自身抗体风湿病中的应用ppt课件

自身抗体风湿病中的应用自身抗体风湿病中的应用 狼疮细胞（1948，Hargrave) 一、概述一、概述 自身抗体的定义：自身抗体的定义： 以自身组织成分为靶抗原而出现的相应以自身组织成分为靶抗原而出现的相应 抗体抗体 风湿免疫病自身抗体风湿免疫病自身抗体 抗核抗体谱抗核抗体谱 抗磷脂抗体抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体类风湿关节炎抗体 肌炎抗体肌炎抗体 血管炎抗体血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体自身免疫性肝病抗体 自身抗体在自身免疫病中的意义自身抗体在自身免疫病中的意义 1 1、是自身免疫病的标记、是自身免疫病的标记 2 2、有助于弥漫性结缔组织病（、有助于弥漫性结缔组织病（CTDCTD）的诊的诊 断和鉴别诊断断和鉴别诊断 3 3、判断疾病的活动性判断疾病的活动性 4 4、预测疾病的预后预测疾病的预后 二、二、自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法 1 1、间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IFTIFT） 2 2、ELISAELISA 3 3、免疫印迹法、免疫印迹法 4 4、放射免疫法、放射免疫法 5 5、免疫双扩散、免疫双扩散 抗核抗体（核仁型, Mi-2、PM-SCL、RNA Polymerase I） 抗核抗体（核膜型, dsDNA） 抗核抗体（均质型, Histone-DNA） 三、常见的自身免疫性疾病的抗体三、常见的自身免疫性疾病的抗体 ANAANA谱及其临床意义谱及其临床意义 定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸(DNA),(DNA), 核糖核酸核糖核酸(RNA),(RNA),蛋白或这些物质的分子复合蛋白或这些物质的分子复合 物的自身抗体，因此物的自身抗体，因此ANAANA应称为抗核抗体谱应称为抗核抗体谱 。 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IFTIFT）: : HEp-2HEp-2细胞细胞 灵长类肝灵长类肝 脏冰冻组织切片脏冰冻组织切片 1 1、完整的抗原谱、完整的抗原谱 ( (细胞核、细胞浆细胞核、细胞浆) ) 2 2、ANAANA检测的金标准，具有最高的敏感性和特检测的金标准，具有最高的敏感性和特 异性异性 3 3、质量控制容易、质量控制容易 4 4、除、除ANAANA外，还可获得一些对临床医生有用的外，还可获得一些对临床医生有用的 其他信息其他信息 ( (如如ANCA)ANCA) ANA ANA 的检测方法的检测方法 ANA ANA 的检测方法的检测方法 ELISA: ELISA:用高度纯化的抗原来筛查用高度纯化的抗原来筛查ANAsANAs 1 1、抗原谱比、抗原谱比IIFIIF窄窄 2 2、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性 3 3、操作简便、快速、操作简便、快速 ANAANA分类分类抗抗DNADNA抗体抗体 抗抗DNADNA抗体：抗体： ssDNA / dsDNAssDNA / dsDNA 抗原：抗原：单链单链DNADNA，变性的变性的DNA (DNA (嘌呤嘌呤和和嘧啶碱基嘧啶碱基) ) 双链双链DNADNA，天然天然DNA (DNA (脱氧核糖核酸骨架脱氧核糖核酸骨架) ) 相关疾病：相关疾病： ssDNA dsDNAssDNA dsDNA SLE 80.8% 30% SLE 80.8% 30% SjgrensSjgrens综合征综合征 40.0% 40.0% 硬皮病硬皮病 44.0% 44.0% 类风湿性关节炎类风湿性关节炎 12.3% 12.3% 健康献血员健康献血员 6.8% 6.8% ANAANA分类分类抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体 抗抗ENAENA抗体抗体：此组抗体不含组蛋白，可以溶：此组抗体不含组蛋白，可以溶 于盐水而被提取于盐水而被提取 检测方法：免疫印迹法检测方法：免疫印迹法 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗SmSm抗体抗体 抗原抗原: : 与与U1-U1-、U2-U2-、U4-U4-、U5-U5-或或U6-nRNAU6-nRNA 相关的相关的6 6种不同的蛋白分子种不同的蛋白分子 ( (核心蛋白核心蛋白B B、BB、D D、E E、F F、G)G) 相关疾病相关疾病: : SLE:SLE:5% - 30%5% - 30% 抗抗ENAENA抗体抗体 抗核糖体蛋白抗体抗核糖体蛋白抗体 靶抗原靶抗原: :由由3 3个蛋白质分子组成的核糖体个蛋白质分子组成的核糖体60S60S亚单位：亚单位： P0P0、P1P1、P2 (38P2 (38、1616、15 kD) 15 kD) 在碳末端具有在碳末端具有 相同的免疫反应性表位相同的免疫反应性表位 相关疾病相关疾病: : SLE:SLE:5% - 15%5% - 15% 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗SS-ASS-A抗体抗体 靶抗原靶抗原: :与与Y1Y1、Y3Y3、Y4Y4或或Y5Y5型型RNARNA相关相关 的的 2 2种蛋白分子种蛋白分子(52 kDa(52 kDa和和60 60 kDa)kDa) 相关疾病相关疾病: : 干燥综合征干燥综合征: : 40% - 95%40% - 95% SLE:SLE: 34.7% 34.7% 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗SS-BSS-B抗体抗体 靶抗原靶抗原: :与小分子与小分子RNA(U6-RNARNA(U6-RNA、tRNAtRNA 前体前体) )结合的结合的磷蛋白磷蛋白(48 kDa)(48 kDa) 相关疾病相关疾病: :干燥综合征：干燥综合征：40% - 95%40% - 95% SLE: SLE: 10% - 20%10% - 20% 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗U1-nRNPU1-nRNP抗体抗体 靶抗原靶抗原: :三种与三种与U1-nRNAU1-nRNA相关的蛋白相关的蛋白 (70KD(70KD、A A和和C C蛋白蛋白) ) 相关疾病相关疾病: : MCTD:MCTD: 95% - 100% 95% - 100% SLE: SLE: 15% - 40%15% - 40% 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗Scl-70Scl-70抗体抗体 靶抗原靶抗原: : DNA DNA 拓扑异构酶拓扑异构酶I(100 kDa)I(100 kDa) 相关疾病相关疾病: :硬皮病硬皮病: 79.7% : 79.7% ( (25% - 75%)25% - 75%) 抗抗ENAENA抗体抗体 抗抗J0-1J0-1抗体抗体 靶抗原靶抗原: :组氨酰组氨酰- -tRNAtRNA合成酶合成酶(50 (50 kDa)kDa)， 细胞浆磷蛋白细胞浆磷蛋白 相关疾病相关疾病: : 多肌炎多肌炎/ /皮肌炎皮肌炎: 25% - 35%: 25% - 35% 伴有肺间质纤维化的多肌炎伴有肺间质纤维化的多肌炎: : 70%70% ANAANA分类分类抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体 2 2、抗着丝点抗体、抗着丝点抗体 靶抗原靶抗原: : 着丝点中的着丝点中的4 4种蛋白分子：种蛋白分子：A- (17 kDa)A- (17 kDa)、 B- (80 kDa) B- (80 kDa)、C- (140 B- (80 kDa)C- (140 B- (80 kDa)、C- (140 kDa)C- (140 kDa)、 D-D-蛋白蛋白 (50 (50 kDa)kDa) 主要的靶抗原是着丝点蛋白主要的靶抗原是着丝点蛋白B B 相关疾病相关疾病: : 硬皮病硬皮病: 18%: 18% 局限型局限型 ( (CRESTCREST综合征综合征) ): : 80% - 95% 80% - 95% ANAANA分类分类抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体 抗原抗原: : 组蛋白组蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4H1, H2A, H2B, H3, H4 ( (主要的靶抗原为主要的靶抗原为H1H1和和H2B)H2B) 相关疾病相关疾病: : 药物诱导性药物诱导性 