O 异丙叉 D 半乳吡喃糖 第三节糖和苷的理化性质 应用 保护游离糖的一对或两对羟基 第三节糖和苷的理化性质 四 羰基反应 还原糖和一分子苯肼缩合生成糖苯腙 多数糖苯腙是水溶性的 选择适当的肼可以制得糖腙以鉴别糖类 也可用于分离和纯化糖 糖和过量的苯肼作用 在C1和C2导入两分子苯肼 生成糖脎 多难溶于水 有好晶型 2 去氧糖不成脎 第三节糖和苷的理化性质 五 硼酸络合反应 糖的邻二羟基与许多试剂可生成络合物 可用于糖的分离 鉴定和构型推定 第三节糖和苷的理化性质 第四节苷键的裂解 糖链的降解 酸催化水解反应 醇解 乙酰解反应碱催化水解和 消除反应酶催化水解过碘酸裂解反应 1 酸催化水解反应 第四节苷键的裂解 糖链的降解 水解难易影响因素 苷原子的电子云密度和空间环境 苷原子不同 N 苷 O 苷 S 苷 C 苷 由易到难 呋喃糖 吡喃糖 50 100倍 酮糖 醛糖吡喃糖苷中C5位的取代基越大越难水解 即 五碳糖 甲基五碳糖 六碳糖 七碳糖 COOH取代去氧糖 羟基糖 氨基糖 第四节苷键的裂解 糖链的降解 酚苷 醇苷 苷元为小基团 e a 易质子化 苷元为大基团 a e 稳定性 第四节苷键的裂解 糖链的降解 氮原子位于酰胺或嘧啶位置时 N 苷难于用酸水解 p78 第四节苷键的裂解 糖链的降解 酸水解方法 酸水5 10 HCl H2SO4两相水解法 对酸不稳定苷元用酸水 有机溶剂 后加 TLC斑点水解 第四节苷键的裂解 糖链的降解 2 碱催化水解 苷元为酸 酚 有羰基共轭的烯醇类等 苷键具有酯的性质 遇碱能水解 第四节苷键的裂解 糖链的降解 3 酶催化水解 酶促反应具有专属性高 条件温和的特点 麦芽糖酶 maltase 专使 葡萄糖苷键水解 杏仁苷酶 emulsin 是一种 葡萄糖苷水解酶 用酶水解苷键可以获知苷键的构型 可以保持苷元结构不变 还可以保留部分苷键得到次级苷或低聚糖 以便获知苷元和糖 糖和糖之间的连接方式 第四节苷键的裂解 糖链的降解 4 过碘酸裂解反应 Smith裂解法 苷元结构容易改变的苷以及C 苷的水解特别适宜 但不适于苷元上也有1 2 二元醇结构的苷类 第四节苷键的裂解 糖链的降解 C 苷的水解 比原苷元多一个醛 第四节苷键的裂解 糖链的降解 5 糖醛酸苷的选择性水解反应 糖醛酸的苷键是很难用稀酸水解的 需要采用一些特殊的选择性水解反应 如紫外光照射法 四醋酸铅分解法 醋酐 吡啶法等 第四节苷键的裂解 糖链的降解 第五节糖的核磁共振性质 一般1H NMR谱中 糖端基质子信号在 4 3 5 5 其余部分在3 2 4 2左右 因此可以从端基质子数了解糖的种类和个数 第五节糖的核磁共振性质 C1 H和C2 H的偶合常数 决定端基碳的构型 D 葡萄糖 D 葡萄糖 六碳吡喃糖苷 当是葡萄糖或半乳糖 构型其J1 2为8Hz左右 而 构型双面角近60 J1 2为4Hz左右 第五节糖的核磁共振性质 D 甘露糖 D 甘露糖 而甘露糖和鼠李糖难于区分端基碳的构型 第五节糖的核磁共振性质 JC H也可对六碳吡喃糖苷的竖键 即 型 和横键 型 的鉴定有很大帮助 前者为160 165Hz 后者为170 175Hz 13C NMR anomeric碳 98 110 型在低场 C2 C4碳 70 85 C5 C6碳 60 65 CH3 甲基五碳糖 18 第五节糖的核磁共振性质 苷化位移 glycosidationshift 糖的端基羟基成苷后 端基碳 C1 和苷元的 