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DOC格式论文,方便您的复制修改删减慢性炎症和T淋巴细胞活性与心绞痛的相关研究(作者:_单位: _邮编: _) 作者:陈冰雪 刘莉 陈盛鹏 窦静【摘要】 目的 测定冠心病心绞痛患者外周静脉血中白细胞介素18(IL18)、C反应蛋白(CRP)浓度及外周血辅助性T淋巴细胞(Th)功能的改变,观察心绞痛与非感染性炎症及细胞免疫功能之间的关系。方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血清IL18浓度,速率散射比浊法测量CRP浓度;采用流式细胞分析法检测外周血CD4+细胞内干扰素(IFN)和白细胞介素4(IL4)的表达。同时分离外周血单个核细胞,经植物血凝素刺激培养后,应用ELISA检测培养上清液中IFN和IL4水平以测定辅助性T淋巴细胞的功能改变。结果 与对照组比较,心绞痛组患者炎性因子(IL18和CRP浓度)和辅助性T淋巴细胞因子(IFN)水平以及IFN/IL4比值明显高于对照组;IFN染色阳性的细胞占CD4+ T细胞的比率为15.34%,明显高于对照组的12.09%。而两组间IL4水平及IL4染色阳性细胞比率在两组间未见显著统计学差异。在心绞痛分组中,不稳定型心绞痛(UAP)组的IL18、CRP、IFN水平以及IFN/IL4比值明显高于稳定型心绞痛(SAP)组。结论 IL18、CRP、IFN浓度随冠状动脉病变的程度而升高,且与动脉粥样硬化斑块的稳定性有关。提示炎性因子和辅助性T淋巴细胞功能的失调可能参与了心绞痛患者冠脉粥样硬化斑块形成的过程。IL18与CRP、IFN浓度可能对冠心病心绞痛患者的诊断及预后有重要参考价值 【关键词】 白细胞介素;C反应蛋白;干扰素;T淋巴细胞;心绞痛 【Abstract】 Objective To measure the concentration of interleukin18(IL18),Creactive protein(CRP)and cellmediated immunity function in patients with coronary heart disease and angina pectoris and evaluate their clinical correlation. Methods IL18 was measured with ELISA,and serum CRP with rate scatter nephelometry,cytokineproducing CD4+ T cells with 3color flow cytometry. The levels of interferongamma (IFN) and IL4 in culture supernatants were measured with ELISA. Results The concentrations of IL18,CRP,IFN and ratio of IFN/IL4 in patients with angina pectoris were much higher than those in control.The frequencies of IFNproducing T cells were found to be significantly higher in angina pectoris group(15.34%) than those in control(12.09%), while there was no significant difference on the frequencies of IL4producing peripheral Tlymphocytes between the two groups. In angina pectoris group, the concentrations of IL18,CRP,IFN and ratio of IFN/IL4 in unstable angina pectoris were much higher than those in stable angina pectoris. Conclusion The concentrations of IL18,CRP,IFN were increased with coronary arteriosclerosis and related to the stability of atherosclerotic plaques, suggesting that inflammation factor and imbalance of cellmediated immunity function may participate in formation of atherosclerotic plaques.The concentrations of IL18,CRP,IFN perhaps had important values in diagnosing coronary artery diseases. 【Key words】 Interleukin; Creactive protein; Interferongamma; T lymphocyte; Angina pectoris大量证据表明非感染性炎症和细胞免疫功能失调贯穿于动脉粥样硬化发生和发展的全过程13,白细胞介素18(IL18)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子和细胞免疫功能的改变与冠心病的相关性受到高度重视48。本研究观察了某些炎性因子、T细胞功能的改变与冠心病心绞痛患者的临床资料,以期为临床提供无创敏感的参考指标。1 临床资料1.1 对象及分组 选择2004年12月2006年12月在我院住院的胸痛患者90例。其中不稳定型心绞痛(UAP)48例(男28 例,女20例),平均(626)岁;稳定型心绞痛(SAP)22例(男12例,女10 例),平均(598)岁;对照组(有胸痛、胸闷症状经冠状动脉造影排除冠心病者)20 例(男10 例,女10 例),平均(578)岁。3组患者性别、年龄指标及其他临床资料比较差异均无统计学意义。