（药理学专业论文）荔枝核提取物对t2dm大鼠认知障碍的调控.pdf

荔枝核提取物对t 2 d m 大鼠认知障碍的调控 摘要 目的：研究泸州荔枝核提取物对t 2 d m 大鼠认知障碍的调控作 用，并探讨其机制。方法：m o r r i s 水迷宫筛选学习记忆正常雄性s d 大 鼠，随机分为对照组、模型组、o 4 2 m g k g - 1 多奈哌齐组、0 6 9 9 k 百1 、 1 3 9 9 l 嘻1 和2 7 8 9 k 百1 荔枝核提取物治疗组；高脂高蛋白饲养3 月 + 2 7 m g 蚝1 链脲佐菌素( s t z ) 腹腔注射制备t 2 d m 认知障碍大鼠模型； 灌胃给药，1 次日，连续1 个月；m o 仃i s 水迷宫测试各组大鼠学习记忆 能力；血糖仪测血糖；放射性免疫法测大鼠血清胰岛素水平、血清和 海马组织a p 含量；酶联免疫吸附测定( e l i s a ) 法测定海马组织a g e s ； 化学比色法测定血浆和海马组织a c h e 活性；4 多聚甲醛灌注固定、 石蜡包埋、连续冠状切片，h e 染色和免疫组织化学染色( s a b c 法) ， 光镜观察海马c a l 区神经元损伤及n f - 迎表达，i l l l a g ep r op l u s5 1 软 件分析n f 1 c b 表达阳性染色的积分吸光度。结果：( 1 ) 与普通饲养组比 较，高脂高蛋白饲养+ 腹腔注射2 7 m g 蚝。1 s t z 可明显升高大鼠血糖水 平俨 o 0 1 ) ，降低大鼠空间学习记忆功能( 尸 o 0 1 ) 。( 2 ) 与对照组比较， 模型组大鼠逃避潜伏期显著增加俨 o 0 1 ) ，跨越平台次数、在平台象 限停留时间及平台象限游程占总游程的百分比显著降低( 尸 o 0 1 ) ； 与模型组相比，o 6 9 9 k g 、1 3 9 9 k 岔1 和2 7 8 9 k g 。1 荔枝核提取物均可缩 短大鼠逃避潜伏期( 尸 o 0 5 ，尸 o 0 1 ) ，延长t 2 d m 认知障碍大鼠在平 台象限停留的时间( 尸 o 0 5 ) ，2 7 8 9 k g d 荔枝核提取物可增加t 2 d m 认 知障碍大鼠跨越平台的次数及在平台象限游程百分比( 尸 o 0 5 ) ，各 剂量组间相互比较，于第五天，大鼠逃避潜伏期差异明显俨 o 0 5 ， p o 0 1 ) 。( 3 ) 与对照组比较，模型组血浆a c h e 活性、血清胰岛素含量、 血清和海马a p 含量、海马a g e s 含量明显增加( p o 0 1 ) ，海马a c l l e 活性活性下降( 尸 o 0 1 ) ；与模型组相比，o 6 9 9 k 9 1 、1 3 9 9 k g 。1 和 2 7 8 9 k 9 1 荔枝核提取物均可降低血浆a c h e 活性、血清胰岛素含量、 血清和海马a p 含量、海马a g e s 含量( 尸 o 0 1 ) ，提高海马海马组织 a c l l e 活性，且三剂量组间相互比较，差异明显( 尸 o 0 1 ，o 0 5 ) 。 ( 4 ) 光镜下( 4 0 0 ) ：对照组大鼠海马c a l 区锥体细胞排列紧密有序， 胞核大而圆，着色浅，核仁清晰，模型组大鼠海马细胞排列疏松，胞 浆浓缩、核固缩深染。荔枝核提取物随着剂量的增加，上述神经元变 性受损现象明显改善。对照组海马神经元胞核可见极少数棕褐色颗粒 沉积，模型组海马神经元胞核棕褐色颗粒沉积明显增加，各剂量荔枝 核提取物均可减少海马神经元胞核棕褐色颗粒沉积，且随着剂量的增 加效果更为明显。n f 1 表达阳性染色的积分吸光度，与对照组比较， 模型组明显升高( 尸 o 0 1 ) ，与模型组比较，各治疗组的积分吸光度 均降低( 尸 o 0 1 ) ，且三剂量组间比较差异明显( 尸 o 0 1 ，尸 o 0 5 ) 。 结论：( 1 ) 高脂高蛋白饲养3 月+ 腹腔注射2 7 m g 蚝4 s t z 成功建立了 t 2 d m 认知障碍大鼠模型。( 2 ) 荔枝核提取物可明显改善t 2 d m 大鼠认 知障碍，且有一定剂量依赖性。( 3 ) 荔枝核提取物改善t 2 d m 大鼠认知 障碍的可能机制：改善胰岛素抵抗，降血糖，减轻高血糖对a p 与 t a u 蛋白的糖化所致s p 和订形成增加；减轻高血糖引发的a e g s 形成 u 。 i f i j f i j | f f f f i ijiffji|iififf|ijfiijjjii| l y 1 7 8 4 9 ：；i 廿 与堆积，继而减轻a g e s 与黜惦e 作用后引发的全潭佃 激活及n f 心启 动的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡等级联反应对大鼠海马的神经元 的损伤；减少a p 在大鼠海马的沉积，减轻a p 的直接神经毒性作用 及其与n f 心相互促进的对神经元的损伤。