C的化学位移均向低场移动 而相邻的碳 C 稍向高场移动 偶尔也有稍向低场移动的 这种苷化前后的位移变化 称做苷化位移 第五节糖的核磁共振性质 苷化位移规律 醇苷 端基及 C向低场苷元为链状 苷化位移随伯 仲 叔递减 苷元为环醇 若 C有烷基取代 苷化位移与苷元 位及糖的端基手性有关 苷元 位及糖的端基手性相同 与 C无取代相似 苷元 位及糖的端基手性不同 苷化位移比 C无取代大 第五节糖的核磁共振性质 苷化位移规律 酚苷 与醇苷相反 C向高场 C向低场 酯苷 与醇苷相反 C向高场 C向低场 第五节糖的核磁共振性质 第六节糖链结构的测定 三个问题 单糖组成糖的连接顺序和位置苷键构型 一 纯度鉴定常用的纯度鉴定法有 官能团分析 比旋度 毛细管气相层析 HPLC等 电泳是常用的鉴定纯度方法 第六节糖链结构的测定 多糖的分子量只是一种统计平均值 二 分子量的测定 单糖 低聚糖及其苷的分子量测定目前大多用质谱法 在不同型号的Sephadex或Sepharose柱层析上测定多糖分子量是用量小 操作简便的方法 工作中需要一系列结构相似的已知分子量的多糖作标准曲线 第六节糖链结构的测定 三 单糖的鉴定 1 糖的种类一般是将苷键全水解 水解产物鉴定 色谱法 PC TLC GC 衍生物 HPLC NMR 化学位移 J值 化学法 如Molish反应 2 糖的数目的确定 主要根据NMR 碳谱90 110 氢谱4 62D NMR MS等 第六节糖链结构的测定 四 单糖之间连接位置的决定 将糖链全甲基化 然后水解苷键 鉴定所获得的甲基化单糖 其中游离 OH的部位就是连结位置 目前常使用13C NMR方法 主要是通过归属各碳信号 以确定产生苷化位移的碳 第六节糖链结构的测定 五 糖链连接顺序的决定 早期是缓和水解法 将糖链水解成较小的片断 各种低聚糖 再分析 质谱分析也以用于低聚糖的结构研究 自旋晶格弛豫时间T1是结构研究中常用的另外一个参数 一般说外侧糖比内侧糖的T1值大 第六节糖链结构的测定 观察两糖之间质子的远程偶合确定 第六节糖链结构的测定 六 苷键构型的确定 核磁共振技术 酶催化水解 分子旋光差法 Klyne法 Klyne将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷元的糖的一对甲苷的分子旋光度进行比较 数值上相接近的一个便是与之有相同苷键的一个 参见94 第六节糖链结构的测定 第七节糖和苷的提取分离 为防止苷在提取中发生水解 可用乙醇或沸水作为溶剂进行提取 通常是将生药的乙醇或甲醇提取物顺次以石油醚脱脂 以乙醚或氯仿抽出苷元 以乙酸乙酯抽出单糖苷或少糖苷 再以丁醇提取多糖苷 常用的提取方法有 一 离子交换层析二 凝胶滤过法三 季铵氢氧化物沉淀法四 分级沉淀或分级溶解法五 蛋白质除去法 第七节糖和苷的提取分离 1 在水和其他溶剂中溶解度都很小的苷是 A氧苷B氮苷C硫苷D碳苷2 芸香糖的组成是 A两分子葡萄糖B一分子葡萄糖 一分子鼠李糖C一分子葡萄糖 一分子果糖D两分子鼠李糖3 酸水解速度最快的是 A葡萄糖苷B鼠李糖苷C2 去氧糖苷D葡萄糖醛酸苷4 Smith裂解法属于 A缓和酸水解法B强烈酸水解法C碱水解法D氧化开裂法 5 下列有关苷键酸水解的论述 错误的是 A呋喃糖苷比吡喃糖苷易水解B醛糖苷比酮糖苷易水解C去氧糖苷比羟基糖苷易水解D氮苷比硫苷易水解6 用纸色谱法检识下列糖 以BAW 4 1 5上层 溶剂系统为展开剂