抚顺地区银杏叶营养成分的测定及评价.doc

抚顺地区银杏叶营养成分的测定及评价朱婉迪抚顺师范高等专科学校生化系05园艺技术 113006摘 要：本文运用2，6二氯酚靛酚滴定法、紫外吸收法、蒽酮法分别测定了抚顺地区银杏叶中维生素C，蛋白质，可溶性糖的含量。测得的结果与南方地区银杏叶营养成分进行比较，为研究、开发抚顺地区银杏叶提供参考资料。关键词：银杏叶 VC 蛋白质 可溶性糖 测定中图分类：O 657 文献标识码：A1 银杏叶概述1.1 银杏叶资源与成分银杏（GinkgoLilobaL.）银杏科，银杏属，俗称白果，公孙树。最早出现于3.45亿年前的石炭纪，曾广泛分布于北半球的欧、亚、美洲，与动物界的恐龙一样称王称霸于世。至50万年前，发生了第四纪冰川运动，地球突然变冷，绝大多数银杏类植物濒于绝种，唯有我国自然条件优越，才奇迹般的保存下来。所以，科学家称它为“活化石”，“植物界的熊猫”。目前，浙江天目山、湖北大别山、神农架等地都有野生、半野生状态的银杏群落，毫无疑问， 银杏叶也具有重要的药用价值。到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达160余种，主要有黄酮类、萜类、酚类、生物碱、聚异戊烯、奎宁酸、亚油酸、蟒草酸、抗坏血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。1.2 银杏叶应用现状中国科学院植物所等单位于60年代用银杏叶研制出舒血宁针剂，经试验对冠心病、心绞痛、脑血管疾病有一定的疗效1 唐中贤, 银杏资源市场调研J中医药临床杂志 , 2004,(05)。利用银杏果叶的有效化学成分和特殊医药保健作用加工生产保健食品，药物和化妆品，正引起国内外研究、开发、生产单位的重视，各国众多企业竞相研制生产以银杏为原料的天然绿色产品，替代对人体健康有较大副作用的合成化学品，从而为中国的银杏资源的开发利用开辟了无比广阔的前景，迅速提高了银杏的利用价值及其对经济、社会和生态的影响，为社会创造了就业和财富，为人类带来了健康和长寿。银杏叶中VC、VE、胡萝卜素及钙、磷、硼、硒等矿物元素含量也十分丰富，超过一般水果蔬菜及可食植物原料。生物抗氧化剂是机体内直接和间接的具有抗氧化功能的一类物质。在银杏叶中含有两类抗氧化剂-营养性抗氧化剂及非营养性抗氧化剂。前者主要有胡萝卜素、VC、VE、硒、锌、铜等,后者主要有银杏黄酮、萜内酯、儿茶素、多酚类等，含量也十分丰富，它们在保护机体不受自由基所致的氧化损伤方面具有十重要的作用。因此，银杏叶集营养、保健、治疗功能为一体，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。目前，在国家重点主持的具有知识产权的创新药物研究中，杏灵的银杏叶制剂杏灵颗粒取得了重大的进展：率先在国际上提出“用复合成分开发单一植物原”和“溶剂提取原理的修正”的开发银杏产业全新理论；摒弃德国传统的溶剂提取理论，独辟蹊径，采用两种高分子物料“双重吸附、双重去除”，使银杏制剂的明确有效成分比例在德国著名同类产品30%基础上，增加到了50%；独创银杏酸控制及检测技术，使国内银杏制剂含量标准产生变革与升华，保证了现代中药的安全性由于对心脑血管疾病确切的疗效，银杏叶制剂多年来一直在欧美天然药物制剂的销售排行榜中保持首位2 吴立明. 银杏叶研究应用进展J. 中国中医药信息杂志 , 1995,(12)。而其中“龙头老大”的地位，又长久以来为掌握着银杏叶提取物专利的德国Schwabe公司占有，它在国际银杏叶市场的年销售额在10亿美元以上。1.3 银杏叶开发前景随着银杏种植业的发展，国内外各类银杏加工企业迅速崛起。1996年，美国AIM 公司开发了活性银杏提取物，并申请了美国专利。尽管欧洲和北美诸国在深加工方面的技术居世界领先地位，但是由于资源缺乏，其发展还是受到了制约。事实上，GBE及其附属产品的经济效益十分惊人3 季大洪,. 银杏叶主要活性成分及含量测定方法研究J. 中国中医药科技 , 2000,(04)。据测算，银杏干叶、粗提取物、药制品的附加值之比约为1：5：100。我国目前可年产优质银杏干叶2万t，若加工成质量合格的终端产品，则可创利200多亿元。