临检血液概述采血抗凝剂ppt课件.ppt

临床检验基础,临床检验基础是采用各种实验室检查方法和技术，对来自机体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行一般性状观察，理学、化学、免疫学、病原学和显微镜等检查，为疾病筛查和诊断提供简便、快速的检测结果。,第一节概述,血液生理概要,标本采集、送检、保存与处理,标本抗凝,血涂片的制备,血细胞染色方法,血细胞显微镜计数法,教学目标,掌握：血液标本采集的方法及评价，抗凝剂的选择应用，血涂片制备方法和染色原理，血细胞显微镜计数方法。熟悉：血液生理概述和标本保存。,一血液生理概要,1.血液的组成血浆：血液加抗凝剂后分离出来的液体部分。血清：血液离休后自然凝固分离出来的液体。,45%,血尘,55%,89%,9192%,2.血液的理化性质血量：正常人血液量7010ml/kg体重，成人45L，占体重的6%8%。颜色：动脉血鲜红色HbO2静脉血暗红色Hbred贫血病人红色变浅CO、氰化物中毒樱红色红细胞悬浮稳定性唾液酸根形成Zeta电位,黏滞性血细胞比容（红细胞数量）血浆粘度（血浆蛋白浓度）比密血液比密与红细胞相关男1.0551.063女1.0511.060血浆比密与血浆蛋白相关1.0251.030渗透压血浆渗透压290310mOsm/（kgH2O）PH7.357.45凝固性凝血因子激活,3.血液的功能运输功能协调功能维持内环境的稳定防御功能,二、血标本的采集、送检、保存与处理,（一）血标本的采集,采血,静脉采血,毛细血管采血,普通采血法,真空采血法,静脉采血法(venipunctureforbloodcollection),凡需血量较多的检查0.5ml如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。,部位浅表静脉均可,常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝部，幼儿可用颈外静脉。体位坐位或卧位捆扎时间1min,二、静脉采血法,【采血方法】准备选择静脉消毒扎压脉带穿刺、松压脉带抽血拔针止血注入试管。如以下视频所示,静脉采血法,普通采血法,1.避免溶血,器具干燥,避免气泡2.先拔针头,再缓缓注入试管3.与抗凝剂混匀时轻轻颠倒4.严格消毒5.抽血时只能外抽不能内推,真空采血法（40年代，美国BD公司）,套筒式和头皮静脉式两种优点：血样无需容器之间的转移，减少溶血现象，保持血液标本的完整性，使检验结果更加准确，也有利于防止医院内血源性传染病的交叉感染和环境保护。缺点：真空采血管价格较高注意:采血后,先拔下刺塞针端的采血试管,后拔穿刺针。,I.采血针,2008-10-21,II.持针器,2008-10-21,2008-10-21,III.真空采血管,2008-10-21,血量0.1ml的检验项目：RBC计数、WBC计数、BPC计数、Hb测定等,毛细血管采血法,Skinpunctureforbloodcollection,采血部位WHO推荐采取毛细血管血以左手中指或无名指指尖内侧为宜1手指采血：优点：方便获较多血量检查结果比较恒定缺点：与静脉血仍在某些差异。2耳垂采血：优点：痛感轻方便适用于反复采集缺点：血循环差受气温影响大检查结果不恒定RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。,3、其他部位：拇指、拇趾或足底外侧缘采血半岁以下婴幼儿皮肤完整处严重烧伤者,采血针三棱针或专用的“采血针”为好，使用前者应高压灭菌，一人一针。,2008-10-21,注意事项1、采血部位皮肤完整。2、无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：BPC计数RBC计数、Hb测定WBC计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。,两种采血方法的优缺点比较,毛细血管采血,静脉采血,缺点,限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，组织液可混入,不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态,优点,价廉、快速、操作简便，标本可直接测定,标本代表性大，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验,1.血标本运输2.血标本保存3.检验后标本处理,（二）血液标本运输、保存与处理,三、血标本的抗凝,1、枸橼酸钠（柠檬酸钠）,a.抗凝原理：螯合钙离子,使用方法配成109mmol/L的浓度和血液1：9配成105mmol/L的浓度和血液1：4,化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）,c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）,d.不适用于：血细胞计数,2.乙二胺四乙酸（EDTA）盐,a.抗凝原理：螯合钙离子,b.使用方法：15g/L浓度EDTA和血液1：10,适用范围：对血细胞形态影响小,适合血常规检查、Hct,不适用于：影响血小板聚集和凝血因子功能,不宜凝血因子检查和血小板功能试验。,4.草酸钠（乙二酸的钠盐）,a.抗凝原理：草酸钙沉淀,b.使用方法：草酸钠0.1mol/L和血液1：9,c.适用范围：止血学检验。,d.不适用于：对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响自动凝血仪的使用。,物理方法抗凝脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，使血液不能凝固。适用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。,小结,血液是由血细胞和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。