可能与荔枝核改善 t 2 d m 认知障碍大鼠的中枢胆碱能神经元功能，增加a c h 合成，提升 中枢a c h 相对含量，维持脑内a c h 的动态平衡有关。 关键词：2 型糖尿病；认知障碍；大鼠；荔枝核提取物 厂一一 、 一? l ， 、t t h e r e g u l a t i o n0 fl y c h e es e e de x t r a c t0 nc o g n i t i v ed i s o r d e r o fr a t sw i t ht 2 d m a b s t r a c t ：o b j e c 蜥e ：t om e s t i g a t er e g u l a t o 巧e 黝a l l dm e c l 啪一 i s mo fl u z h o ul y c h e es e e de x t r a c t so nc o g l l i t i v ed i s o r d e ro fm t sw i m t 2 d m m e t h o d s ：t l l e n o m l a l l e 锄i n g a n dm e m o 巧m a l e s p m g u e d a w l e y ( s d ) r a t sw e r es e l e c t e dw i mm o r r i sw a t e rm a z e ，w h i c hw e r e 砌d o r n l yd i v i d e di n t oc o n t r o lg r o u p ，m o d e lg r o u p ，o 4 2 m g k g 1d o n 印e z i l g r o u p ，o 6 9 9 k g ，1 3 9 9 蚝。1a i l d2 7 8 9 蚝1l y c h e es e e de 舳c t 仃e a t m e n t g r o u p t l l em o d e lo fc o g n i t i v ed i s o r d e ri nr a t sw i t ht 2 d mw e r ei n d u c e d b yh i g h f a ta n dh i 曲- p r o r e i nd i e tf o r3m o n t h sa n dp 耐t o n e a l 蛔e c t i o n 2 7 m g 蚝1s t r 印- t o z o t o c i n ( s t z ) i 埘吼g a s 仃i c枷i l i s 伽i o n ，o n et i m e c v e 巧d a yf o ro n ei n o n t l l m o r r i sw a t e rm a z ee x 砌n a t i o n 、懿u s e dt o d e t e c t1 e a n l i n ga n dm e m o 巧a b i l i 锣o ft h et 2 d m r a t s ，a n db l o o dg l u c o s e w 硒m e a s u r e db yb l o o dg l u c o s em e t e r ，b ym e a n so fr a d i o i m m u n o a s s a y t od e t e c t s e l l l mi n s u l i na n dp a m y l o i d p r o t e i i l ( a p ) a n da pi i l 拶o c 锄p u s ，a n d b y m e a i l s0 f e n z y m e 1 1 n k e d1 1 1 1 l n u n o s o r b e n t a s s a y ( e l i s a ) t o m e a s u r ea g e si i l l l i p p o c 锄p u s a c h ea c t i v i t y i n p l 弱ma n dl l i p p o c a i i ：i p u sw e r ed e t 锄i n e db yc h e l l l i c a l c 0 1 0 r i m 嘶c m e t h o d b r a i no fr a t sw e r ep o u r e dm o 4 p a m f o m a l d e h y d ef o rf i x ，a n d t h eb r a i nw 嬲m a d eb yp a r a 伍ne 瑚【b e d d i n g ，c o r o n a l 蚵c r o t o m es e c t i o n h e m a t o x y l i n e o s i na n dt h ei m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n g ( s a b c ) 4 w e r ee m p