检测原理和误差分析PPT课件.ppt

HISCL检测原理和误差分析,1,主要内容,一、HISCL检测原理,二、常见误差分析,三、常见结果报告问题,2,主要内容,一、HISCL检测原理,二、常见误差分析,3,HISCL-2000i,HISCL-800,HISCL-5000,HISCL 系列仪器,共通的检测原理、检测试剂，确保结果的一致性,4,HISCL-5000 的反应原理,HISCL-5000使用化学发光酶免疫测定法来定量测定或定性测定样本中的微量蛋白质和激素等。 将样本和试剂混匀并加温，使其发生免疫反应，然后发生酶反应。 通过计数酶反应中发出的光子 （光子计数），测定或检出样本中的微量蛋白质和激素等。 HISCL-5000采用碱性磷酸酶作为催化剂，并采用显示出很强发光强度的CDP-Star作为化学发光基质，来获得高敏感度。 通过已知浓度的校准品进行校准绘制曲线，可以得出样本的浓度数值。,5,化学发光酶免疫测定方法如下,HISCL-5000 的反应原理,6,HISCL-5000 的测定方法,R1试剂,样本,孵育,R2试剂,孵育,1次脱磁清洗,R3试剂,2次脱磁清洗,孵育,R4试剂,R5试剂,检测,2STEP法,孵育,孵育,7,HISCL-5000 的测定方法,R1试剂,样本,孵育,R2试剂,孵育,脱磁清洗,孵育,R4试剂,R5试剂,检测,1STEP法,孵育,8,HISCL-5000 的测定方法,R1试剂,样本,孵育,R2试剂,孵育,R3试剂,脱磁清洗,孵育,R4试剂,R5试剂,检测,D-1STEP法,孵育,孵育,9,HBsAg反应原理,5min,10min,15min,0min,下面以HBsAg 为例介绍一下检测原理,10,结果的计算,校准曲线表示浓度和光子数之间的关系，通过测定已知浓度的样本，从获得 的光量子数值近似做成，通过曲线的建立，测定样本的光量子数值可由曲线 计算得出其浓度。,11,TP项目的反应原理,12,主要内容,一、HISCL检测原理,二、常见误差分析,三、常见结果报告问题,13,1、分析思路,1.质控结果,OK,排除仪器或试剂的问题,观察报警信息提示与样本状态,确认试剂状态,确认质控品状态,是否过效期? 是否分装使用？ 是否合理储存？ 是否规范操作？,是否过期? 是否存在质量问题？（观察外观、包装、储存等） 是否更换试剂？ 试剂更换时操作是否规范？（R2是否混匀充分）,有问题,确认仪器状态,仪器重复性是否好?（B/F清洗分离的抓手是否有问题） 根据报警信息提示处理？ 样本针移动的轨迹下盖板上是否有血迹？ 硬件故障,确认标准曲线状态,OK,异常,确认定标品状态,是否过效期 开瓶时间是否过长？ 是否合理储存 是否操作规范,确认试剂状态,确认仪器状态,2、单个出现还是批量出现,单个,确认样本状态,批量,确认仪器或试剂状态,3、排除操作的因素,人为因素,操作不当、保存不当、运输不当,样本状态,量少、离心不充分、存在干扰,14,2、规范离心的重要性,规范的离心，对于结果的准确性有着重要的意义。,15,3、定标CV值过大问题,一家新用户的装机培训中，定标发现某些项目的定标的CV值偏大， 重新校准后依然有的问题存在，不固定的存在于某一点。,后经过查找原因，客户装机后一个月的时间没有使用机器，长时间放置， 管路产生了结晶，后经过多次的管路冲洗，灌注后，重新进行了校准，问 题解决。当然还有可能B/F抓手问题造成重复性不好。,16,4、HBsAg检测结果0.01数据增多,接客户电话，告知近期的HBsAg的项目检测数值多出现0.01的结果， 后经过远程连线，进行问题的处理。,17,4、HBsAg检测结果0.01数据增多,查看定标曲线，没发现数值明显的异常，但是发现这是一个Correct 的曲线，证明这个期间可能更换过了不同批号的R4/5试剂。,怀疑由于R4/5的更换，曲线自动补正，出现了偏差，要求用户重新 使用校准品定标后，最后确认问题解决。 R4/5更换批号一般会自动补正，但是当结果异常时后，则需要重新校准,18,5、R4/5试剂未排除,日常工作中，经常会有客户反应项目报警R4/5未排出，针对这个问题 有两方面的情况： 1、单个项目报警R4/5未排出，多源于R2试剂的混匀问题，针对此问题 可以重新的摇匀试剂后，都可以解决。 2、如果是多个项目报警，可能原因是R4/5试剂问题或者是仪器R4/5的 排液阀出现了问题，需要工程师排查管路维修。,为减少第一种原因的报警 所以要求我们在客户的培 训中，要强调试剂混匀的 重要性。