入选患者均排除严重肝肾功能不全、感染性疾病、肿瘤、免疫性疾病和使用炎症抑制性药物患者。1.2 标本采集 所有入选患者均于空腹8 h后采集静脉血5 ml,经抗凝、离心分离血浆,-70保存待测。1.3 冠状动脉造影检查及判断 均采用Judkins法造影,以冠状动脉血管直径减少50% 为有意义狭窄。1.4 测量方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL18、IFN和IL4水平,IL18检测试剂盒(奥地利Bender Medsystems 公司)、IFN和IL4检测试剂盒(晶美生物工程有限公司)。IFN最低检测值15.625 ng/L,IL4最低检测值8 ng/L。CRP采用速率散射法(美国BECKMAN ARRAY全自动特种免疫蛋白分析仪)测定,变异系数6。采用流式细胞分析法检测外周血CD4+T细胞因子IFN和IL4的表达。1.5 统计学处理 使用SPSS 10.0统计软件,测定值以(s)表示,组间比较采用ANOVA和Bonferroni检验。数据用(s)表示, P0.05为差异有显著性。2 结果2.1 心绞痛组炎性因子、T细胞细胞因子浓度与对照组比较 见表1。心绞痛组IL18、CRP、IFN浓度以及IFN/ IL4比值与对照组比较明显增高;UAP组的上述指标亦明显高于SAP组,提示上述指标随冠状动脉病变的发生、发展而升高,并且与动脉粥样硬化斑块的稳定性有关。表1 心绞痛组炎性因子、IFN及IL4浓度与对照组的比较(略)注:与对照组比较,P0.05;与SAP组对比,P0.052.2 心绞痛组与对照组CD4T细胞胞内因子表达的差别 见表2。心绞痛组IFN染色阳性率与对照组比较明显增高(P0.05),而IL4染色阳性率与对照组比较无显著差异,提示T淋巴细胞功能改变主要是Th1型细胞功能亢进,而Th2型细胞功能无明显变化。 表2心绞痛组与对照组CD4T细胞胞内因子的表达比较(略) 注:与对照组比较,P0.05;与SAP组对比,P0.05 3讨论 近年来对炎症因子和细胞免疫机制的探讨取得可喜成绩,大量研究发现,炎症和细胞免疫功能的改变贯穿于动脉粥样硬化的发生和发展过程。 本研究结果显示,冠心病心绞痛组IL18、CRP和IFN的浓度明显高于对照组,提示炎性因子和细胞免疫功能紊乱可能参与了动脉粥样硬化斑块的发生与发展,并且与斑块的稳定性关系密切,此结果与相关研究一致6。 IL18和CRP均为较新发现的炎症因子,而IFN和IL4则是T淋巴细胞所分泌的细胞因子。有研究认为它们参与了动脉粥样硬化的发生与发展,同时也可能与粥样斑块的不稳定性有关5。其可能的机制为IL18在斑块局部诱导T淋巴细胞和NK细胞产生IFN,而IFN在动脉粥样硬化斑块的破裂中起着关键性的作用4。Blankenberg等6对1229例诊断为冠心病的患者进行了前瞻性研究,95例因心血管疾病死亡的患者生前血清IL18水平明显高于其他患者(P0.01)。Mallat等5经过研究发现IL18在不稳定斑块中明显增高,且IL18受体在斑块巨噬细胞和内皮细胞中表达增加,提示IL18在动脉粥样硬化斑块不稳定性中有重要作用。这与我们的结果一致。 现代免疫学认为,活化的辅助性T淋巴细胞至少可以分为两群:Th1细胞可以分泌IFN,主要介导细胞免疫应答;Th2细胞可以分泌IL4而不分泌IFN,主要介导体液免疫应答,通常以这两种细胞因子作为鉴别Th1和Th2的标志。 Th1/Th2细胞出现功能失衡与非感染性炎症的发生发展有密切关系。Elhage等7通过研究证实,缺乏IL18可使Thl细胞活动减低,平滑肌细胞数量增多,动脉粥样硬化斑块减小,斑块稳定性增加,提示Thl细胞的功能改变与动脉粥样硬化斑块的形成及不稳定性有关。研究中我们发现心绞痛患者的IFN染色阳性的细胞占CD4T细胞的比例以及Th1型细胞因子IFN水平及IFN/IL4比值的明显增高,而Th2型细胞因子IL4水平与对照组没有显著差别,提示心绞痛组患者体内出现的T淋巴细胞功能失调主要是Th1细胞功能亢进,该功能亢进可能是继发于粥样斑块后的炎症反应,并推测心绞痛患者Th1细胞功能亢进可能参与了粥样斑块的形成过程。 CRP是一种与白细胞介素密切相关的炎症介质,许多研究证实急性冠状动脉事件发生时血清CRP水平升高2。我们的结果显示,血清CRP浓度在对照组与稳定型心绞痛组无显著差异;而在不稳定型心绞痛患者较稳定型心绞痛及对照组显著升高,其升高可能是粥样斑块不稳定的结果。 研究结果表明,炎性因子(IL18、CRP)和细胞免疫功能的改变(IFN、IFN/IL4比值失调)在心绞痛患者中明显升高,并且在UAP组明显高于SAP组,所以我们认为炎性因子和细胞免疫功能的改变可能参与了冠状动脉粥样硬化斑块的形成,并且与斑块的稳定性有关,可以作为心绞痛诊断和预后的判断指标。 【参考文献】 1LibbyPInflammationinatherosclerosisNature,2002,420(6917):868874 2王红,郑延松非冠心病患者未来发生心血管疾病可能性预测中高敏C反应蛋白的作用中国临床康复,2004,8(12):23642366 3RossRAtherosclerosis:aninflammatorydiseaseNEnglJMed,1999,340:115126 4GuptaS,PabloAM,JiangX,etalIFNgammapotentiatesatherosclerosisinApoEknockoutmice.JClinInvest,1997,99(11):27522761 5MallatZ,HenryP,FressonnetR,etalIncreasedplasmaconcentrationsofinterleukin18inacutecoronarysyndromesHeart,2002,88(5):467469 6BlankenbergS,TiretL,BickelC,etalInterleukin18isastrongpredictorofcardiovasculardeathinstableandunstableanginaCirculation,2002,106(1):2430 7Elhag
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