l o y e dt oo b s e r v et h ed e g r e eo fi 1 1 j u r i e dn e u r o na n dt h e p o s i t i v ee x p r e s s i o no fn f - 1 c bo nc a 1i nh i p p o c a m p u s ，a n di t s i n t e 胂t e da b s o r b 锄c ew a sa n a l y s i s e db yi m a g ep r op l u s5 1s o f t w a r e o f e x p r e s s i o n o fn f 一1 c b r e s l l l t s ： ( 1 ) c o m p a r e dw i m廿l e 1 1 0 m l a l ， b r e e d i n gg r o u p ，l eb l o o d9 1 u c o s ew a si n c r e a s e ds i g l l i f i c a n t l y ( 尸 o o1 ) ， s p a t i a ll e a m i l l g 锄dm e m o 巧i nr a t s w e r ed e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y ( p o 0 1 ) ( 2 ) c o m p a r e dw i t hm e c o n t r 0 1g r o u p ，m ee s c 印el a t e n c yo fr a t s i nm o d e lg r o u pw 鹊s i 鲥f i c 觚t l yi n c r e a s e d ( p o o1 ) ，m en u m b e r so fr a t s c r o s s i n gp l a t f o m ，t h et i m es p e n ti nt a 玛e tq v a d r a l l ta n dt 1 1 em np e r c e n t a g e o ft a r g e tq u a 血眦w a sd e c r e a s e ds i 鲥f i c a n t l y ( p o o 1 ) c o m p a r e dw i t h t h em o d e lg r o u p ，o 6 9 9 蚝、1 3 9 9 k g 。1 a 1 1 d2 7 8 9 k g 1l y c h e es e e de x t m i 吐 c a ns h o r t e nt 1 1 ee s c a p el a t e n c yo fr a t s ( 尸 o 0 5 ，尸 o o1 ) ，a n dp r 0 1 0 n gt h e t i n l es p e n ti nt a r g e tq u a d r a n t ( p o 0 5 ) 2 ，7 8 9 k 分1 l y c h e es e e de x _ t r a 戍c 孤 i n c r e a s em en u i l l _ b e r so fr a t sc r o s s i i 冯p l a t f o ma n dt h er u n p e r c e n t a g eo f t a r g e tq u 酞i 瑚m t ( 尸 o 0 5 ) c o i n p a r e dw i t ht h et r e a t m e n tg r o u p ，t h e r ea r e s i 星m i 6 c a n td i 任e r e n c e si nt h ee s c a p el a t e n ro fr a t s ，证m ef i r hd a yo ft h es l g n l n c a n td l n e r e n c e s1 nt n ee s c a p el a t e n c yo tr i l t s ，mt h en t t nd a yo tt n e p l a c en a v i g a t i o ne x e r c i s e ( p o 0 5 尸 o o1 ) ( 3 ) c o i n p a r e dw i t hm ec o 姗m g r o u p ，t 1 1 ep l a s m aa c h ea c t i v i 坝t h es e m mi n s u l i nc o n t e n t ，t 1 1 ea pl e v e l si l l s e m ma n dh i p p o c a l 】叩a la n da g e sc o n t e n ti i l h i p p o c 甜n p u s ，a 1 1w e r e i n c r e a s e ds i g n i f i c a m l y ( 尸 o o 1 ) ，砒l dt h ea c t i v i t yo fa c l 也i i ll l i p p o c 锄p a l t i s s u ew a sd e c r e a e d ( 尸 o o1 ) c o m p a r e dw i mm em o d e l g r o u p ，o 6 9 9 k 分1 、 1 3 9 9 k g 。