凡需血液量较少的检验项目，常用皮肤采血法，通常采手指血。采血时要注意采血部位要无病变，要擦去第一滴血，不能用力挤压。凡需血液量较多的检验项目，要用静脉采血法，其采血部位常用肘前静脉。如需要抗凝抗凝血标本时，则需要根据检验项目的要求，采用枸橼酸钠、乙二胺四乙酸盐和肝素等抗凝剂来阻止血液凝固。,请您练习,答案:,皮肤采血法用注意什么问题?,所选择采血部位的皮肤应完好。严格消毒皮肤，防止采血部位感染。皮肤消毒后，待乙醇挥发干后再刺针。如血流不畅，切不可用力挤压勉强采血，而应重新针刺。出血不止时，可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时应在报告单上注明，提醒临床医生注意。进行多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血小板计数、红细胞计数、白细胞计数。,请您练习,请说出静脉采血的步骤？,答案:,准备,选择静脉,消毒,扎压脉带,穿刺、松压脉带,抽血,拔针止血,注入试管。,请您练习,答案:,请说出枸橼酸钠的抗凝原理、用途及其用量？,枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象检查常用0.109mol/L的水溶液，与血液之比通常为1：9。魏氏法血沉测定用浓度为0.105mol/L，与血液比例为1:4（V：V）。,请您练习,请将下列抗凝方法和适宜的项目用线连接起来。枸橼酸钠血细胞比容测定乙二胺四乙酸盐红斑狼疮细胞的检验肝素凝血象脱纤维法一般血液学检查,教学目标,1.叙述载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合格血片的标准。2.阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事项和染色结果的判断。3.知道吉姆萨染色法和混合染色法。,良好血涂片的标准,厚薄适宜,头体尾分明，细胞分布均匀,血膜边缘整齐两侧两端留有空隙,四血涂片的制备,血涂片染色显微镜检查用途：细胞形态检查，细胞数量评估，网织红、异常细胞、寄生虫检验。血膜过厚：细胞重叠缩小血膜过薄：细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘,1.玻片清洁：a新玻片处理：用盐酸浸泡24小时。b用过玻片处理：用洗涤剂清洗。c使用中玻片处理：只能持玻片边缘，保持清洁、干燥、中性、无油腻。,操作,30-45,血液,推玻片,载玻片,制备过程：,角度大,角度大速度快血膜厚,血滴过大,血膜过厚,造成血膜厚的原因示意图,造成血膜薄的原因示意图,角度小,血滴小血膜薄,角度小速度慢血膜薄,25,血膜分布不均：主要由于以下原因所致:,推片边缘不齐血膜出现线条样缺损,碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。,酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。,3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料,（一）染料（天然染料和人工染料）发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。,五细胞常用的染色方法,（二）细胞染色原理：,1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等,化学作用：a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。,瑞氏染色法,（一）染色原理分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性亚甲蓝与细胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板结合。第二相是亚甲蓝和伊红结合在适宜条件下形成紫色的亚甲蓝-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。,b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。,c.周围环境的酸碱度：如环境pHpI（pI为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pHpI，则结合碱性染料。PHH增多易与伊红结合染色偏红PHH减少易与美蓝结合偏蓝,（二）试剂1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml,磷酸盐缓冲液（PBS）：（PH6.46.8）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。,1,2,3,3.染色方法：a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。d.用清水冲洗，待干后镜检。,注意事项：a.血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落b.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。c.染液不能过少，以防蒸发沉淀。d.冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长。e.染色过淡，可复染。f.染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色,姬姆萨染色法,（一）染色原理：基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。,（二）试剂Giemsa甲醇纯甘油,（三）染色方法1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染1