（外科学专业论文）id1、id3和mmp9在脑转移瘤中的表达和意义.pdf

目录 iylllllllllllll9111111011ullloulll9llllll8illl112l l i i q y 19 0 0 9 8 2 中文摘要l 英文摘要3 研究论文i d 1 、i d 3 和m m p 9 在脑转移瘤中的表达和意义 前言5月| j 舌5 材料与方法5 结果9 附图1 2 附表2 l 讨论2 5 结论2 9 参考文献3 0 综述分化抑制因子在神经系统肿瘤中的调控作用3 3 致谢4 3 个人简历4 4 中文摘要 ld - 1 、id - 3 和m m p - 9 在脑转移瘤中的表达和意义 摘要 目的：通过检测脑转移瘤组织中分化抑制因子1 ( i n h i b i t o r so f d i f f e r e n t i a t i o n 1 ，i d 1 ) 、分化抑制因子3 ( i d 3 ) 和基质金属蛋白酶9 ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9 ，m m p 9 ) 的表达情况，探讨三者在脑转移瘤形成和侵袭过程中 的作用。 方法： 1 选取经手术切除脑转移瘤样本4 4 例，另取正常人脑组织( 脑疝患者 行内减压切除的正常脑组织) 样本l o 例，全部样本经1 0 福尔马林固定， 常规石蜡包埋，连续切片。同时调取病理科存档的患者相应的原发灶肿瘤 标本蜡块，连续切片。 2 设定脑转移瘤及原发肿瘤为观察组，正常脑组织为对照组，再根据 其年龄、性别、原发肿瘤部位，分别进行分组对照。采用免疫组化法检测 i d 1 、i d 3 和m m p 9 蛋白在肿瘤原发灶、脑转移灶及正常脑组织中的表 达。对每张切片在高倍镜( 4 0 0 x ) 下计数1 0 个高倍视野，依据阳性细胞所 占的百分比评定阳性等级，计算出阳性细胞率。 3 收集全部样本的临床病理资料。实验数据采用s p s s1 3 0 软件进行统 计学处理，并分析i d 1 、i d 3 和m m p 9 三者间表达的相关性。 结果： 1 在4 4 例脑转移瘤中，i d 一1 、i d 3 、m m p 9 阳性表达率分别为9 3 2 ( 4 1 4 4 ) 、9 5 5 ( 4 2 4 4 ) 、8 1 8 ( 3 6 4 4 ) ；自病理科调取到的7 例原发 灶肿瘤中，i d 1 、i d 3 、m m p 9 阳性表达率分别为7 1 4 ( 5 7 ) 、7 1 4 ( 5 7 ) 、 5 7 1 ( 4 7 ) ；正常脑组织中三者均无阳性表达。 2i d 1 、i d 3 、m m p 9 在脑转移瘤与其原发灶中的表达均显著高于正 常脑组织( p o 0 5 ) 。依据患者年龄，性别及原发肿瘤的不同分组，i d 1 、i d 3 、 m m p 9 在不同组别脑转移瘤中的表达差异均无统计学意义( p 0 0 5 ) 。 3 对所有脑转移瘤样本中i d 1 、i d 3 、m m p 9 的表达情况行相关性分 析显示，i d 1 与m m p 一9 表达呈显著正相关( f o 3 8 6 ，p = o 0 1 0 ) ，i d 3 与 中文摘要 m m p 一9 表达呈正相关( 丫= o 3 0 6 ，p = o 0 4 3 ) ，i d 1 和i d 3 表达亦呈正相关 ( o 3 1 9 ，p = o 0 3 5 ) 。其中i d 1 与m m p 9 的相关性最为显著。 结论：i d 1 、i d 3 、m m p 9 在脑转移瘤及其原发灶中均高表达，在正 常脑组织中不表达，三者在脑转移瘤中的高表达与原发肿瘤的部位，患者 的年龄和性别无关。在脑转移瘤组中i d 1 、i d 3 、m m p 9 表达之间呈显著 相关性，i d 一1 与m m p 9 两者之间相关性尤为显著。因此认为i d 1 和i d 3 ， 除本身参与脑转移瘤的形成和发展外，i d 1 还可通过调节m m p 9 的表达， 为转移瘤的形成提供条件。i d 1 、i d 3 、m m p 9 的高表达在脑转移瘤形成 中发挥了重要的生物学作用，且三者存在一定的协同作用关系，为脑转移 瘤的发生机制提供了新的研究思路。 关键词：i d 1 ；i d 3 ；m m p 9 ；脑转移瘤；免疫组织化学法 英文摘要 e x p r e s s i o na n ds i r n i f i c a n c e0 f d 1 i d 3a n dm 。