芳香胺类药物分析.ppt

第七章芳香胺类药物的分析,芳胺类药物苯乙胺类药物芳氧丙醇胺类药物,芳胺芳烃胺,第一节芳胺类药物的分析,对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构,酰胺类药物的基本结构,基本结构与化学性质,对氨基苯甲酸酯类药物,芳伯氨基有重氮化-偶合反应酯键易水解侧链烃胺具碱性,第一节芳胺类药物,代表性药物,盐酸普鲁卡因Procainehydrochloride,苯佐卡因benzocaine,盐酸丁卡因Tetracainehydrochloride,盐酸普鲁卡因胺,酰胺类药物,酰胺基水解后芳伯氨基特性酚羟基与FeCl3显色侧链烃胺具弱碱性，可与生物碱沉淀剂与重金属离子反应，形成有色配位化合物水解产物反应,代表性药物,对乙酰氨基酚paraceteamol,盐酸利多卡因Lidocainehydrochloride,醋氨苯砜acedapsone,盐酸布比卡因bupivacainehydrochloride,盐酸普鲁卡因,苯佐卡因,重氮化-偶合反应直接反应,鉴别试验,橙黄色-猩红色,-萘酚,重氮盐,对乙酰氨基酚（稀HCl水解）,须先水解，然后再进行重氮化偶合反应,醋氨苯砜（硫酸水解）,乳白色,盐酸丁卡因,N-亚硝基化合物,无重氮化反应,盐酸利多卡因，盐酸布比卡因在酰氨基邻位有两个甲基，因空间位阻影响，较难水解，故重氮化-偶合反应较难。,直接：盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺,盐酸普鲁卡因ChP（2019）鉴别（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,间接：对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯,对乙酰氨基酚ChP（2019）鉴别（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。,FeCl3反应,对乙酰氨基酚的结构中具有酚羟基，可与FeCl3反应，显蓝紫色。,与Cu2+，Co2+，Hg2+的反应盐酸利多卡因在碳酸钠溶液中与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，转溶入氯仿，显黄色。盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。盐酸利多卡因在硝酸性溶液中与硝酸汞反应，显黄色。,与重金属离子反应,2,在同样条件下，盐酸普鲁卡因、丁卡因、苯佐卡因等不显Cu2+反应。对氨基苯甲酸酯类药物在同样条件下与Hg2+反应显红色或橙黄色（盐酸利多卡因显黄色）。,与其他有关药物的区别,羟肟酸铁,盐酸普鲁卡因胺具芳酰胺结构，可被H2O2氧化，生成羟肟酸，再与FeCl3反应生成羟肟酸铁而显紫红色暗棕色至棕黑色。,羟肟酸铁盐反应,具有酯键结构的药物易在碱性溶液中水解，可利用其水解产物进行鉴别。,水解产物反应,黄色,苯佐卡因,盐酸普鲁卡因,白色,二乙氨基乙醇,白色,沉淀溶解,石蕊试纸,石蕊试纸,PABA,(1).盐酸普鲁卡因ChP（2019）,鉴别（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。,(2).苯佐卡因ChP（2019）,鉴别（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。,5.其他鉴别试验,两者区别,盐酸利多卡因ChP（2019）鉴别取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，干燥，依法测定（附录C），熔点为228232，熔融时同时分解。盐酸布比卡因ChP（2019）,制备衍生物测熔点,盐酸丁卡因ChP（2019）鉴别（1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80干燥，依法测定（附录C），熔点约为131。,制备衍生物测熔点,盐酸布比卡因ChP（2019）鉴别（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.530.58与0.430.48。,UV,盐酸布比卡因ChP（2019）鉴别（3）本品的红外光吸收图谱与对照的图谱（光谱集324图）一致。,IR,特殊杂质,对乙酰氨基酚中杂质检查,有关物质本品以对硝基氯苯为原料，可能引入对氯苯乙酰胺等中间体、副产物、分解物，药典采用TLC法检查，以对氯苯乙酰胺为对照。