1a n d2 7 8 9 k g 1 l y c h e es e e de x t r a c ta 1 1c a i ld e c r e a s et l l ep l a s m a 5 a c h ea c t i v i 饥t h es e n 胍i n 跚l i nc o n t e n t ，t h ea pc o n t e n ti ns e m m 跹d h i l ，p o c a n 叩u sa n da g e si nt h ch i p p o c 锄叩u s 俨 o o1 ) ，b u tm ea c t i v i t yo f a c h eo fl l i p l o c 甜n p u sw 弱i i l c r e 嬲e di n 臼e a 恤e n t 孕。o u p t h et l l r e ed o s e g r o u p sc o m p 批dw i t l l 既c ho t h t h e r ea r es i g i l i 6 c 锄td i f f - e r e n c ei nt h e t r e a 恤e m 鲫i u p ( p o o1 ，o 0 5 ) ( 4 ) u n d e rt h el i 蛳i i l i c r o s c o p e ( 4 0 0 ) ： t h er o wo fn e u r o n si st i 出a n do r d e r ，n u c l e u si sb i ga n d r o u l l d ，c o l o r i n go f n u c l e u sa 1 1 de n d o c h y l e i l l aa r eo b v i o u sa n dt h en u c l e o l u si sc l e 锄e s si n t h ec o n t r a lg r o u p t h er o wo fn 朋r o n si sr a r e f 融i o n ，t h ee n ( 1 0 c h y l e m ai s t h i c k e l l i n g ，a n dm en u c l e u si sk a r ：y o p y l ( 1 l o s i sa l l da n a c h r o m a s i si nt l l e m o d e lg r o u p a b o v e m e n t i o n e dn e u r o nd e g e l l e r a t i o na i l di n j u r e dw e r e i m p r o v e do b v i o u s l yi nt h et r e a t m e n tg r o u p t l l e r ew 嬲 v e 巧 f e w b r o w m e s s 野m ai i l t h en u c l e u so fm t si n 1 ec o n 仃a l g r o u p ，a n d s e d i m i m t a t i o no f b r o 、i m e s sg r a 眦mt h en u c l e u sw a si n c r e a u s e d0 b v i o u s l y i nt h ei n o d e lg r o u p l y c h e es e e de ) 【t 1 7 a c tc a nd e c r e a s es e d i m e m a t i o no f b r o w i u l e s sg r a n ai nt l l en u c l e u s ，a 1 1 dt h ee f f e c ti si n o r eo b v i o u sf 0 1 1 0 w i n g d 1 1 l gd o s a g ei n c r e a s e d t h ei n t e g r a t e da b s o r b a n c eo fe x p r e s s i o no fn f 一佃 i n1 1 i p p o c a n l p u sw 勰d e c r e a s e di nm em o d e l 刚p ( 尸 o o 1 ) ，a n dt l l e r ei s d e c r e a s e d o b v i o u s l yi n 仃e 砌 1 e n tw i t hl y c h e es e e de x 舰c tg r o u p ( 尸 o o1 ) ， a n dt h e r ei s s i 印i f i c a n td i 彘r e n c e s 锄o n g 咖e ed o s eg r o u p s ( 尸 o o1 ， 1 2 0 秒或 2 0 为痴呆大鼠。 