影响实验结果的环境因素及2011年实验动物国标修改.ppt

国家药物安全评价监测中心（NCSED） 2011年11月培训汇报 -11月10-11, Charles River亚洲短期培训 -11月24-25,新版国家标准详解培训班(二期) 2011.12.6 梁春南 Chunnan_ 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 提纲 影响实验结果的环境因素 （动技部近期改进事项） 病原生物相关国标的修改 实验动物病源生物监测目录 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 环境(外部)因素 温度 病原生物 湿度 (粉尘 刺激性气味) 噪音 内在因素 光照 疾病 遗传 饲养管理 饲养密度 生理节律 代谢机能 实验操作 运输 饲料 饮水 垫料 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 温度 恒温动物能够适应一定的温度变化 范,但是,保持最低的温度波动十分重 要(日温差4) 长时间超过耐受范围,可能诱发临床 体征的改变. 热的中性域(TNZ): 恒温动物发挥最 小的能量以维持核心体温的温度范 围。 高于或者低于TNZ将导致动物行为 或适应性调整以保证体内平衡：身 体蜷缩、立毛、外周血管收缩/扩张 、呼吸及食物消耗量等的改变等。 长时间暴露于高/低的温度，或者适 应性调整不足以维持体内平衡时， 会导致基础代谢率发生改变。 （普通环境16-26，屏障环境20-26 ） 物种温度范围 小鼠4 34 大鼠633 豚鼠4 34 兔子4 33 恒河猴635 犬-1028 常用实验动物的耐受温度范围 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 温度 环境温度的改变可能会影响毒性实验的结果 在啮齿类体内，温度可导致Amphetamine的毒性,而麻 黄素的毒性 特定温度的预暴露也可能影响动物的毒性反应 小鼠暴露于4的环境7天以后，对-antagonist isoproterenol 的毒性反应比暴露于24 环境中的对照小鼠 强（100倍） 环境温度升高的急性效应 动物出现死亡，雄性大鼠繁殖性能下降（睾丸发育退化） 环境问题升高的慢性效应 生长速率降低 每窝产仔数量减少 新生动物死亡率升高 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 湿度(40-70%) 偏高 微生物易于繁殖，动物易发生传染病 饲料垫料易于霉变 与高温协同作用：抑制动物的蒸发散热，危害巨大 与低温协同作用：显著增加动物的非蒸发散热 偏低 使动物皮肤和黏膜发生干裂，减弱皮肤和黏膜对微生物的防御能 力 使室内灰尘飞扬，易引起动物的呼吸道疾病 相对湿度低于40%时，大鼠容易发生环尾症，可能导致死亡率升 高 低湿环境下，常发生大、小鼠乳母拒绝哺乳或食仔现象，仔鼠发 育不良、体重增长停滞 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 不同因素对有效环境温度的影响及给动物健康与福利的对应危害 影响因素 极低温度危害程度极高温度危害程度 相对湿度高几乎没有影响低热得多极高 空气流速高冷得多高凉爽低 粮食匮乏冷得多高几乎没有影响低 饮水匮乏更冷中热得多高 高密度暖和无影响或影响正面热很多极高 生病（发热 ）更冷中等更热中等 肥胖（皮下绝缘 好）暖和（保护）低更热高 应激基因敏感型更冷高更热高 表面覆盖（羽毛和毛 发） 暖和保护更热高 过往经验 或适应 更冷高 或保护 更热高 或保护 注：数据来源：Guidelines for the Humane Transportation of Research Animals，NRC 2006. 影响实验结果的环境因素 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 噪音 来源 关门（84-105db）， 说话、喊叫（83-100db）， 推车（83db） 压差条件下密封不严产生哨声 动物 兔子蹬地，非人灵长类晃动笼具的声音 非人灵长类动物和狗的叫声 楼下饲养的犬吠声音可能对楼上的影响（80-82db） 报警设备测试 广播系统 等等 （60db） 影响实验结果的环境因素 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 噪音 常见影响 听觉：听力丧失 非听觉： 心血管：血压升高（大鼠，猕猴）；大鼠心肌肥大、心率加 速、外周血管收缩、呼吸频率加快等 神经（听源性癫痫）、激素/生化、生殖、睡眠、行为等等 突然的尖锐、大声的噪音会引发癫痫发作 记忆性的癫痫 间歇性和持续性的噪音 通常超过85-100db 最有可能导致临床和生理的改变 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 光照 