LE: 100% LE: 100% （标志性抗体）（标志性抗体） SLE: SLE: 40% - 80%40% - 80% 在其他风湿病中很少见在其他风湿病中很少见 ANAANA分类分类抗核仁抗体抗核仁抗体 靶抗原靶抗原: :核仁内的核仁内的RNARNA多聚酶、原纤维多聚酶、原纤维 和和To/ThTo/Th抗原抗原 相关疾病相关疾病： SSc 4%SSc 4% SLESLE患者特异性自身抗体患者特异性自身抗体 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率 (%) (%) ssDNA ssDNA 70-95 70-95 dsDNAdsDNA 30-90 30-90 组蛋白组蛋白 40-80 40-80 U1-nRNPU1-nRNP 15-40 15-40 SmSm 5-30 5-30 SS-ASS-A 20-60 20-60 SS-BSS-B 10-20 10-20 核糖体核糖体P P蛋白蛋白 5-15 5-15 增殖性细胞核抗原增殖性细胞核抗原I (PCNA) 3I (PCNA) 3 心磷脂，心磷脂， 2-2-糖蛋白糖蛋白1 20-401 20-40 Ku 5-10Ku 5-10 抗核小体抗体抗核小体抗体 9090 多肌炎和皮肌炎抗体谱多肌炎和皮肌炎抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%) ssDNAssDNA40-5040-50 Jo-1Jo-125-3525-35 PM-Scl (PM-Scl (重叠综合征重叠综合征) ) 8 8 Mi-2Mi-2 5 5 Ku (Ku (与硬皮病的重叠综合征与硬皮病的重叠综合征) ) 1-7 1-7 PL-7PL-7、PL-12PL-12、OJOJ、EJEJ、KJKJ 2-3 2-3 原发性干燥综合征抗体谱原发性干燥综合征抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%) SS-ASS-A 40-95 40-95 SS-BSS-B 40-95 40-95 ssDNAssDNA 40-95 40-95 进行性系统性硬化症抗体谱进行性系统性硬化症抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率 (%) (%) 着丝点着丝点 80-95 80-95 Scl-70Scl-70 25-75 25-75 ssDNAssDNA 30-60 30-60 原纤维蛋白原纤维蛋白 5-10 5-10 RNA RNA 多聚酶多聚酶 4 4 PM-Scl (PM-Scl (重叠综合征重叠综合征) ) 3 3 NOR-90 (NOR-90 (核仁形成区核仁形成区) ) 少见少见 Ku (Ku (与多肌炎的重叠综合征与多肌炎的重叠综合征) ) 1-7 1-7 可出现可出现ANAANA的感染、药物的感染、药物 疟疾疟疾 血吸虫血吸虫 结核结核 麻风麻风 沙门氏菌沙门氏菌 克雷伯菌克雷伯菌 EBEB病毒病毒 HIVHIV 肯定的药物肯定的药物 肼苯哒嗪肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺普鲁卡因酰胺 异烟肼异烟肼 可能的药物可能的药物( (近近8080种）种） 米诺环素米诺环素 SASPSASP Etanercept, Etanercept, InfliximabInfliximab 可出现可出现ANAANA的肝病的肝病 慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎 原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化 自身免疫肝炎自身免疫肝炎 自身免疫胆管炎自身免疫胆管炎 可出现可出现ANAANA的肺病的肺病 特发性肺纤维化特发性肺纤维化 石棉导致的纤维化石棉导致的纤维化 原发性肺动脉高压原发性肺动脉高压 可出现可出现ANAANA的肿瘤的肿瘤 白血病白血病 黑色素瘤黑色素瘤 实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌 、肺癌、肾癌）、肺癌、肾癌） 淋巴瘤淋巴瘤 可出现可出现ANAANA的血液病的血液病 特发性血小板减少性特发性血小板减少性 紫癜紫癜 自身免疫性溶血性贫自身免疫性溶血性贫 血血 可出现可出现ANAANA的内分泌的内分泌 病病 1 1型糖尿病型糖尿病 GraveGrave病病 HashimotoHashimoto甲状腺炎甲状腺炎 RARA自身抗体谱及临床意义自身抗体谱及临床意义 RF 60RA中出现，量与RA活动性及 严重性呈正相关。