2 3 2 实验动物分组 普通饲料饲养组以血糖低于7 0 6 眦n o l l 1 筛选正常大鼠1 4 只作 为对照组( c o n t r o lg r o u p ，1 4 只) ，再以t 2 d m 认知障碍大鼠为模型组 ( m o d e lg r o u p ，1 2 只) 、o 4 2 m g k g 1 盐酸多奈哌齐组( d o n 印e z i l h y d r o c h l o d d eg r o u p ，1 2 只) 、o 6 9g 埏、1 3 9 9 k g 。1 和2 7 8 9 k 分1 荔枝 核提取物组( l y c h e e s e e de x 恤c tg r o u p ，每组1 2 只) 。 2 4 药物配制、给药剂量确定及给药 2 4 1 药物配制 荔枝核提取物临用时以温开水分别配成浓度为1 0 、2 0 、4 0 的混悬液；盐酸多奈哌齐临用时以温开水配成浓度为o 0 0 8 的混悬 液，置于冰箱4 保存备用。 2 4 2 给药剂量确定 盐酸多奈哌齐成人剂量为5 m g d - 1 。参照陈奇主编的中药药理实 验方法学【1 8 】，根据人和动物体表面面积计算方法，将人用盐酸多奈 哌齐剂量转换为大鼠等效剂量o 4 2 m g 蚝d - 1 。荔枝核提取物剂量根 据预试结果，分别为2 7 8 9 蚝一d 、1 3 9 9 蚝d 。1 和o 6 9 9 k 百1 d 1 ： 2 4 3 给药 用药组分别按o 6 9 9 k 分1 d - 1 、1 3 9 9 k 百1 d 1 、2 7 8 9 k 9 1 d - 1 荔 枝核提取物和o 4 2 m g l 【g - 1 d 1 盐酸多奈哌齐灌胃给药，模型组和对照 组灌胃给予等容量生理盐水，每天1 次连续给药4 周。各组大鼠在用 药期间自由饮水、进食。 2 5m o r r i s 水迷宫测试大鼠学习记忆能力 2 5 1定位航行实验( p l a c ei 砭i v i g a t i o nt e s t ，p n t ) 于大鼠最后一次灌胃给药后1 小时开始。每天分上、下午两个时 间段( b l o c k s ) ，每个时间段训练4 次( t r i a l s ) ，每次分别从4 个不同的标记 点( 在4 个象限中平均分布) ，将大鼠面向池壁放入水中，记录1 2 0 s 内寻找平台所需时间( 逃避潜伏期，e s c a p el a t e n c y ) ，每次至少间隔 3 0 1 1 1 i n ，训练共历时5 天，平台位置在同一批大鼠训练及测试过程中保 持不变。先将平台置于东南象限中间，大鼠置于平台上，2 0 s 后从离 平台象限最远的象限的入水点将其面向池壁放入水中使其有反身动 作，记录并观察大鼠寻找平台的线路图、逃避潜伏期及游泳速度等。 如果大鼠在1 2 0 s 内仍未找到平台，将其重新置于平台，2 0 s 后移出迷 宫，其潜伏期记为1 2 0 s 。 2 5 2 空间探索实验( s p a t i a lp r o b et e s t ，s p t ) 空间探索实验用于测量大鼠学会寻找平台后，对其空间位置记忆 的保持能力。于第6 天进行空间探索实验。具体为：撤除平台，任选1 个入水点将大鼠面向池壁投入水中，记录大鼠在1 2 0 s 内跨过虚拟平台 的次数，在平台象限的游泳时间及在平台象限游泳距离占总游程的百 分比。 2 6 大鼠血糖含量测定 将尾部毛剪去后消毒，然后浸在4 5 左右的温水中数分钟，使 尾部血管充盈。再将尾擦干，用剪刀剪去尾尖o 3 o 5 c m ，用拇指和 食指由尾根向尾尖按捏，血液即从尾尖流出，滴在血糖试纸上，用血 糖分析仪测血糖值，具体操作按说明书进行。 2 7 血浆，血清制备及a c h e ，胰岛素和a p 含量测定 水迷宫实验结束后，每组随机取8 只大鼠称重后以1 戊巴比妥钠 ( o 4 m 1 k 百1 ) 腹腔注射麻醉，俯卧固定于手术台上，心脏取血5 i i l l ， 分别放入两试管中( 其中一试管为抗凝管，另一试管为普通生化管) ， 抗凝管以3 0 0 0 转分转速离心l o 分钟，取血浆放入e p 管中，置一2 0 冰箱用于a c l l e 检测；普通生化管，冰箱静置3 h 后，3 0 0 0 转分转速离 心1 0 分钟，取血清放入e p 管中，置一2 0 冰箱用于胰岛素检测和a d 检测。 。 血清胰岛素和a d 含量测定采用放射性免疫法，具体操作按试剂 盒说明书进行( 泸州医学院附属医院核医学科专人负责检测) 。 