p 9 r e s s l o n a n l ls l r n lc a n c e1n ii n 0 lc i 1 1 d r y i b r a i nm e t a s t a t i ct u m o r a b s t r a c t o b j e c t i v e ：b yd e t e c t i n gt h ee x p r e s s i o no fi d 一1 ，i d 一3 ，m m p - 9i nb r a i n m e t a s t a t i ct u m o r s ，a n dt oe x p l o r et h e i rr o l ei nt h ep r o c e s so ff o r m a t i o na n dt h e i n v a s i o no fm e t a s t a s e s m a t e r i a l sa n dm e t h o d s ： 1t oc o l l e c tt h es a m p l e so fb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r sb ys u r g i c a lr e s e c t i o nf r o m 4 4c a s e sa n ds a m p l e so fn o r m a lb r a i nt i s s u e10c a s e s ( n o r m a lb r a i nt i s s u e sb y s u r g i c a lr e s e c t i o nf r o mi n t e r i o rd e c o m p r e s s i o ni np a t i e n t sw i t hc e r e b r a lh e m i a ) a l lo ft h et i s s u e sw e r ef i x e di n10 n e u t r a lf o r m a l i n ，e m b e d d e di np a r a f f - i ng e n e r a l l ya n dc u ti n t os l i c e ss e r i a l l y t or e t r i e v ec o r r e s p o n d i n g p a t i e n t sw i t h p r i m a r yt u m o rp a r a f f i nb l o c k so ft u m o rs p e c i m e n sa r c h i v e di np a t h o l o g y , c u t i n t os l i c e ss e r i a l l y 2s e to fb r a i nm e t a s t a t i ct u m o ra n dp r i m a r yt u m o rf o rt h es t u d yg r o u pa n d n o r m a lb r a i nt is s u ea st h ec o n t r o lg r o u p a n da c c o r d i n gt oa g e ，g e n d e ro r p r i m a r yt u m o r s i t es e tt h ec o n t r o lg r o u pr e s p e c t i v e l y t h ed e t e c t i o no fm m p 一9 ， i d 一1 ，i d 一3w a sm a d eo fu s i n gi m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t r e p t a v i d i n p e r s i d a s e ( s p ) t e c h n i q u ei nb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r , p r i m a r yt u m o ra n dn o r m a lb r a i n t i s s u e e a c hs e c t i o na th i g hm a g n i f i c a t i o n ( x 4 0 0 ) c o u n t10h i 曲p o w e rf i e l d ， a c c o r d i n gt o t h ep e r c e n t a g eo fp o s i t i v ec e l l sa s s e s s e dp o s i t i v e r a t i n g ，t o c a l c u l a t e dt h ep e r c e n t a g eo fp o s i t i v ec e l l s 3c o l l e c tc l i n i c a l p a t h o l o g ym a t e r i a l o fa l lt h es a m p l e s p r o c e s s i n gt h e a c q u i r e dd a t aa n da n a l y z i n gt h ec o