,19,6、室间质评问题,某客户反馈我司HISCL检测省临检中心室间质评HIV结果漏检，该如何给客户解释？,分析： 1、HISCL的HIV试剂是四代试剂，所检测的是P24抗原、HIV-1型的gp41、HIV-2型的gp36片段，以及HIV-O型，HISCL早期的敏感性主要来源于p24抗原。 2、室间质评的阳性标本全部来源于阳性物质的稀释配比得出，因为不同厂家的试剂生产过程中包被的抗体片段存在这差异，所以会出现结果不同的情况。,20,6、室间质评问题,3、正常的人体血清当中含有不同的抗体片段，而稀释血清的样本由于稀释，会出现gp41抗体稀释过度无法检测的问题。 4、李金明主任也明确表示过，室间质评的样本只适合于抗体试剂，第四代的抗原抗体联合试剂不适合参加室间质评，可以通过实验室间的比对来保证准确性,并传递告知涵。 5、即使不同的厂家采用的片段相同，也会存在包被片段量的问题，所以室间质评的结果不能反映试剂的真正敏感性。HISCL的HIV试剂对于原倍的血清样本检测也不存在漏检问题，望大家放心使用。,21,6、室间质评问题,22,7、未及时校准结果的处理过程,正常使用仪器的过程中，某一项目没有及时校准或是校准后没有验证，所做 的结果会以“xxxxx.xx”的形式显示，这时可以重新校准或是验证曲线，检 测质控，在控后，选中所有结果，首先要取消验证，然后重新计算，即可 得到准确的结果。,23,8、校准过程中常见问题,定标过程中如遇到两个批号同时存在的情况，申请定标信息的时候需要注意， 选择你要定标的试剂批号，不然他会默认在用批号的试剂，到时出现定标错 误的情况！ 相同对于定标液的选择也是一样，选择在用批号的校准品！,24,过期校准品批号删除,首先进入设定界面，找到402 Calibrator批量输入，点击“设定”进入。,25,过期校准品批号删除,找到相应的项目后，点击“编辑”将在用的定标液优先；或是直接 将已经用完的校准液的批号删除！ 减少定标过程中的干扰！,26,9、质控更换批号的常见问题,如果跟换新的批号质控品，注册和输入靶值后，会出现质控图中同时存在新老批号的质控图的情况，看上去很乱，可按照以下步骤处理:,27,不用质控图的隐藏,首先进入“设定”找到404质控物批量输入，点击“设定”后进入,28,不用质控图的隐藏,选择已经用完的质控批号，点击“编辑”进入，不建议直接删除已经使用 完的批号！,29,10、耗材更换注意事项,吸头和杯子更换过程中，不可用手直接接触吸头和杯子，以免污染造成假性结果！,注意洗液更换过程中记得扫码，尤其需要注意的是Probe washing，更换后 要将洗液复原其位置，才可允许进行扫码！,30,及时更换洗液耗材，如果没有及时更换，会出现仪器的停机！ 例：如LINE Washing其中一箱用完以后，没有及时更换，另外一箱使用到出 现变为黄色的图标的时候，仪器就会出于自我保护，而不再进行加样，更换后 可继续检测！ 推荐安装LU-10，浓缩试剂系统！,31,主要内容,一、HISCL检测原理,二、常见误差分析,三、常见结果报告问题,32,1、乙肝的血清学HBsAg/Anti-HBs同时阳性,大多数慢性HBV感染者，患者体内存在HBsAg/抗 HBs免疫复合物 两种 HBV 亚型感染，不同亚型产生表面抗原和表面 抗体 IFN 治疗出现抗HBs 血清转换 免疫逃逸变异株 检测试剂灵敏度和特异性改善,33,2、HBeAg/HBeAb同时阳性,HBV 感染转归和恢复 试剂灵敏度提高 抗原抗体复合物 主动和被动免疫 药物治疗 种族差异 免疫缺陷或耐受,34,针对于客户提出的异常血清学模式的问题，多来源与酶联转发光 用户，对于经常容易出现的1、2、4、5阳性结果及其1、3、4、5 阳性的结果，不知道如何解释？ 目前常见的乙肝血清学模式当中包含有其所产生疑问的模式，由于 发光试剂等各方面性能的改变，这类结果并不属于不可能存在的； 以下有一篇论文可以提供很好的证据证明：,以上论文可知，对于1、3、4、5以及1、2、4、5和1、2、3、5异常模式 临床上会经常的出现，并非并不能存在！,35,3、乙肝五项模式,36,37,38,4、HBsAg弱阳性结果报告,39,弱反应性结果的处理建议,建立进一步的检测程序： 1）样本的重复检测（建议10000转的高速离心） 2）第二份标本的检测 3）数周或数月后采取样本检测 4）根据临床情况进行综合判断，报告加备注。