同时，保健型银杏叶饲料添加剂应用前景十分广阔，这将成为银杏叶利用的新的增长点。 我国有着得天独厚的银杏叶优势，但是我国银杏叶高附加值产品开发不够，银杏叶提取物生产线多用于药品研制单位，在银杏叶产品的开发上，我们应坚持“全面开发，重点发展”的方针，我国银杏叶产品的开发目前仍处于初始阶段，也就是说银杏叶产品开发刚刚起步，有些还是空白，如银杏叶酒、银杏叶饮料、银杏叶保健品、银杏叶口香糖、银杏叶粉、银杏叶化妆品、银杏叶药枕、银杏叶生物农药等等都还是一片空白。如果这些产品开发起来，显然会消耗大量的银杏叶，也会相应的进一步带动银杏种植业的发展。我国银杏叶产品的开发决不是“过热”而是刚开始加温，因此，我国银杏叶产品的开发还蕴藏着巨大的潜力。2 银杏叶成分测定方法2.1 方法简介2.1.1 Vc测定方法1荧光法原理：样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后，与临苯二胺反应生成有荧光的喹喔啉。在一定条件下，喹喔啉之荧光强度与脱氢抗坏血酸浓度成正比，以此测定植物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。22，6二氯酚靛酚滴定法原理：还原型抗坏血酸可以还原染料2，6二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。32，4二硝基苯法原理：总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，然后与2，4二硝基苯肼作用生成红色的脎。脎在浓硫酸的脱水作用下，可转变为橘红色的无水化合物双2，4二硝基苯，在硫酸溶液中显色稳定，最大吸收波长为520nm，吸光度与总抗坏血酸含量成正比，故可进行比色测定。2.1.2蛋白质测定方法1紫外吸收法原理：由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质溶液在280nm处具有紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度呈正比关系，因此利用这一性质可测定0.11.0mg/mL的蛋白质溶液。2双缩脲法原理：将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨形成双缩脲。双缩脲在碱性溶液中与CU2+结合生成紫色络合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。3 凯氏定氮法原理：样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨，并与硫酸结合成硫酸铵。后加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸溶液吸收后再以标准盐酸溶液滴定。2.1.3可溶性糖的测定方法1蒽酮法原理：由于糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛或羟甲基糠醛，可与蒽酮反应，可产生蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，其颜色的深浅与含糖量的高低成正相关。该颜色在可见光区的最大吸收峰为620nm波长。利用这一特性进行比色测定。2 斐林试剂置换法原理：斐林试剂是氧化剂，最基本的组成由甲（硫酸铜）、乙（氢氧化钠和酒石酸钾钠）两液混合而成。甲乙液混合时硫酸铜与氢氧化钠作用生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，生成的氢氧化铜沉淀在碱性溶液中与酒石酸钾钠反应生成可溶性的复杂化合物（酒石酸钾钠铜）。3 3，5二硝基水杨酸法原理：3，5二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物。在一定范围内，还原糖的含量和棕红色物的颜色深浅程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度值，便可求出样品中还原糖的含量。2.2 方法选择Vc测定选择2，6二氯酚靛酚滴定法；蛋白质测定选择紫外吸收法；可溶性糖测定选择蒽酮法。