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药物半数致死量(LD50)的测定 吉林大学白求恩医学院 药理学系 毒性试验毒性试验 特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 长期（慢性）毒性试验 急性毒性试验：17d 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够 引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量 的对数值表示。 测定LD50意义 (1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性-治疗指数 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料 TI=LD50/ED50 新药审批办法规定： 三、药理资料 13. 与功能主治有关的主要药效学试验资料及文献资料。 14. 一般药理研究的试验资料及文献资料。 15. 动物急性毒性试验资料及文献资料。 16. 动物长期毒性试验资料及文献资料。 17. 致突变试验资料及文献资料。 18. 致癌试验资料及文献资料。 19. 生殖毒性试验资料及文献资料。 盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理: 盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产 生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑 制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为 神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。 LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、加 权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。 Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分 组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率 ，是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁 琐，故现多采用计算机程序计算。 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评 定必须采用的方法。 实验部分 【实验目的】 1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。 【实验材料】 实验动物：小白鼠，体重18g，各半， 实验前禁食12h,不禁水。 实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。 实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride） 【实验步骤】 预备实验 1探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小 剂量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，Dn）。 2确定组数、计算各组剂量： 组数（n）：5组 按公式求公比r: 按公比求各组剂量：D1，D2，,Dn，其中D1= Dn=最小剂量、 D2= D1r ,，Dn= Dn-1r, Dm 3配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.1ml/10g ，按下列公式计算浓度： r=1.25 药液配制的具体步骤： 预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml 每组药液量=每组动物总重用药量=200g0.1ml/10g=2ml 1号2号3号4号5号 1号液2号液3号液4号液5号液 2ml 2ml2ml2ml2ml 【实验步骤】 正式实验 1分组编号:取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，各半。 2计算给药：由腹腔注射给药。 3观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列 下表： 结果记录表 组别剂量（ ml/10g） 动物数 （只） 死亡数（ 只） 死亡率 （%） 1 2 3 4 5 0.12 0.11 0.10 0.091 0.082 10 10 10 10 10 小鼠的腹腔注射方法 抓好后将小鼠保持头低位 4.实验观察30min后进行数据统计 5.计算LD50及其95%可信限 采用Bliss法程序计算各参数步骤： 启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入 半数有效量选项。 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。 单击“计算”按钮，计算LD50等参数。 【注意事项】 给药剂量准确 小