,40,5、HBcAb核心抗体阳性率问题,在日常的工作工程当中，有些用户会提出发光产品HBcAb结果的 阳性率要普遍的高于酶联免疫的方法，针对这个问题有以下解释：,希森美康HBcAb反应原理：,41,希森美康的HBcAb采用的是2步夹心的原理，定性的检测人体血液当中的 核心抗体，相对于酶联免疫的竞争法有了较好灵敏度和特异性；,42,希森美康的Anti-HBc采用的是原倍检测人体血清和血浆的中抗体成分，而酶联免疫方法则是采用的一种普遍的观念1:30稀释，来降低阳性率；,摘自：关于我院乙型肝炎核心抗体检测阳性率的情况分析 郑州大学第一附属医院 -,43,此为国内一大型三级医院关于术前项目的论文，可以看出HBcAb的阳性 率大约在45.83%左右。,44,6、HCVAb初筛弱反应性的问题,2004 HCV audio web conference, Dr.ER Schiff, Miami University, Florida,Persistent Case: 70%,Cured Case: 30%,急性HCV感染被完全治愈,急性HCV感染转为慢性感染,HCV感染的两种临床结果（血清学模式）：,45,46,美国CDC给出了强生和雅培 的HCVAb关于标本的检测结 果95%真阳性的一个灰区结 范围。,我们在北京妇产医院做的 评估数据，HCV10 COI 的结果真阳性率在95.7%,47,弱反应性标本处理建议,建立进一步的检测程序： 1）样本的重复检测（建议10000转的高速离心） 2）第二份标本的检测 3）数周或数月后采取样本检测 4）使用更灵敏特异方法检测（核酸检测、HCV Ag）或确认方法检测（中和试验、蛋白印迹、其他标志物）,48,备注：建议临床3个月后 复检或采 用其他方法学 RNA或 用 HCV Ag 复检。 为了避免漏检建议0.5以上结果，备注：建议随访或加做RNA！,参考：目前在一些大型的医院都是 采用这种报告方式,49,7、梅毒弱反应性结果问题,梅毒感染的抗体应答,50,梅毒常见检测方法,非特异性：VDRL , RPR , 特异性：TPHA, TPPA , FTA-Abs, ELISA , CLEIA,Sysmex HISCL5000检测TPAb,51,检测方法的总结,52,梅毒筛查流程,MMWR Discordant Results from Reverse Sequence Syphilis Screening Five Laboratories, United States, 20062010 CDC Morbidity and Mortality Weekly Report 2011，60（5）,53,梅毒的结果解释,检测结果阳性，临床无症状和体征，否认感染史的人群，可能存在 隐性感染和既 往感染，少数存在非特异性抗体干扰，如老年人群。 对于检测结果阴性，承认有高危性行为的人群，建议随访复查。,54,大医院使用发光筛查的经验,阳性： COI1,阴性 COI1,报阴性,加做RPR,RPR +，TPPA+，报阳性,和TPPA,RPR -，TPPA-， 随访,RPR -，TPPA+， 报阳性,RPR +，TPPA-， 随访或治疗性诊断,化学反光,为避免漏检和临床疑问，我们厂家建议0.5以上参照流程,55,8、HIV结果报告问题,感染早期，在HIV抗体产生之前就可以检出HIV p24抗原。HIV抗原/抗体(Ag/Ab)联检检出HIV感染的时间比HIV抗体检测早3-5天,56,HISCL的HIV试剂设计,R1试剂,R2试剂,R3试剂,生物素化抗HIV-1 p24 IgG抗体 （人单克隆抗体）,HIV抗原固相化磁性粒子 HIV-1 gp41(rec) HIV-1 gp41(pep) HIV-2 gp36(pep) HIV-1 sub.O(pep),ALP标记的HIV抗原 HIV-1 gp41(rec) HIV-1 gp41(pep) HIV-2 gp36(pep) HIV-1 sub.O(pep),HIV抗原,Streptavidin（STA） 链霉素,ALP,Biotin 生物素,HIV-1p24抗原 HIV-1抗体 HIV-2抗体,包括O组,采用人单克隆抗体 抗体-p24抗原-抗体夹心法 抗原-抗体-抗原双抗原夹心法, 可检测出IgM,57,HIV化学发光假阳性问题分析,58,由上述两篇论文可以看出，不管是任何厂家的化学发光，都会存在假阳性的问题 ，干扰因素来源于多个方面，比如恶性肿瘤患者，心血管疾病、透析、自身免疫疾 病、妊娠等等； 所以对于检测阳性的结果，要结合临床的方面极其流行病学综合