血浆a c l 也含量测定：采用化学比色法法，经7 2 1 分光光度计测 定，具体操作按试剂盒说明书进行。 。 2 8 海马组织、皮层组织匀浆制备及a c h e ，a p 和a g e s 检测 每组大鼠心脏取血后，立即断头取脑，分离左、右海马左侧海马 组织立即置于一8 0 超低温冰箱中保存，备用于其他指标检测。右侧 海马组织称重后，立即置于4 的水浴匀浆器匀浆，3 0 0 0 转分转速 离心1 0 分钟制备5 的海马组织匀浆，置一2 0 冰箱用于a c l l e ，a p 和a g e s 检测。 海马组织a c l l e 含量测定：用7 2 1 分光光度计行化学比色法测定 a c l l e 含量，具体操作按试剂盒说明书进行，a b 采用放射性免疫法， 具体操作按试剂盒说明书进行( 泸州医学院附属医院核医学科专人负 责检测) ，a g e s 含量测定采用e l i s a 法，经d 卜订订9 6 0 2 型酶标仪测 定，具体操作按试剂盒说明书进行。 2 9 脑灌注、脑组织包埋、切片、染色及组织学检查 2 9 1 脑灌注固定、脑组织包埋、切片 水迷宫实验结束后，每组随机取2 只进行灌注固定：大鼠腹腔注 射o 4 戊巴比妥( 4 0 i n g k 9 1 ) 麻醉，迅速暴露心脏，分离主动脉弓； 用连接输液器的腰穿针从左心室插入主动脉弓，结扎固定，拔出针心， 剪开右心耳，用肝素化的l o o r n l 生理盐水经升主动脉快速冲洗，然后 快速用含4 多聚甲醛的o 1 m 磷酸盐缓冲液约2 5 0 m 1 灌注，其间大鼠 如出现全身抽搐时将大鼠首尾拉直，之后减慢灌流速度，在1 小时内 灌入约2 5 0 m 1 的4 多聚甲醛灌注液至大鼠全身僵硬。之后立即开颅取 脑，置于盛有灌注液的小瓶中备用。 石蜡包埋，连续冠状切片，厚度为4 5 “m ，每隔1 5 张连续取2 张， h e 染色观察海马神经元损伤情况，s a b c 法观察海马组织神经元 n f 佃表达情况。 2 9 2 染色及组织学检查 2 9 2 1 苏木素伊红染色( 脚三染色) 烤干的石蜡切片入二甲苯二次脱蜡1 0 “n ； 入纯酒精2 次每次8 i i l i n ； 逐级入降级酒精9 5 、9 0 、8 0 、7 0 ，每级8 “n 入蒸馏水浸洗，h 删s 苏木精染色1o l5 m i n ； 移出切片，水洗掉多余染液，进入1 盐酸酒精分色1 3 s ； 自来水充分冲洗，入1 氨水返蓝1 0 3 0 s ； 水洗后入伊红水溶液染色5 l o m i n ； 梯度酒精脱水，经7 0 、8 0 、9 0 、9 5 酒精及无水酒精逐级 脱水，每次5 m i n ； 二甲苯透明两次，每次5 i i l i n ； 中性树胶封片。 2 9 2 2 n 限心免疫组织化学染色( s a b c 法) 切片常规脱蜡至水； 室温下放入新鲜配置的3 h 2 0 2 中1 0 m i n ，灭活内源性过氧化物酶。 然后用蒸馏水溶液冲洗3 次； 微波抗原修复：将切片浸入o 0 1 m 枸橼酸盐缓冲液( p h 6 o ) 中，使用微 波炉加热至沸腾后断电，间隔l o 血n 后，反复2 次。室温冷却后用p b s 冲洗2 次； 滴加5 b s a 封闭液，室温2 0 分钟，甩去多余液体，不洗； 滴加适当稀释一抗，4 过夜。 3 7 烤箱复温4 5 耐n ，然后用p b s 冲洗3 次，每次2 血n ； 滴加生物素化山羊抗鼠或兔i g g ，3 7 2 0 i i l i n 。p b s ( p h 7 ：2 7 6 ) 冲洗3 次，每次2 缸n ； 滴加试剂s a b c ，3 7 2 0 i n i n 。p b s ( p h 7 2 7 6 ) 冲洗4 次，每次5 i i l i n ； d a b 显色：取l i i l l 蒸馏水，加d a b 显色试剂盒中a 、b 、c 试剂各一滴， 混匀后滴加在切片上，室温显色，镜下控制显色时间，约3 1 0 1 1 1 i n ， 然后用蒸馏水冲洗干净； 脱水，透明，中性树胶封片，显微镜观察。 2 9 3 光镜观察 2 9 3 1大鼠海马病理组织学改变 海马组织分为四个区，包括c a l 、c a 2 、c a 3 、c a 4 。通过我们 对四个区观察发现，组织病理学改变以c a l 区最为显著，因此我们选 取海马组织c a l 区进行观察。在低倍镜( 1 0 0 ) 下确定海马组织c a l 区的锥体细胞层，然后转到高倍镜( 4 0 0 ) 下观察海马组织c a l 区的 锥体细胞神经元损伤。 2 9 3 2n f 1 园蛋白表达 通过我们对四个区观察发现，海马组织c a l 区免疫组织化学染色 结果( s a b c 法) 以c a l 区最为显著，因此我们选取海马组织c a l 区 进行观察。在低倍镜( 1 0 0 ) 下确定海马组织c a l 区的锥体细胞层， 然后转到高倍镜( 4 0 0 ) 下观察海马组织c a l 区的n f 1 出阳性反应。 