这三种方法都是根据本系实验条件结合实验方法选择出来的最简单、易行的操作。3实验部分3.1试剂及仪器3.1.1试剂蒽酮试剂、0.1mol/LPH7.0磷酸缓冲液、样品蛋白溶液、100/mL标准葡萄糖溶液、1%草酸溶液、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液、0.1mg/ml标准抗坏血酸溶液、1%HCL溶液3.1.2 仪器紫外分光光度计、离心机、1.5cm15cm试管、5.0mL刻度试管、721分光光度计、天平、恒温水浴锅、定量滤纸、坐标纸、25200mm大试管、50mL三角瓶、100mL容量瓶、移液管、电子分析天平、容量瓶、2ml微量滴定管、吸管、3.2 实验方法3.2.1维生素C含量的测定4 张沙艳.园艺检测综合实训教程.吉林大学出版社.2005，23.2.1.1样品的提取 用水洗净，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20.0g，加2%草酸100mL置于砚钵中磨成浆状。称取浆状物5.0g，倒入50mL容量瓶以2%草酸溶液稀释至刻度。静置10min。过滤（最初数毫升滤液弃丢）。滤液备用。3.2.1.2 滴定（1）标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0mL置100mL锥形瓶中,加9mL1%草酸，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s即为终/点。由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少mg抗坏血酸。（2）样液滴定准确吸取滤液两份，每份10.0mL分别放入两个100mL锥形瓶内，方法同前。3.2.1.3结果处理 V滴定时所用去染料体积数T每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数m010mL样液相当于含样品之质量数m100g样品中含抗坏血酸的质量样液1样液2V （mL）10.8 T （mg/mL）0.010490.01049m0 （ g）11m （mg）0.010490.01192m平均值 （mg）0.0112053.2.2蛋白质含量的测定3.2.2.1样品的提取用水洗净，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取0.5 g置于砚钵中加入缓冲液5mL研磨成匀浆后，3000r/min用离心机离心10min。取上清液1.0mL于试管。3.2.2.2蛋白质的测定取适量的样品提取液，根据蛋白质浓度用0.1mol/LPH=7.0磷酸缓冲液适当稀释后，用紫外分光光度计分别在280nm和260nm波长下读取吸光度，以PH=7.0磷酸缓冲液为空白调零。3.2.2.3结果处理 蛋白质浓度=1.45A2800.74A260=0.0599 3.2.3可溶性糖含量的测定4 张沙艳.园艺检测综合实训教程.吉林大学出版社.2005，23.2.3.1样品的提取用水洗净，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取1g加入石英砂研磨。放入50mL锥形瓶中，再加入25mL蒸馏水，放入沸水浴中煮沸20min，取出冷却，提取液过滤于100mL容量瓶中，用热水冲洗残渣数次，定容至刻度。3.2.3.2样品的测定取2支试管，一支作为空白液加入1mL蒸馏水和5mL蒽酮。另一支试管加入1mL样品提取液和5mL蒽酮试剂，放入沸水浴10min后，测定吸光度（OD620nm）。然后在标准曲线上查出相应糖的微克值。空白12345葡萄糖浓度mg/mL020406080100标准葡萄糖mL00.20.40.60.81.0蒸馏水 mL1.00.80.60.40.20蒽酮试剂 mL5.05.05.05.05.05.0吸光度 OD620nm00.130.320.530.681.123.2.3.3结果处理测得OD值为0.472 Y=1.0143X0.0038 =1.01430.4720.00380.475可溶性糖含量（%）=（含糖量稀释倍数）（样品重（g）106）100 = （0.475100）/（1106） 100 =0.0475 =4.75%4结果与分析银杏叶的一般营养成分 成分 山东 浙江 抚顺 蛋白质(%) 12.36 15.45 11.98 可溶性糖(%) 5.34 4.64 4.75 VC(mg/100g) 126.70 129.20 1.124.1蛋白质测定结果的分析抚顺地区银杏叶中蛋白质含量与南方城市的比较之后，其含量也极为丰富，与大豆蛋白相媲美，接近鸡蛋蛋白。