生物选修3基因工程的基本操作程序.doc

基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序1、什么是目的基因？ 是指基因工程操作中所需要的外源基因，主要是指编码蛋白质的结构基因。 如：抗逆性基因、调控基因等2、什么是基因文库？ 、概念：指储存着某种生物不同基因的受体菌群。 、特点：分别储存着某种生物的不同基因。 、获得方法：将含有某种生物不同基因的DNA片段导入受体菌群中。 、基因组文库：含有某种生物全部基因的基因文库。 、部分基因文库：含有某种生物部分基因的基因文库。cDNA文库：指利用mRNA通过反转录获得的互补DNA片断。 、构建基因文库的目的和作用： 目的：为获取大量的目的基因做准备； 作用：大量储备同种基因。3、基因、基因文库、目的基因之间有什么区别？ 、基因：是有遗传效应的DNA片段，是控制生物形状遗传的遗传物质的功能的基本单位。 、基因文库：是储存着某种生物不同基因的受体菌群。 、目的基因：基因工程操作中所需要的外源基因。4、原核细胞、真核细胞基因结构有什么不同？ 、不同点： 、原核细胞基因结构简单，无内含子，编码区连续。 、真核细胞基因结构复杂，有内含子，编码区不连续。、相同点： 、基因结构中都有编码区、非编码区； 、非编码区都有调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列； 、编码区上游都有RNA酶结合位点（启动子）。5、从基因文库中获取目的基因的依据是什么？ 、基因的脱氧核苷酸序列 、基因的功能 、基因在染色体上的位置 、基因的转录产物mRNA 、基因的表达产物蛋白质6、什么是PCR技术？ 、概念：PCR技术，就是聚合酶链式反应技术，就是在生物体外大量复制特定DNA片断。 、条件：已知所需要复制DNA（基因）的脱氧核苷酸序列。 、过程：热解旋，获得DNA单链（以作模板），单链与引物结合，DNA聚合酶催化，四种游离脱氧核苷酸 作原料，形成子代DNA。 、增长方式：指数增长：2n。7、人工合成法： 适用于：脱氧核苷酸序列已知、片段较小的基因。8、DNA复制、PCR技术与基因克隆比较DNA复制PCR技术基因克隆场所细胞核生物体外细胞内酶解旋酶、DNA聚合酶Taq酶限制酶、连接酶载体不需要不需要需要遵循原则碱基互补配对碱基互补配对碱基互补配对结果DNA分子DNA分子片段DNA分子片段9、怎样构建基因表达载体？ 、用一定的限制酶切割质粒，使之出现一个黏性末端切口。 、用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端。 、将目的基因片段插入质粒切口，加入适量DNA连接酶，使目的基因与质粒形成重组质粒。 、基因表达载体的构成： 目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因10、什么是启动子？ 、位置：位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。 、结构：特殊DNA片段 、作用：启动基因的转录11、什么是终止子？ 、位置：位于基因尾端 、结构：特殊DNA片段 、作用：终止基因的转录12、什么是转化？ 、转化是指目的基因进入受体细胞内并维持稳定和表达的过程。 、转化的实质：目的基因融合到受体细胞染色体基因组中。13、受体细胞的种类： 、微生物：细菌细胞 、植物细胞：卵细胞、受精卵、体细胞 、动物细胞：受精卵、胚胎细胞14、有哪些导入目的基因的方法？ 、微生物：感受态细胞法 、感受态细胞：指细菌细胞经过Ca2+处理后，细胞壁透性增强，能够吸收周围环境中DNA分子 的生理状态。 、过程：Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子。 、植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 、农杆菌：土壤微生物，易感染双子叶植物和裸子植物；对大多数单子叶植物没有感染力。 、Ti质粒的T_DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。 、过程：目的基因插入T_DNA，T_DNA进入农杆菌，将农杆菌导入植物细胞。 、动物细胞：显微注射法 操作程序：、目的基因表达载体经过提纯备用，取得受体动物的卵（或受精卵）备用。 、采用显微注射技术将目的基因表达载体注射到卵（或受精卵）中。 、培养液培养成为早期胚胎。 、将早期胚胎移植到雌性动物子宫内，发育成新个体。15、怎样检测和鉴定目的基因？ 、检测： 、导入检测：检测受体细胞染色体DNA上是否含有目的基因。 DNA分子杂交法（DNA探针法）。 、表达检测：检