r r e l a t i o nb e t w e e nm m p 一9 ，i d 一1 ，i d 一3 i n b r a i nm e t a s t a t i ct u m o rw i t hs p s sl3 0s t a t i s t i cs o f t w a r e r e s u l t s ： lt h ep o s i t i v er a t e so fi d 一1 ，i d 一3 ， 心，i p 一9 e x p r e s s i o ni n4 4e a s e so fb r a i n m e t a s t a t i ct u m o rw e r e9 3 2 ( 4 1 4 4 ) 。9 5 5 ( 4 2 4 4 ) ，81 8 ( 3 6 4 4 ) r e s p e c t i v e l y t h ep o s i t i v er a t e so fi d l ，i d 一3 ，啪一9e x p r e s s i o nw e r e7 1 4 3 英文摘要 ( 5 7 ) ，7 1 4 ( 5 7 3 ，5 7 1 ( 4 7 ) i n7c a s e so f p r i m a r yt u m o ra r c h i v e di n p a t h o l o g y t h e r ew a sn oe x p r e s s i o no ft h e s et h r e ep r o t e i n s i nn o r m a lb r a i n t i s s u e 2t h ee x p r e s s i o no fi d - 1 ，i d 一3 ，m m p 一9i nb r a i nm e t a s t a t i ct u m o ra n dp r i m a r y t u m o rw e r ea l ls i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nn o r m a lb r a i nt i s s u e ( p o 0 5 ) b a s e do n a g e ，g e n d e ra n dp r i m a r yt u m o rs i t ew e r ed i f f e r e n tg r o u p s ，i d 一1 ，i d 一3 ，m m p 一9 i nt h ed i f f e r e n tg r o u p si nt h ee x p r e s s i o no fb r a i nm e t a s t a t i ct u m o rw a sn o s t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e ( p o 0 5 ) 3t h ec o r r e l a t i o na n a l y s i so fi d 一1 ，i d - 3 ，m m p 一9e x p r e s s i o nf o ra l lt h eb r a i n m e t a s t a t i ct u m o rs a m p l e ss h o w e dt h a tt h e r ew a sas i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o na m o n gi d - 1 ，i d 一3a n dm m p 一9 i d 一1a n dm m p - 9 e x p r e s s i o ni sap o s i t i v e c o r r e l a t i o n ( y = o 3 8 6 ，p = 0 010 ) ，i d 一3a n dm m p 一9e x p r e s s i o ni sap o s i t i v ec o r - r e l a t i o n ( y = o 3 0 6 ，p = 0 0 4 3 ) ，i d - 1a n d i d 一3e x p r e s s i o ni sap o s i t i v ec o r r e l a t i o n ( y = o 319 ，p = o 0 3 5 ) c o n c l u s i o n ：i d - i ，i d 一3a n dm m p - 9w e r eo v e re x p r e s s e di nb r a i nm e t a s t - a t i ct u m o ra n dp r i m a r yt u m o r , a n dt h e yw e r en o te x p r e s s e di nn o r m a lb r a i n t i s s u e t h eo v e re x p r e