,方法样品处理：1g细粉，加5ml乙醚提取，取上清液200l点样对照品浓度：50g/ml，取40l点样固定相：硅胶GF254薄板展开剂：氯仿-丙酮-甲苯（13：5：2）检测方法：紫外光254nm下观察荧光规定：供试品中杂斑点不得较对照主斑点深、大。,限量？,L=（VC）/W100%,该杂质为制备过程中乙酰化不完全或贮存不当发生水解所致。药典采用比色法测定，在碱性条件下，对氨基酚与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应。,对氨基酚检查,方法样品液：本品1.0g，加甲醇溶液20mL，溶解。对照液：对乙酰氨基酚对照品1.0g+对氨基酚50ug，加甲醇溶液20mL，溶解。显色：取样品液和对照液，分别加碱性亚硝基铁氰化钠试液，摇匀，30分钟后比色。规定：样品液所显颜色不得较对照液深。,限量,限量=0.005%,检查方法对照法,取本品1.0g，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005）。,在注射剂制备和贮存过程中受到pH、温度、光线、时间、金属离子等因素影响，发生水解、脱羧、氧化反应，使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。,盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查,中国药典采用TLC法控制该杂质方法供试品溶液：2.5mg/ml,对照品溶液：30g/ml的对氨基苯甲酸溶液薄层板：硅胶H展开剂：苯-丙醋酸-丙酮-甲醇（14:1:1:4）点样：各取10l显色:对二甲氨基苯甲醛溶液喷雾规定:样品所显杂斑点不得较对照品主斑点更深限量:30/(2.5mg1000)100%=1.2%检测限:0.01g,NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OAr-NH2+NOClAr-NH-OH（慢）Ar-N=N-OH（快）Ar-N2Cl（快）,含量测定,亚硝酸钠滴定法,原理：Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl,具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。,加入适量KBr以加速反应KBr+HClHBr+KClHNO2+HBrNOBr+H2O（1）HNO2+HClNOCl+H2O（2）,测定主要条件,因（1）式平衡常数比（2）式约大300倍，生成的NOBr量多，使溶液中NO+浓度大大增加，从而加速反应进行。,酸的种类及其浓度,在不同酸中重氮化反应的速度为：HBrHClH2SO4HNO3,加过量盐酸胺类药物在盐酸中溶解度大，反应速度也快，其实际用量较理论量多，一般胺：酸的比例以1：2.56为宜。这是因为过量酸有利于：重氮化反应加快；重氮盐在酸中稳定；可防止生成偶氮氨基化合物。,滴定温度,将滴定管尖端插入液面下，一次将大部分滴定液在搅拌下加入，然后将滴定管尖端提出液面，缓缓滴定至终点。,温高反应快，但重氮盐易分解；温低反应慢，故室温1030C为宜。,滴定方法与滴定速度,指示终点的方法,永停滴定法ChP（2019）、BP（2000）电极：两个相同的铂电极（需活化，用加有1-2滴FeCl3试液的硝酸温热浸泡）,终点时：,电位法USP（24）,原理：NaNO2+KI+HClNO+I2I2+淀粉蓝色影响因素：溶液体积多次外试，供试品的损失指示剂需新配,外指示剂法碘化钾-淀粉糊剂,内指示剂法常用的有：中性红橙黄IV亚甲蓝等,盐酸普鲁卡因ChP（2019）取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录A），在1525，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl,非水滴定法盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、苯乙胺类药物具有烃胺，可用非水滴定法测定含量。,溶剂：冰醋酸指示剂：结晶紫滴定剂：高氯酸（0.1mol/L),注意盐酸丁卡因、盐酸利多卡因含有盐酸，滴定前需加醋酸汞处理，以消除盐酸干扰。,比色法利用本类药物结构中的酚羟基或芳伯氨基具有三氯化铁反应或重氮化偶合反应，采用比色法测定含量。