重要参数：周期、强度、波长 显著影响：繁殖、行为、生理机能，且有种群差异 光周期 较长的光周期可能会改善某些种群/品系的繁育情况（12/12， 14/10） 恒定的光照，能导致大鼠卵巢的改变，出现持续发情（无周期性 ） 光强度 光毒性视网膜病变：白化啮齿类大小鼠 高强度：延长发情周期，降低繁殖性能 （动物照度：大、小鼠、豚鼠15-20lux，犬、猴、兔100-200lux） （工作照度：200，原国标最大离地1米照度不超过300lux的意义 ，长期实验有必要定期调整和改变动物放置的位置） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 病原生物 导致临床疾病：发病和死亡可能会影响研究 项目 无临床症状感染，但产生的变化会扰乱研究 结果 组织学改变：肝脏、肾脏变化 生化改变 免疫学差异 等等 粉尘：病原微生物重要的传播媒介（空气洁净度和落 下菌） （空气洁净度：屏障7级，普通无要求） （落下菌：屏障环境每平皿3个/半小时时，普通环环境无要 求） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 饲料 营养成分 全价饲料采用了标准配方,营养成分相对稳定 常规营养成分方面小的改变不会明显影响实验结果 蛋白质,脂肪,水分,碳水化合物,灰份 优质饲料只需要检验少量项目的有毒/致癌物质即可 微生物污染 可能随季节、饲料类型和水分含量而变化。 可能会发生沙门氏菌引起的饲料污染，并且在最终产品中存活。 颗粒饲料生产过程中仅在短时间内可能达到88的温度，达不到灭菌 效果。 饲料中霉菌的影响主要由产毒霉菌产生的毒素所引起的。 必须营养 如：Vc （豚鼠，猴） （探讨各类饲料的检测指标） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 垫料 材质 储存 分析：参考饲料 饮水 可能的污染物质：重金属、杀虫剂、挥发性有机物，由水传播 的微生物病原体等 水质硬度 根据检测结果进行适当处理 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 饮水 普通处理选择 消毒处理：酸化处理，加氯消毒，反渗透，臭氧消毒，过滤（颗 粒物，活性碳），去离子 高压灭菌 酸化抑菌： 改变饮水消耗量， 生长速率，及器官比重， 改变消化道菌群/数量。 加氯： 消毒能力较强， 有报道称可引起免疫系统改变， 可能产生有致癌性和细胞毒性，影响毒性评价结果。 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 小结 许多环境因素对实验结果的影响力比较小 设立同期对照十分重要 将抵消很多环境因素的影响 但是，当比较长期研究及不同的机构间的研究时仍然 有问题。 规范饲养设施中的环境条件将有助于减少由长 时间引起的变化 饲养条件：清洁，规律，恒定 饲料、垫料、饮水等：符合动物生长特性，无菌，无 /低有害物质 生物安全程序：人流/物流/动物流/气流控制，外来人 员的控制管理。 等等。 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 环境(外部)因素 温度 病原生物 湿度 粉尘 刺激性气味 噪音 内在因素 光照 疾病 遗传 饲养管理 饲养密度 生理节律 代谢机能 实验操作 运输 饲料 饮水 垫料 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 影响实验结果的环境因素 光照： 新增动物照度（常规实验） 生殖实验建议维持原照度，可尝试改变周期（12/1214/10） 屏障基本改造完成,普通动物区域也可实现,但均需要继续改进. 饲料间 夏季温度基本能保证在20 上下 冬季甚至超过25 正在计划改造饲料间,目标将冬季温度控制到小于等于21 饮水: 新引入实验动物饮水软化装置,有害物质特别是硬度得到了有 效降低 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 序号检测项 目计量单 位 未高压灭 菌过滤 水未高压灭 菌自来水 委托自检委托自检 1色度（Color）Degree5052 2浑浊 度NTU0.7100.721 3pH7.656.57.797.5 4硝酸盐（NO3-）mg/L2510 5 亚硝酸盐（NO2-）mg/L NDNDNDND 复核 0.0030.006 6 总硬度（以碳酸钙计 ）（ Total Hardness）mg/L7.41010208100200 7氯化物（Cl-）mg/L0.680220.820-50 8锌（Zn）mg/LND00.2ND0.20.5 9 三氯甲烷（ Trichloromethane ）mg/L0.000840.00082 10硫酸盐（SO42-）mg/L0.7836.6 11氟化物（F-）mg/LND0.36 12耗氧量（以O2计）mg/LND0.45 13溶解性总固体（TDS）mg/L10342 饮水软化装置处理前后水质对比 另有 20项 指标 在处 理前 后均 未检 出 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 新版国家标准详解培训班学习心得 本次学习的标准项目 GB14925-2010 实验动物 环境及设施（替代 GB14925-2001 ） GB14922.1-201? 