s s i o no fl d 一1 ，i d 一3a n dm m p 一9i nb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r w a sn o ta s s o c i a t e dw i t hp r i m a r yt u m o rs i t e ，a g ea n dg e n d e r t h e r ew a sas i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o na m o n gi d 一1 ，i d 一3a n dm m p - 9 ，a n dt h ec o r r e l a t i o n b e t w e e ni d - 1a n dm m p 一9w a sm o s ts i g n i f i c a n t i tw a ss u g g e s tt h a ti d 一1a n d i d 3i n v o l v e di nt h ef o r m a t i o no fb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r a n dt h e ya d j u s tt h e o v e re x p r e s s i o no fm m p - 9 ，t op r o v i d ec o n d i t i o nf o rt h ef o r m a t i o no fm e t a s - t a t i ct u m o r t h eo v e re x p r e s s i o no fm m p - 9 ，i d 一1 ，i d 一3p l a y e da l li m p o r t a n t b i o l o g i c a lf u n c t i o nf o rt h ef o r m a t i o no fb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r , a n dt h et h r e e p r o t e i n sh a d ar o l eo fs y n e r g i e sr e g u l a t o r y t h i sf i n d i n gm i g h tp u tf o r w a r dt h e m e c h a n js mo fb r a i nm e t a s t a s e s k e yw o r d s ：i d - l ；i d 一3 ；m m p - 9 ； b r a i nm e t a s t a t i ct u m o r ；i m m u n - o h i s t o c h e m i s t r y 4 研究论文 id - 1 、id - 3 和m m p 一9 在脑转移瘤中的表达和意义 _ 屿- 刖青 脑转移瘤是人体各系统肿瘤最严重的并发症，肿瘤患者死亡的主要原 因之一。随着全身肿瘤整体治疗水平的提高和患者生存期的延长，脑转移 瘤的发生率在不断升高，且有超过脑胶质瘤发病率的趋势。脑转移瘤患者 病情进展迅速，缺乏有效地治疗手段。，已成为恶性肿瘤患者提高生存期和 生活质量的瓶颈。目前对脑转移瘤的基础研究还很薄弱，有许多问题亟待 解决。 肿瘤转移始于肿瘤细胞间以及细胞基质间粘附作用的减弱，基质和基 底膜胶原成分被破坏，肿瘤细胞从原发部位脱落。m m p 9 在这一过程中 可以有效地降解基底膜的主要成分，破坏基底膜的完整性，为肿瘤的转移 创造条件。i d 蛋白是一类广泛表达于多种肿瘤细胞的转录调控因子。i d 1 被证实与肿瘤增殖、转移、新生血管的形成有密切联系，i d 1 的增高可促 进有转移倾向的肿瘤细胞分泌m m p 9 ，提高肿瘤的侵袭性和转移能力。 i d 一3 在肿瘤转移和侵袭性方面的作用与i d 。l 有部分重叠，二者可协同调节 肿瘤中新生血管的形成过程。目前国内外对消化道肿瘤、乳腺癌、前列腺 癌等组织中i d - 1 、i d 一3 、m m p 9 的表达做了大量研究，但尚未见三者在脑 转移瘤中的相关研究报道。 本研究拟通过免疫组化方法检测i d 1 、i d 3 、m m p 。9 蛋白在脑转移瘤 及原发病灶中的表达，探讨三者之间的相互作用关系，为明确脑转移瘤的 形成机制提供理论依据。 材料与方法 1 实验材料 1 1 临床病理资料 选取从2 0 0 4 年 - - - 2 0 1 0 年间，河北医科大学第四医院神经外科脑转移 瘤标本4 4 例，均为经手术切除取材，术后经河北医科大学第四医院病理 科诊断证实为脑转移瘤。自病理科存档标本获得患者相应原发灶肿瘤蜡块 研究论文 样本7 例。同时另取正常脑组织( 脑疝患者行内减压切除的正常脑组织) 标 本1o 例作对照。 