,紫外分光光度法对乙酰氨基酚的含量测定（ChP法）：本品约40mg，加0.4%NaOH溶液至250ml，摇匀，取5ml稀释至100ml，于257nm处，以溶剂为空白，测定供试液的吸收度，按吸收系数E1%1cm=715计算。,A=E1%1cmCL，C%=A/（715L），L=1（C%F1000）/40=样品%（F为稀释倍数=250100/5=5000）,USP法本品约120mg，加甲醇-水混合溶剂至500ml，摇匀，取5ml稀释至100ml。另取对乙酰氨基酚对照品适量，用同样的溶剂稀释至12ug/ml的溶液，于244nm处以水为空白，测定两溶液的吸收度，按10C（Au/As）计算含量（mg）。,10=（500100）/（51000）C=12ug/ml%=1012（Au/As）/120100%(Au和As分别为样品液和对照液的吸收度),荧光法荧光探针技术使荧光衍生化试剂与本身无荧光或荧光效率低的化合物反应，其产物具有强荧光，从而使检测灵敏度大大提高。,ex400nm（激发波长）、em485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。,HPLC法盐酸普鲁卡因注射液ChP（2019）,可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸离子抑制色谱法内标法定量,1盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有A.重氮化偶合反应B.羟肟酸铁盐反应C.氧化反应D.磺化反应E.碘化反应,2采用亚硝酸钠法测定含量的药物有A.苯巴比妥B.盐酸丁卡因C.苯佐卡因D.醋氨苯砜E.盐酸去氧肾上腺素,3下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者A.乙酰水杨酸B.对氨基水杨酸钠C.对乙酰氨基酚D.普鲁卡因E.苯佐卡因,4.亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是A.添加BrB.生成NO+BrC生成HBrD.生成Br2E.抑制反应进行,5中国药典（2019年版）所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为A.电位法B.永停法C.外指示剂法D.内指示剂法E.自身指示剂法,6亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有A.自身指示剂法B.内指示剂法C.永停法D.外指示剂法E.电位法,例1.ChP（2019）亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠的含量时，指示滴定终点的方法为A.自身指示终点法B.电位法指示终点C.永停滴定法D.氧化还原指示剂法E.酸碱指示剂法,例2.以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸A.盐酸普鲁卡因B.盐酸普鲁卡因胺C.注射用盐酸普鲁卡因D.盐酸普鲁卡因胺片E.盐酸普鲁卡因注射液,例3.盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是A.强酸B.加入适量溴化钾C.室温（1030）下滴定D.滴定管尖端深入液面E.永停法指示终点,第二节苯乙胺类药物,为儿茶酚胺类药物,结构特点1.具邻苯二酚或酚易被氧化2.侧链烃胺具碱性3.手性碳有光学活性,*,代表性药物,肾上腺素,盐酸去氧肾上腺素,重酒石酸去甲肾上腺素,盐酸异丙肾上腺素,盐酸苯乙双胍,盐酸麻黄碱,鉴别试验,双缩脲反应盐酸麻黄碱侧链具有氨基醇结构,可显双缩脲反应：,与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪族伯胺的专属反应,特殊杂质,利用酮体在紫外310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收，测定一定浓度下样品溶液在310nm处的吸收度来控制酮体的限量。,酮体检查肾上腺素、去甲肾上腺素等是经相应的酮体氢化还原而得，若氢化不完全，可能引进酮体杂质，药典采用紫外法检查。,例肾上腺素中酮体的检查：样品溶液2.0mg/mL，310nm处的吸收度不得大于0.05，已知酮体的吸收系数E=453，限量是多少？