亦在其它CTD出现 抗CCP 在50RA中出现（聚角蛋白微丝 蛋白）特异性较高 AKA（抗角蛋白抗体）在40RA阳性 APF（抗核周因子）在52RA阳性 抗RA33RA阳性率为35 抗Sa在部分RA阳性 类风湿因子（类风湿因子（RF)RF) 抗原：变性的抗原：变性的IgG FcIgG Fc段段 意义意义 RARA阳性率阳性率70%70%，阳性预测值，阳性预测值24%24%。 滴度与疾病活动平行滴度与疾病活动平行 其他风湿病可阳性其他风湿病可阳性 感染、非感染疾病、正常人可阳性感染、非感染疾病、正常人可阳性 非风湿病中的非风湿病中的RFRF 状状态态态态RFRF频频频频率（率（% %） 年年龄龄龄龄（6060）5-25%5-25% 感染感染细细菌性心内膜炎菌性心内膜炎25-5025-50 乙型或丙型肝炎乙型或丙型肝炎 20-7520-75 结结核核 8 8 梅毒梅毒1313 寄生虫病寄生虫病20-9020-90 麻麻风风5-585-58 病毒感染病毒感染15-6515-65 肺病肺病结节结节 病病3-333-33 肺肺间质纤维间质纤维 化化10-5010-50 矽矽肺肺30-5030-50 石棉肺石棉肺3030 各种各各种各样样样样疾病疾病原原发发性胆汁性肝硬化性胆汁性肝硬化45-7045-70 恶恶性性肿肿瘤瘤5-255-25 多次免疫接种后多次免疫接种后10-1510-15 抗核周因子抗核周因子-(-(APF)APF) 靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中 间接免疫荧光法检测间接免疫荧光法检测 对对RARA诊断的特异性高达诊断的特异性高达90%90%以上以上 APFAPF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤 其对其对RFRF阴性的患者）阴性的患者） 抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体- -（AKAAKA） 取取6 6周龄雄性周龄雄性WistarWistar大鼠的中大鼠的中1/31/3食道切片为食道切片为 底物底物 间接免疫荧光法间接免疫荧光法 以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为 阳性阳性 对对RARA诊断的敏感性诊断的敏感性44.13%44.13%、特异性、特异性89%89% 与与RARA的病情严重程度相关的病情严重程度相关, ,提示预后不良提示预后不良 抗抗 Sa Sa 抗抗 体体 新鲜胎盘提取新鲜胎盘提取 免疫印迹法免疫印迹法 分子量为分子量为5050和和/ /或或55KD55KD部位出现条带者为部位出现条带者为 阳性阳性 敏感性敏感性 36.7%36.7%、 特异性特异性 91.6%91.6% HLA-DR4HLA-DR4相关是慢性、严重相关是慢性、严重RARA的早期标记的早期标记 RARA的滑液中也有高浓度的抗的滑液中也有高浓度的抗SaSa抗检出，抗检出， 提示在滑膜可能发生原位免疫反应提示在滑膜可能发生原位免疫反应 抗抗RA33/36RA33/36抗体抗体 从从HelaHela细胞或细胞或EhrilichEhrilich瘤细胞核中提取瘤细胞核中提取 免疫印迹法免疫印迹法 分子量分子量3333或或36KD36KD区带出现阳性者为阳性区带出现阳性者为阳性 敏感性敏感性 35.8%35.8%、特异性、特异性 99.6%99.6% 抗环瓜氨酸多肽抗环瓜氨酸多肽(CCP)(CCP)抗体抗体 19981998年年 证实抗证实抗filaggrinfilaggrin相关抗体识别相关抗体识别 的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸 20002000年年 合成环瓜氨酸肽（合成环瓜氨酸肽（CCPCCP），并将），并将 抗抗CCPCCP抗体用于抗体用于RARA检测检测 ELISAELISA法检测法检测 对对RARA诊断高度敏感和特异诊断高度敏感和特异 阳性者骨破坏较阴性者严重阳性者骨破坏较阴性者严重 对对RARA的早期诊断和预后评估都很有意义的早期诊断和预后评估都很有意义 抗抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶肽酰基精氨酸脱亚氨酶( (PADI4)PADI4)抗体抗体 RARA抗抗PADI4PADI4抗体阳性率为抗体阳性率为47%,47%, 抗抗PADI4PADI4抗体对抗体对RARA诊断的敏诊断的敏 感性为感性为43%,43%,特异性为特异性为92%92%。 