实验动物 寄生虫学等级监 测 GB14922.2-2011 实验动物 微生物学等级及 监测（替代GB14922.2-2001 ）及涉及的部 分检测方法 GB14923-2010 实验动物 哺乳类实验动物的 遗传质量控制（替代GB14923-2001 ） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 新版国家标准详解培训班学习心得 本次标准的总体印象 完全强制部分强制+部分推荐 引用标准删除了年份，而以“最新”替代 抗体效价合格率由原来必须达到100% 才算免疫合格改为只需要达到70%即为 合格 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 新版国家标准详解培训班学习心得 GB14922.2 废除了对“单核细胞增生性李斯特杆菌”的检验要 求 GB/T 14926.21 普通级兔如果免疫接种兔出血热疫苗，则HAI 抗体效价应大于1：10，同时免疫抗体合格率70%即判断该 群里免疫合格 GB/T 14926.46 犬钩端螺旋体 免疫 抗体合格率70%即判断 该犬群里免疫合格 GB/T 14926.56 犬狂犬病病毒 免疫抗体合格率70%即判断该 犬群里免疫合格 GB/T 14926.57 犬细小病毒 免疫 抗体合格率70%即判断该 犬群里免疫合格 GB/T 14926.58 传染性犬肝炎病毒 免疫 抗体合格率70%即 判断该犬群里免疫合格 GB/T 14926.59 犬瘟热病毒 免疫 抗体合格率必须达到100% 才能判断该犬群里免疫合格 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 病原种类病原项目 寄生虫 Parasites 体外寄生虫（节肢动物） Ectoparasites 弓形虫Toxoplasma gondii 病毒 Viruses 狂犬病病毒 Rabies Virus（RV） 犬细小病毒 Canine Parvovirus（CPV） 犬传染性肝炎病毒 Infectious Canine Hepatitis Virus (ICHV) 犬瘟热病毒 Canine Distemper Virus (CDV) 细菌/真菌Bacteria/Fungi沙门菌Salmonella spp. 布鲁杆菌 Brucella spp. 皮肤病原真菌 Pathogenic dermal fungi 实验动物病源生物控制目录 犬Canine 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 病原种类病原项目 寄生虫 Parasites 体外寄生虫（节肢动物） Ectoparasites 弓形虫Toxoplasma gondii 病毒 Viruses 猕猴疱疹病毒1型（B病毒） Cerconpithecine HerpesvirusType1（B-virus） 细菌/真菌Bacteria/Fungi沙门菌Salmonella spp. 志贺菌Shigella spp. 结核分支杆菌 Mycobacterium tuberculosis 皮肤病原真菌 Pathogenic dermal fungi 实验动物病源生物控制目录（续1） 非人灵长类（恒河猴，食蟹猴） Non-human Primates（Macaca Mulatta, Macaca Fascicularis） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 实 验 动 物 病 源 生 物 控 制 目 录 续2 病原种类病原项目 寄生虫 Parasites 体外寄生虫（节肢动物）Ectoparasites 弓形虫Toxoplasma gondii 全部蠕虫All Helminths 鞭毛虫Flagellates 纤毛虫Ciliates 病毒 Viruses 汉坦病毒Hantavirus (HV) 仙台病毒Sendai Virus (SV) 小鼠肺炎病毒(PVM)Pneumonia Virus of Mice 呼肠孤病毒III型(Rec-3)Reovirus type III 大鼠细小病毒RV株Rat Parvovirus（KRV） 大鼠细小病毒H-1株Rat Parvovirus（H-1） 大鼠冠状病毒/大鼠涎泪腺炎病毒 Rat Coronavirus（RCV）/ Sialodacryoadenitis Virus(SDAV) 细菌/真菌 Bacteria/Fungi 沙门菌Salmonella spp. 