根据：A=ECL,C=0.05/453=0.0001204（C/100）1000/2100%=0.06%,有关物质检查（TLC法）盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查(纸层析),非水碱量法（原料药）,为什么有的要加HgAc2？什么情况下采用电位法？,硫酸沙丁胺醇的滴定度T如何计算？,含量测定,溴量法重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液采用溴量法测定含量。,计算：中国药典规定，1个原子的溴为1个mol，故根据反应式，1mol的Br相当于1/6mol的去氧肾上腺素，即滴定当量E=M/6=203.67/6T=Emol/L=M/60.1=3.395(mg)(V0-V)C/0.13.395W（mg）,100%,提取酸碱滴定法,硫酸苯丙胺及其片剂、注射剂的含量测定均采用此法。,利用本类药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，而游离碱不溶于水可以溶于有机溶剂的性质，采用提取酸碱滴定法测定含量。,比色法盐酸克仑特罗栓具芳伯氨基，可发生重氮化偶合反应,对照法定量,偶合剂N-（1-萘基）-乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）-乙二胺。,荧光分光光度法,ex410nm、em520nm处测定荧光强度，对照法定量。,HPLC法,重酒石酸去甲肾上腺素注射液离子对反相高效液相色谱法内标法定量调节溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠,例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛硫酸试液E.茚三酮试液,例2.盐酸异丙肾上腺素的检查项目是A.有关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体,第三节芳氧丙醇胺类药物,药物结构与主要理化学性质,氧烯洛尔,盐酸卡替洛尔,棕色沉淀,淡红色沉淀,氧烯洛尔化学名为1-邻烯丙氧基苯氧基-3-异丙氨基-2-丙醇.本品为白色结晶粉末,乙醇、丙酮中易溶；异密、氯仿中略溶；水中微溶。盐酸卡替洛尔化学名为5-3-1,1-二甲基乙基)氨基-2-羟丙氧基-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮盐酸盐。本品为白色结晶粉末,水中溶解，甲醇中略溶，乙醇中极微溶解，乙醚中几乎不溶；在冰醋酸中极微极微溶解。,(一)化学鉴别反应1.沉淀反应利用其碱性与生物碱沉淀剂生成沉淀盐酸卡替洛尔硫氰酸铬铵试液淡红色2.氧化反应利用侧链的不饱和双键可被高锰酸钾氧化氧烯洛尔KMnO4MnO2(棕色沉淀)(二)紫外分光谱鉴别法盐酸卡替洛尔：8g/ml,max=215nm;252nm氧烯洛尔：40g/ml,max=275nm,鉴别试验,盐酸卡替洛尔中有关物质检查,本品采用TLC法中的高低浓度对照法,含量测定,（一）非水溶液定法盐酸卡替洛尔，氧烯洛尔原料可采用此法盐酸卡替洛尔BHCl+HClO4BHClO4+HCl用电位法指示终点,HCl不干扰，无需加醋酸汞处理。,（二）紫外分光光度法本法主要用于制剂分析。例如盐酸卡替洛尔注射液采用本法。采用对照品比较法：CX=AX/ARCR标示量CXD/V取ml规格ml/标示量100,（三）HPLC法应用示例：人血浆中样烯络尔及其异构体的测定色谱条件：预柱为十八烷基硅胶柱；分析柱为手性ODR柱(C18固定相上涂渍3,5-二甲本氨基甲酸酯纤维素，作为手性剂);流动相为NaClO4(0.4mol/L)-乙腈(70:30)的磷酸缓冲液；检测器：237nm样品预处理：血浆样品用醋酸纤维素膜透析，预柱纯化和富集，然后通过RP手性HPLC法分析。回收率：可达80以上；线性范围：0.05g/ml2.50g/ml日内和日间精密度的RSD14%.,返回,练习与思考,A型题,1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.水杨酸D.对氨基苯甲酸E.氨基酚2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.苯甲酸E.苯酚3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.酮体E.苯甲酸,B型题,A.硫酸铜反应B.氧化反应C.还原反应D.水解后重氮化-偶合反应E.重氮化-偶合反应1.盐酸利