高效液相色谱分析PPT课件.ppt

第三章高效液相色谱分析,高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法,一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差别三、高效液相色谱仪流程图四、特点及应用,1,一、HPLC与经典LC区别,主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段,1经典LC：仅做为一种分离手段柱内径13cm，固定相粒径100m且不均匀常压输送流动相柱效低（H，n）分析周期长无法在线检测2HPLC：分离和分析柱内径26mm，固定相粒径10m（球形,均匀装柱）高压输送流动相柱效高（H，n）分析时间大大缩短可以在线检测,2,二、HPLC与GC差别,相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别,1分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制相对分子质量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%,3,2流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性,3操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）提高柱内填料装填的均匀性,减小粒度,4,三、高效液相色谱仪流程图,灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感,5,高效液相色谱仪的色谱柱,内径：4.6mm或3.9mm；长度：1530cm,6,球形填料,不规则形填料,填料颗粒度：35m,湿法匀浆装柱技术,7,空柱管:200-300元国产填料国产装填=800-1000元进口填料国产装填=1200-1500元原装进口柱=2400-3000元,HPLC柱=空柱管+填料(分离介质),价格?,8,检测器：紫外光度检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电导检测器、蒸发光散射检测器,9,高效液相色谱仪的生产厂家,Waters,Agillent,Shimadz,PerkinElmer,Varian,大连依利特公司,北京东西电子研究所,制造商,戴安,10,11,高效液相色谱仪LC-2010HT岛津（香港）有限公司,12,新一代液相色谱Alliance,Alliance,13,返回,14,四、HPLC的特点和应用,“三高”“一快”“一广”,高柱效(n=3万片/米),柱效高（远高于一般LC）高灵敏度(紫外检测器最小检出量达纳克级)高压(150*105350*105Pa)分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）,15,HPLC应用,医药方面：生物组织、血样、尿样分析，药剂组分测定，药物生产控制，药代研究。生化方面：主要用于氨基酸、蛋白质、酶、糠尿。食品方面：果汁，饮料，酒类等中的添加剂。环境方面：饮用水，废水中质量标准的控制。大气、土壤污染研究,16,17,正常对照组Fig2(controlgroup)诱导后3天组(Hydrocephalusofthe3day),诱导后8天组(Hydrocephalusofthe8day)诱导后4月组(Hydrocephalusofthe4month),狗脑积水不同时期脑组织中肌酸、磷酸肌酸及磷酸腺苷酸的含量变化,Cr,Cr,Cr,Crp,Cr,Crp,Crp,AMP,AMP,AMP,AMP,ADP,ADP,Crp,ADP,ATP,ATP,ATP,ATP,ADP,18,HPLC法分析心脏衰竭过程中黄连素对心脏能量的保护作用,标准色谱图心肌样品色谱图,Cr,Crp,AMP,AMP,Crp,ADP,ADP,ATP,ATP,19,标准品色谱图对照组色谱图FDP组色谱图,Crp,Crp,Crp,ATP,ATP,ATP,HPLC法分析人的心脏换瓣术中1，6-二磷酸果糖对高能磷酸复合物含量的影响,20,HPLC法分析大鼠脑缺血再灌注后肌酸、腺苷和三磷酸腺苷的含量变化,标准色谱图脑组织样色谱图,ATP,ATP,ADO,ADO,Cr,Cr,21,HPLC法分析经缺血预处理后大鼠移植肝脏中三磷酸腺苷的含量变化,肝组织样色谱图标准色谱图,ATP,AMP,AMP,ATP,ADP,ADP,22,健康人空白血清色谱图给药后人血清色谱图,HPLC法测定健康人血清中的头孢唑啉(CEZ),CEZ,23,HPLC法测定肺癌患者血清中维生素A、维生素E番茄红素、-胡萝卜素,标准色谱图血清样色谱图,VA,VA,VE,VE,L,L,24,HPLC法测定中草药提取物中紫杉醇的含量,对照品色谱图,样品色谱图,紫杉醇,紫杉醇,25,1,2,3,4,5,大鼠尿中83-1除草剂及其代谢产物的HPLC分离图,空白尿样染毒尿样,*,26,1,大鼠肝微粒体中叶枯灵及其代射产物分离的HPLC色谱图,a,b,a.对照组b.样品组,27,大鼠肝灌流中叶枯灵、代谢产物及其内标的色谱图,(7),*,*,*,28,二、食品、药物的分析,29,1,3,2,3,1,1,3,5,5,5,4,蕹菜冬苋菜对照品,HPLC法测定9种蔬菜中的类胡萝卜素,30,HPLC法测定中药辛弗林的含量,标准品色谱图,样品色谱图,辛弗林,辛弗林,31,HPLC法测定血清中延胡乙素的血药浓度,样品色谱图,对照品色谱图,延胡乙素,延胡乙素,32,对照品色谱图,样品色谱图,HPLC分析银杏叶提取物中懈皮素及总黄酮的含量,懈皮素,懈皮素,山萘酚,异鼠李素,33,MECC分离中药黄芩中六种黄酮类成份,34,P109：解：二者都是根据样品组分与流动相和固定相,相互作用力的差别进行分离的。从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光