支气管鲍特杆菌Bordetella bronchiseptica 支原体Mycoplasma spp. 鼠棒状杆菌Corynebacterium kutscheri 泰泽病原体Tyzzers organism 肺炎克雷伯杆菌Klebsiella pneumonica 嗜肺巴斯德杆菌Pasteurella pneumotropica 金黄色葡萄球菌Stphylococcus aureus 绿脓 杆菌Pseudomonas aeruginosa 大鼠 Rats 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 病原种类病原项目 寄生虫 Parasites 体外寄生虫（节肢动物）Ectoparasites 弓形虫Toxoplasma gondii 全部蠕虫All Helminths 鞭毛虫Flagellates 纤毛虫Ciliates 病毒 Viruses 鼠痘病毒Ectromelia Virus(Ect.) 小鼠肝炎病毒Mouse Hepatitis Virus（MHV） 仙台病毒Sendai Virus (SV) 小鼠肺炎病毒(PVM)Pneumonia Virus of Mice 呼肠孤病毒III型(Rec-3)Reovirus type III 小鼠细小病毒Minute Virus of mice (MVM) 细菌/真菌 Bacteria/F ungi 沙门菌Salmonella spp. 支原体Mycoplasma spp. 鼠棒状杆菌Corynebacterium kutscheri 泰泽病原体Tyzzers organism 肺炎克雷伯杆菌Klebsiella pneumonica 嗜肺巴斯德杆菌Pasteurella pneumotropica 金黄色葡萄球菌Stphylococcus aureus 绿脓 杆菌Pseudomonas aeruginosa 实 验 动 物 病 源 生 物 控 制 目 录 续3 小鼠 Mice 国家药物安全评价监测中心（NCSED） 谢谢 ！ 国家药物安全评价监测中心（NCSED） GB14925修改前后对比 序号GB14925-2001GB14925-2010 1标准的范围实验动 物繁育，生产及实验环 境条件 和设施技术要求及检测方法， 实验动 物及实验动 物设施和环 境条件技术要求及检测方 法， 2引用标准GB3095 1996 环境空气质量标准 GB3096 1993城市区域环境噪声标准 GB4792 1984放射卫生防护基本标准 GB5749 1985生活饮用水卫生标准 GB8978 1996污水排放综合标准 GB50243-1997通风与空调工程及验 收规范 GB50259 1996电气装置安装工程电 气照明装置施工及验收规范 GBJ73-1984洁净厂房设计规 范 GBJ68-1984建筑结构设计统 一标准 JGJ-71-1990洁净室施工及验收规范 GB5749 生活饮用水卫生标准 GB8978 污水综合排放标准 GB18871 电离辐射防护与辐射 源安全基本标准 GB19489 实验室生物安全通用 要求 GB50052 供配电系统设计规 范 GB50346 生物安全实验室建筑 技术规范 （最新标准） 国家药物安全评价监测中心（NCSED） GB14925修改前后对比 序号GB14925-2001GB14925-2010 定义更具体 化 实验动 物特殊实验设 施包括感染动物实 验设 施（动物生物安全实验 室）和 应用放射性物质或有害化学物质等进 行动物实验 的设施。 空气洁净 度原国标为 100级、 10000级、 1000000级。 新国标按5级、7级、8级划分（空气中尘 埃粒子数0.5um.1um.5um） 分类具体化普通环境、屏障环境 和隔离环境 环境：普通环境、屏障环境（正压和负 压）和隔离环境（正压和负压 ） 使用功能：实验动 物生产、动物实验 、 检疫 运用动物等级：基础动 物 、清洁动 物、SPF动物、悉生动物、无菌 动物 国家药物安全评价监测中心（NCSED） GB14925修改前后对比 序号GB14925-2001GB14925-2010 建筑设施要求实验动 物繁育、生 产、实验设 施 应与生活伙保 持大于50m的距 离 走廊宽度不应小于 1.5m，门宽度 不应小于1.0m 动物生物安全实验室与生活区的 距离应符合GB19489和 GB50346的要求 走廊宽度不应小于1.5m，门宽度 不应小于0.8m 大型动物的实验设 施根据情况加 大 实验动 物设施的电力负荷等级要 求按GB50052要求确定 屏障环境和隔离环境采用不低于 二级电力负荷供电 国家药物安全评价监测中心（NCSED） GB14925修改前后对比 动物实验间 环境技 术指标 温度：屏障环境和隔离环境均变成2026 ，和动物生产间 保持一致，原国标为 2025，豚鼠、地鼠普通环境温度变成 1829，和动物生产间 保持一致，原国 标为 1926 日温差：变成“最大日温差”，数值全为 4，原国标普通环境为4，其他环境为 3 换气次数：变成“最小换气次