每个切片在高倍镜( 4 0 0 ) 下选六个视野拍照，采用i l n a g ep r op l u s 5 1 软件对n f 心的阳性表达进行分析，测定每个视野下阳性反应的平均 光密度。判定标准：n f 1 出以胞核出现棕褐色颗粒为阳性反应。 3 统计方法 计量资料用i 士s 表示。逃避潜伏期采用重复测量数据的双因素 方差分析( 咖- w a y a n o v a 丽t hr e p e a t e di n e a s u r e s ) 后用l s d 法检验。 其余实验数据组间差异比较采用单因素方差分析( o n e w a ya n o v a ) 后再l s d 法检验，应用统计软件s p s s l 3 of o rw i n d o w s 处理，检验 水准为仅= o 0 5 ，o o l 。 结果 1 t 2 d m 大鼠模型建立 高脂高蛋白饲养2 月+ 腹腔注射2 7 m g k 分1 s t z ，7 2 h 后高脂高蛋 白饲养组血糖含量为2 3 4 6 士2 2 9 n u n o l l 1 ，与普通饲料饲养 ( 5 4 8 士o 5 1 l i n o l l - 1 ) 组比较，具有统计学意义( 尸 2 0 ) ，提示：高脂高蛋白饲养2 月+ 腹腔注射 2 7 m g k 岔1 s t z + 高脂高蛋白饲养1 月，成功制备了1 2 d m 大鼠认知障碍 模型 3 荔枝核提取物对大鼠学习记忆能力的影响 3 1 定位航行实验 从表1 和图1 可见，各组大鼠逃避潜伏期随着游泳天数的增加而不 断下降，说明各组大鼠在四天的游泳训练中对于寻找平台均有一定的 学习记忆能力，但其学习记忆能力存在很大差异。第一、二天各组的 潜伏期相比无统计学意义；从第三天开始，与对照组相比，模型组大 鼠逃避潜伏期显著增加( 尸 o 0 1 ) ，与模型组相比，0 4 2 l n g k g j 多奈哌 齐组、o 6 9g l 【g - 1 、1 3 9g k g 一、 2 7 8 9 k g j 荔枝核提取物均可使大鼠的 逃避潜伏期缩短俨 o 0 5 ，p o 0 1 ) 。第三、四天各剂量组间无明显差 异p o 0 5 ) ，第五天，各剂量荔枝核提取物治疗组相互比较，大鼠逃 避潜伏期存明显统计学差异( 户 o 0 5 ，尸 o 0 1 ) j 表1 荔枝核提取物对大鼠逃避潜伏期的影响( i 士s ，舻1 0 ) 1 a b l ele 腩c to f l y c h e es e e de x n 狮t t h ee a p el a t i m c yo f r a t s ( i 圭s ，n = 1 0 ) 对照组 一一 1 1 4 6 6 士5 8 21 0 6 0 4 士4 9 06 7 6 7 士6 5 83 6 o q 士3 7 52 5 4 5 士1 5 2 模型组1 1 4 8 l 士6 5 41 0 9 3 l 士7 1 78 9 3 4 士4 4 6 7 9 5 5 士4 9 6 5 2 o l 士4 4 2 多奈哌齐组 o 4 2 l 赡k g 1 1 1 5 5 8 士4 3 81 0 9 3 l 士7 1 77 4 3 l 士5 3 7 4 9 6 蛀3 4 9 2 7 6 0 士3 5 6 荔枝核提取物o 6 9g k f l1 1 5 4 0 士6 4 31 0 3 6 l 圭4 5 58 4 9 4 士4 8 65 1 9 7 士4 9 8 4 2 4 2 士2 6 6 荔枝核提取物1 3 9g k g _ 11 1 3 0 5 士7 1 61 0 9 0 5 士8 9 78 3 6 l 士4 3 55 0 4 5 士3 9 l 3 6 6 4 士2 6 5 庐 荔枝核提取物2 7 8g k g - 11 1 2 8 2 士5 3 81 0 7 0 3 士5 5 87 3 1 9 士4 4 7 4 7 9 2 士5 0 9 3 2 8 5 士4 4 5 a a 与对照组比较p o 0 l ；与模型组比较p 0 o l ，尸 o 0 5 ； 与o 6 9g k 一荔枝核提取物治疗组比较p o 0 5 ，峰 0 o l p o 0 1 1 ) sc o n 嘲g r o u p ；p 0 0 1 ，p 0 0 5u s 啪d e l 鲫p ； e p 0 0 5 ，厶p 0 o1 1 ) so 6 9g k g 1l y c h c es d 懿的c t 缸锐咖e n tg r 0 叩 图1 荔枝核提取物对大鼠逃避潜伏期的影响 f i gle 胝to f l y c h s d 甑眦t 血ee a p cl 锄e n c ) ro f 盈乜 3 2 空间探索实验 从表2 和图2 a ，图2 b ，图2 c 可见，与对照组相比，模型组跨越平 台的次数、在原平台象限停留的时间及在平台象限游程占总游程的百 分比显著降低( 尸 o 0 1 ) ；与模型组相比，o 6 9 9 k 9 1 、1 3 9 9 k g 。