第十章抗原和抗体的制备与应用_ppt课件

第十章 抗原和抗体的制备与应 用 抗原是指能够刺激机体产生（特异性）免疫 应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞 在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的 物质。 抗原的基本特性： 诱导免疫应答的能力，即免疫原性。 与免疫应答的产物发生反应，即抗原性（免疫反 应性）。 免疫原具有免疫原性的物质 免疫原性的 化学基础 化学组成 分子量 化学结构 大分子蛋白、多糖等 10000 具有免疫原性 ；4000 免疫原 10000 呈弱免疫原性 ； 4000 一般不 具有免疫原性。 一般而言，分子结构和空间结构愈复杂的物 质免疫原性愈强 人工抗原 人工抗原：用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学 结构决定簇的抗原，称之为人工抗原。 人工结合抗原：将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联， 或将无免疫原性的有机分子如二硝基苯（DNP）或三硝基苯（TNP） 与蛋白质载体结合，形成载体-半抗原结合物，均属人工结合抗原。 人工合成抗原：用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多 肽。只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，如由左旋赖氨酸形 成的共同聚多肽（PLL）。 基因工程抗原：将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当 载体（如细菌粒或病毒）DNA分子相结合，然后引入受体细胞中（如 原核细胞的大肠杆菌或真核细胞酵母菌及哺乳类动物细胞）使之表达 ，即能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可做为疫苗，此即基因工 程疫苗。 人工结合抗原 半抗原：能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应 、又不能单独激发人或 动物体产生抗体的抗原。它只有反应原性，不具免疫原性，又称不完 全抗原。一些比一般半抗原分子量小，但有特异结构的化学活性基团 物质（ 如青霉素、磺胺剂等 ） ，称为简单半抗原。 载体蛋白：制作人工结合抗原时与半抗原进行偶联的具有免疫原性的生 物大分子，主要为大分子的蛋白质。如：牛血清白蛋白(BSA)。 载体蛋白半抗原 偶联桥 人工抗原合成常用的载体 载体表面应首先应具有化学活性基团。 载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子。 载体应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能。 载体应具有足够的稳定性，且应该是廉价易得的。 牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH) 、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等是常 用的载体蛋白。 载体的 特点 Ag 单克隆抗体 B1 B2 B3 B4 B3 B3 B3 B3 2 多克隆抗体 3 4 1 1、单克隆抗体的特点 n特异性强，具有抗原结合位点的专一 性。（不是抗原的专一性！） n因结合位点的单一性，有时不易捕捉 抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产 生凝集反应或沉淀反应。 抗体的性质相同，容易纯化、标记。 单克隆抗体有交叉反应是由于不 同的抗原上有完全相同的表位（100% 的交叉反应）,或有相似的表位（不同 程度的交叉反应）。 2、多克隆抗体的特点 多抗是单抗的混合物，因此多抗的性 质是一个群体综合的性质。 n特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，只要其 中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉 反应，所以多抗更容易有交叉反应。 n 比单抗更容易捕捉抗原。 因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。 n 抗体的纯化、标记比单抗难 因为含有各种不同类型、亚类的抗体， 提纯、标记的方法有所差别。同时,血 清中含有的杂蛋白比较多. 二、抗体的制备 1、单克隆抗体的制备 无法采用生物化学的方法从多抗中分离 必须采用细胞杂交的方法来制备 能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问 题也有机遇问题 制备单克隆抗体的基本原理： 致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （myeloma） （能够分泌特异性的抗体 ， （不能分泌特异性的抗体， 不能在体外长期生存 ） 但能在体外长期生存） 阳性杂交瘤细胞 (hybridoma) （既能分泌特异性抗体， 又能够在体外长期生存） 克隆化培养 （产生单克隆的阳性杂交瘤细胞） 生产单克隆抗体 1 2 2 2 2 1 2 单抗与多抗的区别 单抗 多抗 抗体组成 单一 复杂 抗体性质 个体的属