1 1 1 一般情况( 详细资料见t a b l e l ) 患者年龄最大7 5 岁，最小2 6 岁，中位年龄4 4 岁，平均年龄 ( 5 4 4 5 + 1 0 5 0 ) 岁。其中男性2 7 侈t j ( 6 1 4 ) ，女性1 7f 萌j ( 3 8 6 ) 。 3 6 例经影像学检查或已行手术治疗证实原发灶部位，其中肺癌2 6 例， 食管癌3 例，贲门癌2 例，肾癌2 例，乳癌2 例，口咽癌1 例，其余8 例未找到原发灶。 脑转移瘤病理分型：腺癌2 3 例，小细胞癌8 例，鳞癌7 例，透明细 胞癌2 例，未分化癌2 例，血管内皮瘤1 例，肉瘤样癌1 例。 1 1 2 实验分组： 根据组织来源分为：脑转移瘤组，原发灶组，正常脑组织组。 根据原发灶的不同将脑转移瘤分为：肺癌来源组，肺外来源组，不明 来源组。 根据年龄、性别分为：6 0 岁组， 6 0 岁组；男性组，女性组。 1 2 主要实验仪器设备 石蜡包埋机( t i s s u e t e k ) ：日本s a k u r a 公司 组织切片机( r m 2 1 3 5 ) ：德国l e i c a 公司 摊片烤片机( c s v i ) ：孝感市宏业医用仪器有限公司 数显电热保温箱( 3 0 3 4 a ) ：上海阳光实验仪器有限公司 电热恒温培养箱：天津市中环实验电炉有限公司 常规冰箱：海尔公司 电磁炉：美的公司 不锈钢高压锅：潮安县顺发五金制品有限公司 微量振荡器：江苏金坛医疗仪器厂 光学显微镜：德国l e i c a 公司 显微照相系统：j v a 公司 其他仪器：1 m l e p 管、1 0 0 0 m l 烧杯、染色缸、湿化盒等。 1 3 主要免疫组织化学试剂 m m p 9 羊抗人单克隆抗体北京中杉金桥生物科技有限公司 i d 1 兔抗人多克隆抗体美国s a n t ac r u z 公司 研究论文 i d 3 兔抗人多克隆抗体 s p 试剂盒 d a b 显色试剂盒 1 4 主要试剂的配制 美国s p r i n g 公司 北京中杉金桥生物科技有限公司 北京中杉金桥生物科技有限公司 1 4 1o 1 mp b s ：n a 2 h p 0 43 0 9 ，n a i l 2 p 0 42 9 ，n a c l4 5 9 ，加蒸馏水5 0 0 0 m l ，混 匀，p h 值应在7 2 7 4 之间，若偏离此范围，用0 i n 的n a o h 调整。 1 4 2 甲醇h 2 0 2 溶液：取3 0 的h 2 0 2 2 0 m l 放入量筒内，加入无水甲醇18 0 m l ， 充分混匀。 1 4 3o 01m 枸橼酸盐抗原修复液( p h = 6 0 ) ：枸橼酸三钠3 9 ，枸橼酸o 4 9 ， 加蒸馏水1 0 0 0 m l 。 1 4 4e d t a 抗原修复液( p h = 8 o ) ：e d t a l o m l ，加蒸馏水1 9 0 m l 2 实验方法 2 1 载玻片及组织标本处理： 2 1 1 载玻片预处理： 2 1 1 1 室温下将新载玻片浸泡在含有洗涤液的自来水中，4 小时后，用大 量自来水冲洗，直至载玻片干净，放入9 0 烤箱烤干，放入硫酸一重铬 酸甲液中浸泡2 4 小时，从硫酸一重铬酸甲液中取出。 2 1 1 2 用大量自来水冲洗干净，蒸馏水泡洗两遍，每次泡3 0 分钟。 2 1 1 3 取出并泡在9 5 酒精内，最少泡2 小时，用高压消毒的绸布擦拭干 净，入4 0 烤箱内烤干。 2 1 1 4 将烤干的载玻片放入a p e s 丙酮防脱片工作液( a p e s 原液：丙酮 = 1 ：5 0 ) 中停留2 0 - - - 3 0 秒钟，取出后晾置片刻，再放入纯丙酮溶液中涮掉 未结合的a p e s ，置于通风橱中晾干，装盒备用。 2 1 2 标本处理：所用的标本均经4 多聚甲醛固定，梯度酒精脱水、浸蜡、 包埋，并制成4 9 m 厚的切片，置于经预处理的载玻片上，置6 0 温箱中 过夜，备免疫组织化学用。h e 切片：石蜡标本常规4 p , m 连续切片，放于 6 5 烤片机上2 小时，4 0 。c 烤箱过夜。 2 2 h e 染色及免疫组织化学染色步骤 2 2 1 h e 染色基本步骤 ( 1 ) 二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化后自来水冲洗2 分钟； ( 2 ) 苏木素染色5 分钟后自来水冲沈1 分钟； 研究论丈 ( 3 ) 盐酸酒精( 1 ) 分化2 0 秒钟； ( 4 ) 稀氨水( 1 ) 返蓝5 秒钟，自来水冲洗1 分钟； ( 5 ) 伊红染色3 分钟，自来水冲洗4 5 秒； ( 6 ) 梯度酒精水化；二甲苯透明，中性树胶封片。 2 2 2 免疫组织化学染色基本步骤( s - p 法) ( 1 ) 室温下石蜡切片常规脱蜡。梯度酒精水化：分别于1 0 0 、9 5 、8 0 和7 5 酒精室温下各浸泡5 分钟；自来水反复冲洗5 分钟、重复3 次( 5 x 3 ) ； p b s 冲洗3 3 。 ( 2 ) 根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复( a i d 1 ：切片置 于有枸橼酸盐抗原修复液( p h 6 o ) 的修复盒内，于压力锅中进行抗原修复， 从高压锅喷气开始计时，7 分钟后压力锅离开热源；b i d 3 ：切片置于有 枸橼酸盐抗原修复液( p h 6 o ) 的修复盒内，于压力锅中进行抗原修复，从 高压锅喷气开始计时，l o 分钟后压力锅离开热源；c m m p 9 ：切片置于 有e d t a 抗原修复液的修复盒内，于压力锅中进行抗原修复，从高压锅 喷气开始计时，l o 分钟后压力锅离开热源) ，室温冷却，将切片取出，p b s 冲洗3 3 。 ( 3 ) o 3 h 2 0 2 甲醇溶液室温下作用2 0 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活 性。其后用p b s 冲洗5 2 。 ( 4 ) 每张切片加5 0 “l1 0 山羊血清，放入湿盒中，3 7 温箱孵育4 5 分钟， 以封闭组织中非特异性抗原成分。 ( 5 ) 根据每一种抗体的要求，分别滴加相应稀释度的抗( a i d 1 以l ：1 0 0 的比例稀释兔抗人i d 1 免疫组化单克隆抗体b i d 3 以l 1 0 0 的比例稀释 兔抗人i d 。3 免疫组化单克隆抗体；c m m p 一9 以1 ：5 0 的比例稀释羊抗人 m m p 一9 免疫组化单克隆抗体) ，放入湿盒内，4 c 冰箱过夜。 ( 6 ) 第二天将湿盒自冰箱内取出，放至室温，p b s 液冲洗5 x 3 。 ( 7 ) 甩去p b s 液，每张切片加5 0 u l 二抗，室温下避光孵育3 0 分钟。 ( 8 ) 甩去p b s 液，每张切片加5 0 9 l 辣根酶标记链霉素卵白素工作液，室温 下孵育3 0 分钟，其后p b s 冲洗5 3 ( 9 ) 每张切片滴加5 0 山左右新鲜配置的二氨基苯联胺( d a b ) 溶液显色，镜 下观察显色反应，显色适度时蒸馏水终止反应，般5 8 分钟。 ( 1 0 ) 苏木素复染l m i n ，盐酸酒精分化，自来水冲洗返蓝1 0 m i n 。梯度酒精 研究论文 水化，二甲苯透明，中性树胶封片。 3 对照组设计 采用p b s 代替抗体作为免疫组化空白对照，结果阴性。采用已知的 乳腺癌组织切片作为对照，结果阳性。 4 结果判定 4 1 阳性标准 i d 1 和i d 3 的阳性细胞可见细胞核内棕褐色或棕黄色颗粒。m m p 9 的阳性细胞为胞浆中出现浅黄色至棕黄色的颗粒( 本实验中脑转移瘤样本 为胞浆及胞核均出显浅黄色至棕黄色的颗粒状免疫沉积物) 。 4 2 具体分级 判断标准：所有切片在显微镜下进行观察并采集放大1 0 0 倍及4 0 0 倍时图像，i d 。1 、i d 3 、m m p 9 阳性表达为细胞浆或细胞核内呈棕黄色颗 粒。每例脑转移瘤标本取1 0 个不同高倍视野，按阳性细胞所占的百分比 分为：( ) 无阳性细胞或阳性癌细胞数1 0 ；( + ) 1 0 阳性癌细胞数 2 5 ；( + + ) 2 5 5 0 t l l 。 4 3 观察方法 结果均由至少两位长期从事免疫组化实验的资深医生双盲法观察，先 在低倍镜下观察大体着色情况，再在4 0 0 倍高倍镜下随机选取1 0 个视野， 每个视野计数免疫反应阳性细胞数，取其平均值。 5 实验数据统计学处理 应用s p s s l 3 0 统计软件包，对计数资料采用f 检验，等级性相关性 检验采用斯皮尔曼( s p e a r m a n ) 等级相关分析。以铲o 0 5 为检验水准， 当p 0 0 5 ) ，表明两组表达无显著性差异；脑 转移瘤组与正常脑组织组i d 1 阳性率比较，有统计学意义( p = 0 0 0 0 ， p 0 0 5 ) ：原发灶组与正常脑组织组i d 。1 阳性率比较，有统计学意义 ( p = o 0 0 1 ，p o 0 5 ) ，表明两组表达无显著性差异；脑转移瘤组 与正常脑组织组i d 3 阳性率比较，有统计学意义( p = o 0 0 0 ，p 0 0 5 ) ；原 发灶组与正常脑组织组i d 3 阳性率比较，有统计学意义( p = 0 0 0 0 ， p 0 0 5 ) ，表明i d 3 在脑转移瘤及原发肿瘤中的表达显著高于正常脑组织。 2 3m m p 9 脑转移瘤组及原发灶组阳性率分别为8 1 8 ( 3 6 4 4 ) 和5 7 1 ( 4 7 ) ，正常脑组织m m p 9 中为阴性表达。脑转移瘤组与原发灶组m m p 9 阳性率比较，有统计学意义( p = o 0 0 0 ，p 0 0 5 ) ，i d 3 ( p = 0 4 8 4 ，p 0 0 5 ) ，m m p 一9 ( p = 0 2 2 5 ，p o 0 5 ) 。