和2 7 8 g k g j 荔枝核提取物均可延长t 2 d m 认知障碍大鼠在平台象限停留的 时间( 尸 0 0 5 ) 。 表2 荔枝核提取物对大鼠跨越平台次数、在平台象限停留时间及平台象限游程占总游程百分 比的影响( i 士s ，n = 1 0 ) t 棚e2e 融so f b 曲s e c de x 臼急c t 伽t h en 硼曲e 鹉o fr a t sc s s 她p l a t f o m ，t l l e t i l n es p e n ti n 吲q 瑚d r 锄t 觚d 也en 】i lp 即n t a g eo f t a 唱e t 似锄t ( i 士s ，n 1 0 ) 组别 剂量跨越平台次数 平台象限停留时间平台象限游程百分比 一 ( 次豺1 2 0 s ) ( s ) ( ) 对照组 一 6 o q 1 4 9 3 6 1 2 士7 0 82 9 7 0 士6 0 4 模型组 一 1 8 0 士1 3 2 1 6 3 4 士5 3 1 1 5 9 0 士3 4 5 多奈哌齐 0 4 2 n l g k g 14 0 仳1 1 6 2 8 2 3 士5 8 9 2 8 4 0 士5 8 2 荔枝核据取物0 6 9 9 k g - 1 2 8 0 士1 0 3 2 2 3 2 士3 0 2 2 2 2 9 士5 4 6 荔枝核据取物1 3 9 9 k g - 1 3 2 0 士1 4 0 2 4 9 2 士3 1 3 2 4 4 0 士5 7 8 荔枝核据驭物2 7 8 9 k g 1 4 4 0 士1 0 8 3 0 8 l 士5 3 0 2 7 1 0 士5 3 8 与对照组比较p 0 0 1 ：与模型组比较。p o 0 5 - p o 0 l u sc 叫娜；p o 0 51 ) sm o d e l 哪 图2 a 大鼠跨越平台次数 图2 b 大鼠在平台象限停留时间 图2 c 大鼠平台象限游程百分比 4 荔枝核提取物对大鼠血糖及血清胰岛素水平的影响 与对照组比较，模型组大鼠血糖值及血清胰岛素含量明显增加 ( 尸 o o1 ) ；与模型组相比，o 4 2 m g 蚝1 多奈哌齐组和o 6 9 9 k 9 1 、 1 3 9 9 蚝、2 7 8 9 k g 。1 荔枝核提取物均能显著降低t 2 d m 认知障碍大 鼠血糖水平及血清胰岛素；与多奈哌齐组相比，1 3 9 9 k 9 1 、2 7 8 9 k 分1 荔枝核提取物降血糖更为明显( p o 0 1 ) ；与o 6 9 9 k g 1 荔枝核提取 物治疗组比较，2 7 8 9 k 百1 荔枝核提取物可明显降低血糖值及血清胰 岛素水平( 尸 o o l ，p o 0 5 ) 。见表3 表3 荔枝核对大鼠血糖及血清胰岛素水平的影响( 舅士s ，n _ 1 0 ) 伽l e3e 彘c t so f l ) r c h s e e de x 臼徼t b 1 0 0 dg l u c o 锄ds e n l mi n 肌l i nc o m e n to f 眺( i 士s ， n 芦1 0 ) 与对照组比较p o 0 1 ：与模型组比较p o o l ，尸 0 0 5 ； 与0 6 9g k f l 荔枝核提取物治疗组比较p 0 0 5 ，_ p o 0 l 尸 0 0 1 1 sc 饥l 缸面掣0 u p ；p 0 0 l ，p 0 0 5 髑硼e l 目呻； o 0 5 ，峄 0 01 1 ) s0 6 9g k g 1l y c h s e e de x 仃t 的a 诅瑚t 邸叩 5 荔枝核提取物对大鼠血浆及海马a c h e 活性的影响 从表4 可见，与对照组比较，模型组血浆a c l l e 活性明显增加 ( 尸 o 0 1 ) ，海马a c h e 活性明显降低( p 0 0 1 ) ；与模型组相比， o 4 2 m g k g 。1 多奈哌齐组、o 6 9 9 蚝、1 3 9 9 蚝1 和2 7 8 9 k 9 1 荔枝核提 取物治疗组血浆a c l l e 活性明显降低( 尸 o 0 1 ) ，提高海马a c l l e 活 性( 尸 o o1 ) ，血浆a c l l e 活性在o 6 9 9 k g 。1 与2 7 8 9 1 ( g 荔枝核提取 物治疗组间比较，差异明显( p o 0 1 ) 。 表4 荔枝核提取物对大鼠血浆及海马组织a c h e 的影响( 孑士s ，舻8 ) 讪l e 4e & c t so f l y c h s c c d 麟椭l c t a c h e a c 6 嘶i n 岫锄d 岫m 锄p a l 咖o f 触 ( i 士s ，n = 8 ) 一一一_ _ _ 一 组别剂量 q 垣 一 一 垒鍪! 竺! ! ：墨里堕：! 查呈! 旦：璺曼旦丛：! _ i _ _ _ _ - - _ - - _ _ _ _ _ - _ _ _ - _ - - _ - _ _ _ _ - - _ l