小鼠脑原位模型建立简介-陶冶.ppt

1,小鼠脑原位模型建立和其他文献分享,陶冶 2019-05-22,2,背景简介,3,手术方法,实验器材和用具：手术刀， 1%戊巴比妥钠，定位仪，微量注射泵，颅骨钻、酒精，双氧水，棉签，镊子，U87-MG-LUC细胞，3M组织胶，电热毯,4,手术方法,1%戊巴比妥钠(85.7mg/公斤)将小鼠麻醉; 将其头部固定于定位仪上，上颚牙齿挂到定位仪上，旋动头部螺旋使其刚好压住老鼠的鼻子，将两侧小棒插入到小鼠双耳中，约7格,使其头部稳定,5,手术方法,消毒，碘酒擦拭，然后用酒精擦，共三遍； 用手术刀从头部中央划开一个小口，用镊子剪将伤口剪大； 用伤口夹将伤口处皮肤拉向两侧，3%的双氧水将筋膜去除，找到脑骨中线偏右侧2mm附近定点。,6,手术方法,电钻打孔； 注射：抽取5L 浓度为0.2x105的U87-MG-LUC细胞 将微量注射泵固定于定位仪上，小心将针头下降至头颅钻孔水平面，插入2.5mm，马上回退0.5mm，使得颅内保持有空腔方便细胞的吸收。注射速度为1L/min,7,手术方法,细胞注射完后，要将其静止3分钟后，慢慢将针头退出,以便病毒很好的被吸收 用捏子将伤口两侧皮肤扯到一块，用3M组织胶粘合伤口，敷上抗生素，将小鼠放在热毯上，便于苏醒；.,8,实验结果,可见光活体成像技术主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP, Cyt及dyes等）进行标记。利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据, 得到多个时间点的实验结果。相比之下，可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据更加真实可信。另外, 这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法, 非常安全。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点,9,多种肿瘤模型小鼠上的实验结果显示，靶向该调控因子的特异性抑制剂不仅可以减缓肿瘤生长，与免疫检查点抑制剂联合使用还能帮助消除肿瘤。中性粒细胞是人体内数量最多的一类白细胞，正常情况下在对抗感染时冲锋陷阵。然而在癌症等病理条件下，有些中性粒细胞被肿瘤“带坏”，转变为髓源抑制细胞（MDSC），包括多形核粒细胞性髓源抑制细胞（PMN-MDSC）。这种免疫抑制细胞非但不能发挥杀敌作用，还会直接抑制免疫系统的攻击力，促进肿瘤进展和转移，是造成肿瘤患者预后不理想的重要原因之一。 他与同事们注意到，无论是从肿瘤模型小鼠还是肿瘤患者体内分离出的PMN-MDSC中，脂肪酸转运蛋白家族（FATP）中的FATP2表达水平显著增高。这对免疫抑制细胞有什么影响呢？,顾名思义，脂肪酸转运蛋白的一个重要作用是帮助脂肪分子穿过细胞膜。在酵母中发现，FATP2可以激活脂肪酸并将其带进细胞内。然后，脂肪酸在细胞内经过代谢或嵌入细胞膜。“就像细胞膜上有一扇控制脂质进入的闸门，你转动这扇闸门，就可以影响它的下游。”这扇门在代谢系统中发挥至关重要的作用。 而在免疫抑制细胞PMN-MDSC中，研究人员发现，过量表达的FATP2为细胞打开了更多的脂肪酸摄入之门，导致了细胞内脂质的积累，包括花生四烯酸（AA）。而花生四烯酸的增多及其下游产物的合成对PMN-MDSC的抑制活性起到重要作用。 既然如此，如果堵住FATP2这道门，是不是可以帮助PMN-MDSC解除抑制？当把肿瘤细胞注射进敲除了FATP2基因的小鼠体内，研究人员发现肿瘤细胞的生长速度明显慢于野生型小鼠，这一结果提示研究人员，调控FATP2或许可以达到抑制肿瘤生长的效果。,发现了一种有效抑制FATP2的化合物lipofermata，可以消除培养组织中的脂肪堆积，并在小鼠体内显著减少脂肪吸收。 这次，研究人员试着将lipofermata注射到肿瘤小鼠体内。几周以后，他们欣喜地发现，这种小分子抑制剂可以起到显著减缓肿瘤生长的作用，并且这一效果在淋巴瘤、肺癌、结肠癌和胰腺癌四种不同的肿瘤模型小鼠中都得到了重复。“独特之处，也是令人兴奋之处在于，这种方法不只是针对某一种癌症，”DiRusso教授说：“能靶向不同癌症中普遍存在的某些细胞是特别令人期待的。” 更值得注意的是，科学