猪用加味玉屏风缓释微丸薄层鉴别方法的研究.doc

猪用加味玉屏风缓释微丸薄层鉴别方法的研究 尚磊，梁立，孟妍，单寅鑫? （黑龙江职业学院150080） 摘要：建立猪用加味玉屏风缓释微丸的质量控制标准。采用薄层色谱法对猪用加味玉屏风缓释微丸中的黄芪、防风、金银花三味药材进行了定性鉴别。在薄层层析色谱中均能检出黄芪、防风、金银花，且斑点清晰、阴性无干扰。结论该方法简便、准确、可靠，可用于猪用加味玉屏风缓释微丸的质量控制。? 关键词：猪用加味玉屏风缓释微丸；质量控制；薄层色谱法；定性鉴别 作者简介：尚磊（1982-），女，讲师，硕士研究生，主要从事药剂学、中药学方面的研究工作。? 基金项目：黑龙江省教育厅xx年度科学技术研究（指导）项目：猪用加味玉屏风缓释微丸的研制和药效学研究（125xx5）。 猪用加味玉屏风缓释微丸是以中医经方玉屏风散为基础，加入金银花、蒲公英等药材而研制成的新型中药复方缓释微丸制剂。该制剂具有杀菌抑菌、调节机体的免疫机能以及非特异性抗菌的作用，能显著提高猪对常见传染病的抗病力。为控制猪用加味玉屏风缓释微丸的质量，本文采用薄层色谱法（TLC法）对该制剂中的黄芪、防风、金银花三味药材进行了定性鉴别，从而为控制猪用加味玉屏风缓释微丸的内在质量提供了依据。试验方法如下。? 1仪器与试药? 仪器：AGB5型十万分之一电子天平（METTLERTOLEVO公司），电热恒温水浴锅（天津泰斯特有限公司），DHG一9030A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司），KQ5200B型超声波振荡器（昆山超声仪器公司），WFH-201B型紫外透射反射仪（上海精科）。? 试药：黄芪甲苷对照品、防风对照药材、金银花对照药材、绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院），猪用加味玉屏风缓释微丸（黑龙江职业学院药物制剂室），硅胶G薄层预制板（青岛海洋化工厂），所用试剂均为分析纯（天津津东天正）。? 2薄层色谱鉴别? 2.1黄芪的TLC鉴别? 取本品10g，研细，加正丁醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液加1%氢氧化钠溶液洗涤3次，每次15mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺黄芪的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（xx版中国药典一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液及阴性对照溶液各15l、对照品溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的棕褐色斑点，阴性无干扰。见图1。 2.2防风的TLC鉴别? 取本品10g，研细，加水40mL使溶解，滤过，滤液用石油醚（3060）振摇提取2次（25mL、20mL），合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材2g，加水250mL，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约10mL，加乙醇30mL振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚（3060）振摇提取2次（25mL、20mL），合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再按处方比例，取缺防风的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（xx版中国药典一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液及阴性对照溶液各10l、对照药材2l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯（1：1）为展开剂?1?，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。见图2。 2.3金银花的TLC鉴别? 取本品10g，研细，将其置于索氏提取器中，加甲醇30mL回流提取小时，取甲醇提取液，回收甲醇，定容为5mL，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。 另取金银花对照药材粉末0.2g，加甲醇5mL，放置12小时，滤过，滤液作为对照药材溶液。再按处方比例，取缺金银花的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（xx版中国药典一部附录VIB）试验，吸取上述四种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7：4：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝绿色荧光斑点，阴性无干扰。见图3。 3讨论与小结? 猪用加味玉屏风缓释微丸的君药为黄芪，黄芪主要有效成分黄芪甲苷常作为黄芪原药材及含黄芪制剂的质量控制的指标成分。但因为本品为中药复方制剂，化学成分较为复杂，直接测定干扰成分多，故本试验采用碱试液洗涤处理样品，可有效减少干扰，且分离度较好。近代药理研究显示，金银花是一种作用很强的广谱抗菌中药，其提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌率可达90%，对大肠杆菌亦有50%的抑菌效果?2?，金银花的主要成分是绿原酸，故本试验选取绿原酸作为对照品进行薄层鉴别。本研究采