表明三者在不同原发灶组别中的表达无显著性差异。结果见 t a b l e 3 。 4 不同年龄、性别组别中i d 1 、i d 3 、m m p 9 的表达情况 对不同年龄组中三者阳性表达行统计分析，三者在不同年龄组别中的 表达差异均无统计学意义，i d 1 ( p = o 2 7 2 ，p 0 0 5 ) 、i d 3 ( p = o 3 7 5 ，p o 0 5 ) 、m m p 9 ( p = o 4 7 3 ，p 0 0 5 ) ；对于不同性别组中三者阳性表达 行统计分析，三者在不同年龄组别中的表达差异均无统计学意义， i d 1 研究论文 ( p = 0 3 0 2 ，p 0 0 5 ) 、i d 一3 ( p = 0 6 2 4 ，p 0 0 5 ) 、m m p 一9 ( p = 0 0 9 3 ，p o 0 5 ) 。表明，i d 1 、i d 3 、m m p 9 在不同年龄、性别的患者组织中的表 达情况无显著差异。( 结果见t a b l e 4 ) 5 在脑转移瘤组中i d 1 、i d 3 、m m p 9 表达情况的相关性分析 根据不同的染色强度分为阴性( ) 、弱阳性( + ) 、中阳性( + + ) 、强阳 性( + h ) 四个等级( 结果见t a b l e 2 ) ，运用s p e a r m a n 等级相关分析i d 1 、 i d 3 、m m p 9 三者在脑转移瘤中表达的相互关系，显示i d 1 与m m p 9 表 达呈显著正相关关系( y = o 3 8 6 ，p = 0 0 1 0 ，p 0 0 5 ) ，i d 3 与m m p 9 表达 呈正相关关系( y = o 3 0 6 ，p = 0 0 4 3 ，p 0 0 5 ) ，i d 1 和i d 3 表达呈正相关性 ( 1 ，= o 3 1 9 ，p = 0 0 3 5 ，p 0 0 5 ) 。( 具体数据见t a b l e 5 ，6 ，7 ) 6 本实验中三者在正常脑组织中均为阴性表达，但并不认为三者在正常脑 组织中不表达。原因有二，第一，依据本实验对阴性样本的认定，阴性结 果中包括阳性表达率1 0 的样本，并非均为无阳性表的样本；第二，分 化越完全的细胞中表达量越少，分化越差的细胞中表达量越高，此为三者 共同的表达特点。国外相关的研究文献中已有报道，分化抑制因子在人胚 胎脑组织中表达，但尚未发现其在成体人脑中表达的报道。 附 图 f i g 1b r a i nm e t a s t a t i ca d e n o c a r c i n o m a ( h e l o o ) f i g 2b r a j i lm e t 硒t a t i c 羽均| p l a s t i cc 锄_ c i n o m a ( h e 4 0 0 ) r 姆固 ：谤： 0 ：j ? j 嘎i ， 。盈 研究论文 f i g 3b r a i n m e t a s t a t i c 咖 ， 。口， 淘 a d e n o e a r c i n o m a ( h e x 4 0 0 ) ，： 0 封 声z 。 一? b 。 。“，增f k r m a lb r a i nt i s s u e ( h e x 4 0 0 ) 矿， 移豫 甲 “ 、t 颤警 l ：1 ， f i g 5p 。s i t i v ee x p r e s s i o n o fl d - 1i l l 鼬删i c s q 岫m 0 璐c c l l 黜砷唧h c 1 0 0 ) f i g 6p o s i t i v ee x p r e s s i o n o fi d olmb 砸 研究论文 汗o 万 匿_ t l 2 ；o 一0 溢- s q u a m o u s c e l lc a r c i n o m a ( i h c x 4 0 0 ) ! 呵节州中目镕：岬r 帮1 - _ _ 霹唧一+ 事”r g 暂 警 争 ! 。 气 f 参 t r 孝7 誓 塾 l 。k 。鼢龇蛾。 + 、 ；每 急戤。凇豳。酗潼。龇赫_ f i g 8p o s i t i v ee x p r e s s i o no f i d - 1i nn o r m a l b r a i nt i s s u e ( i h c x 4 0 0 ) 1 5 唐溪鼍l盈嚣疆甚曩翌。 研究论文 f i g 9p o s i t i v ee x p r e s s i o no f l d - 3i nb r a i n l a s t i cc a r c i n o m a ( i h c x 10 0 ) f i g 10p o s i t i v ee x p r e s s i o no f l d 0 3i nb r a i n l a s t i cc a r c m o m a ( i h cx 4 0 0 ) ! ：l ii 匕f f i 乙，1 ： i 一 ff 研究论文 i 妒_ i ，魏一一季 ：一 4 ，专 ，霉 ，魏 叠 。