如此丰富的蛋白质组成，无疑可以成为一种很好的食品营养添加剂。4.2可溶性糖测定结果的分析可溶性糖的含量接近于南方城市，甚至超过了浙江地区的含量，这对于抚顺地区提高银杏叶的综合利用率有着重要的意义。4.3维生素C测定结果的分析从表上不难看出：抚顺地区银杏叶中维C的含量很少，分析其结果： （1）取材料的时间不同，银杏叶的变黄程度的不同会导致含量较少；（2）在标定抗坏血酸的时候时间过长，致使抗坏血酸氧化，影响T值，导致最后结果出现偏差；4.4 评价与展望在银杏叶中含有两类抗氧化剂-营养性抗氧化剂及非营养性抗氧化剂。前者主要有胡萝卜素、VC、VE、硒、锌、铜等,后者主要有银杏黄酮、萜内酯、儿茶素、多酚类等，含量也十分丰富，本文只是选取了其中相对含量较高的蛋白质、可容性糖、维生素C进行测定，可溶性糖含量为4.75%，蛋白质含量为11.98%，维生素C含量为1.12(mg/100g)。针对于试验结果，我们应该看到：抚顺银杏叶开发的前景，可以开发香味浓、品位佳的银杏叶可乐饮料和冲剂，以及保健蜜、保健乳和冰淇淋等。现在市面上美白产品很多，但是以银杏叶为原料的产品开发的力度不够，银杏叶中的锰、钼等微量元素，亦能清除氧自由基及抑制黑色素生长，能达到很好的美白效果。所以，抚顺地区对银杏叶的开发和研究有着很大的空间，应该合理的、有效的利用起银杏资源，从而为抚顺经济创造更多的价值。 我国有着得天独厚的银杏叶优势，但是我国银杏叶高附加值产品开发不够，银杏叶提取物生产线多用于药品研制单位，在银杏叶产品的开发上，我们应坚持“全面开发，重点发展”的方针，我国银杏叶产品的开发目前仍处于初始阶段，也就是说银杏叶产品开发刚刚起步，有些还是空白，如银杏叶酒、银杏叶饮料、银杏叶保健品、银杏叶口香糖、银杏叶粉、银杏叶化妆品、银杏叶药枕、银杏叶生物农药等等都还是一片空白。如果这些产品开发起来，显然会消耗大量的银杏叶，也会相应的进一步带动银杏种植业的发展。我国银杏叶产品的开发决不是“过热”而是刚开始加温，因此，我国银杏叶产品的开发还蕴藏着巨大的潜力。参考文献1 唐中贤, 银杏资源市场调研J中医药临床杂志 , 2004,(05)2 吴立明. 银杏叶研究应用进展J. 中国中医药信息杂志 , 1995,(12)3 季大洪,. 银杏叶主要活性成分及含量测定方法研究J. 中国中医药科技 , 2000,(04)4 张沙艳.园艺检测综合实训教程.吉林大学出版社.2005，25李莉,江夕夫. 银杏叶有效成分分析方法研究进展J. 中国卫生检验杂志 , 1995,(04) .6贺玉琢. 银杏叶所含成分的季节性变化J. 国外医学.中医中药分册 , 1995,(05)7蒋红星. 银杏的开发利用J. 湖南林业 , 1996,(11) .8王玮, 银杏叶提取物的成分及质量控制J河南大学学报(医学科学版) , 1998,(03)9李秀琴. 银杏提取物的制备方法和产品状况J河北化工 , 2002,(06)10黄燕萍. 国内银杏的研究概况J基层中药杂志 , 2000,(04)11丁青龙,顾卫中银杏叶及其制剂的质量研究J东南国防医药 , 1997,(01)12张庆红,王洪星,. 银杏叶化学成分及提取分离研究概况A 200513胡敏,袁津玮,张声华. 银杏叶提取物的抗氧化性能研究J. 华中农业大学学报 , 1998,(04) . 14陆惠娴. 银杏的研究进展J. 基层中药杂志 , 1997,(04) . 15王吉力,袁林, 银杏叶提取物制剂中萜类内酯含量考察J. 中国药学杂志 , 1998,(11) . 16潘家炘. 近年来国内银杏叶研究的概况J. 海峡药学 , 2002,(04) . 17姜建萍. 银杏叶的现代药理研究概况J. 中国中医药科技 , 2000,(04) . 18安建平,王廷璞,赵菲佚,贾贞,焦成瑾. 银