i j 黛铲。 二”0 0 7 j ，”驾 一 ”轳霾 曳 。 ； 。+ t 。赠 ： f 1 0 4 ： 、罩 j 溉彤i意 ： 、= ：。2 爹，0 心如。 。 ? 二二 r 。7 。、。节”? 。截“铲”8 “早j 。；9 甲邓嘴帑警”喇 p f i g 12p o s i t i v ee x p r e s s i o no f l d - 3i nn o r m a l b r a i nt i s s u e ( i h c x 4 0 0 ) 1 7 。_蟒，、dq盔可f马月f鸯ijnv0，张l镥囊童旧i建一 ，差 。 蜉 一 。 一 研究论文 芝：二：耋t：鼍f，铲0噻：+主f 蚕：三，驴三_i+0毒_兰二：一fj噻?；二!i二 f 气乙i 参，；i 二；4j j ，- 。二。_ 毫耄 曩：矿i 屯0 l 二k 。龇二2 k 乏矗睡二：。童k 2 0 羔i i 二0 f i g 13p o s i t i v ee x p r e s s i o no fm m p 一9i nb r a i n m e t a s t a t i ca d e n o e a r c i n o m a ( i h c xl0 0 ) f i g 14p o s i t i v ee x p r e s s i o no fm m p 一9i nb r a i nm e t a s t a t i c l o wd i f f e r e n t i a t e ds q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a ( i h cx10 0 ) 1 8 理。毒 ：，漂尊捌叫；。 一， 囊 。 ： “ ；_ 一； 崦 一 ， 眦 。 瞥 、 逝 耋 、 “ 7 k _。 ，一 峰 。 鲰k m 箩 。 罐 v 屯 ， 一 ： 一 研究论文 獭嘭舅霹阿葛一飞 。 l 气 f i g 15p o s i t i v ee x p r e s s i o no fm m p 一9i nb r a i n m e t a s t a t i cs m a l lc e l lc a r c i n o m a ( i h cx 4 0 0 ) 。肾。滞崎啊傅妒哿审q 啊曙脚 。8 “。” 砑 ； 。i s 皇 j 蒿 f i g 16p o s i t i v ee x p r e s s i o no f m m p - 9i n n o r m a lb r a i nt i s s u e ( i h c x 4 0 0 ) 1 9 龌 ， 和 ，嘶 0 k ， 魄一 一，t譬e醚，kr黔f。簟k po；。 研究论文 一b r a i n m e t a s t a t i c t u m o r p r i m a r y t u m o r n o r m a l b r a i n t i s s u e f i g 17t h ee x p r e s s i o no fi d - i ，i d - 3a n dm m p 一9 i nb r a i nm e t a s t a t i ct u m o r g r o u pa n dc o n t r a s tg r o u p ( p 0 0 5 ) 研究论文 附表 t a b l elb r a i nm e t a s t a s e sp a t i e n t s c l i n i c a la n d p a t h o l o g i c a lm a t e r i a l 编号性别年龄部位组织学类型 左顶叶 左额顶 右枕叶 小脑蚓部 双枕叶 右枕叶 右小脑 左额叶 右额顶 左额顶 左颞叶 右顶叶 左侧小脑 右颞枕 右顶叶 右颞顶 右颞顶 左枕叶 左顶叶 右顶叶 右颞顶 左额叶 右颞叶 右枕项 右枕 左顶叶 左枕顶 肺棘腺细胞癌转移至脑 转移性腺样囊性癌结节 腺癌转移至脑 腺癌转移至脑 脑内转移性低分化癌 转移性腺癌 转移性低分化腺癌 转移性腺癌 转移性小细胞癌 透明细胞癌 低分化鳞状细胞癌脑转移 腺棘细胞癌转移至脑 小细胞癌脑转移 粘液腺癌 低分化腺癌转移至脑 腺癌侵犯脑组织 转移性小细胞癌 转移性低分化腺癌 乳头状腺癌 转移性腺癌 恶性乳头状血管内皮瘤 鳞状细胞癌转移至脑 腺癌转移至脑 转移性未分化癌 透明细胞癌 肉瘤样癌转移至脑 低分化腺癌 够拍钙弱卯舛锯钉刀钌勰钞强田甜的鼹钇饥约镉郇如 女女男女男男女男男男男男女男女女男男女女男男男男女男女 o 1 2 3 4 5 6 7 8 9圯眨塑丛登x 2 3 4 5 6 7 8 9 m n 抡b mm掩侈加俎毖拐m弱拍卯 研究论文 颅底 左顶枕 左顶叶 左颞枕 左顶枕 右项叶 左枕叶 右额顶 左额顶 左额叶 右颞项 右颞叶 左额