RFRF阴性患者阴性患者PADI4PADI4抗体阳性抗体阳性 50%;AKA50%;AKA阴性的患者阴性的患者PADI4PADI4抗体阳性抗体阳性43%;43%;抗抗CCPCCP 抗体阴性的患者抗抗体阴性的患者抗PADI4PADI4抗体阳性抗体阳性60%60%。 抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)(MCV)抗体抗体 136136例例RARA患者抗患者抗MCVMCV抗体敏感性和特异性分别抗体敏感性和特异性分别 为为95.6%95.6%和和80.8%80.8%。 抗抗MCVMCV抗体与抗抗体与抗CCPCCP抗体、抗体、AKAAKA和和RFRF的重叠阳性的重叠阳性 率分别为率分别为91.9%91.9%、52.8%52.8%和和76.5%76.5%。 血管炎相关抗体 cANCAcANCA 靶抗原：靶抗原：PR-3 (PR-3 (蛋白酶蛋白酶3 3 pANCApANCA 靶抗原：靶抗原：MPO(MPO(髓过氧化酶髓过氧化酶) ) 弹性蛋白酶弹性蛋白酶 乳铁蛋白乳铁蛋白 WegenerWegener肉芽肿肉芽肿 其量指示病情活动其量指示病情活动 其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性 肠病肠病 抗丝氨酸蛋白酶（抗丝氨酸蛋白酶（PR3)PR3)抗体抗体 抗原：丝氨酸蛋白酶（抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3PR3） 意义意义 主要出现在主要出现在WegnerWegner肉芽肿和显微镜下多动脉肉芽肿和显微镜下多动脉 炎炎 在在WegnerWegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCAcANCA 持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关 (2/3)(2/3)。 针对蛋白酶针对蛋白酶3 3的的cANCAcANCA的意义的意义 疾病频率（%） Wegeners 肉芽肿90 显微镜下多动脉炎50 结节性多动脉炎5-10 变应性肉芽肿性血管炎10 过敏性血管炎Rare 光敏性紫癜Rare IgA肾病Rare 感染后肾小球肾炎Rare 系统性红斑狼疮Rare 川崎病+ 对照 抗髓过氧化物酶（抗髓过氧化物酶（MPOMPO）抗体）抗体 抗原：髓过氧化物酶（抗原：髓过氧化物酶（MPOMPO） 意义意义 可出现于多种血管炎性疾病。可出现于多种血管炎性疾病。 也可见于也可见于SLESLE、药物等、药物等 针对针对MPOMPO的的pANCApANCA的意义的意义 疾病频率（%） 显微镜下多动脉炎50-70 特发性坏死性肾小球肾炎50-85 变应性肉芽肿性血管炎70-85 Goodpasture综合征10-30 Wegener肉芽肿5-10 结节性多动脉炎+ 多血管炎重叠+ 系统性红斑狼疮+ 肼苯哒嗪诱导的肾炎+ 川崎病+ cANCA(cANCA(胞浆型胞浆型, , 丝氨酸蛋白酶丝氨酸蛋白酶) ) pANCA (核周型） 1、髓过氧化物酶 2、弹力酶 3、组织蛋白酶G 4、乳铁蛋白 5、溶酶体 6、细菌增透蛋白 7、Azurocidin 8、 原发性胆汁性肝硬化抗体谱原发性胆汁性肝硬化抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率 (%)(%) AMA M2 AMA M2 85-95 85-95 AMA M4 AMA M4 40-60 40-60 AMA M9 AMA M9 35 35 Sp-100 ( Sp-100 (核点核点) ) 30 30 肌动蛋白肌动蛋白 10-20 10-20 AMA M2AMA M2 靶抗原靶抗原: :由由3 3种不同的乙酰基转移酶种不同的乙酰基转移酶 组成的多酶复合物：组成的多酶复合物： - -丙酮酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶(74 (74 kDa)kDa) -2- -2-酮酸脱氢酶酮酸脱氢酶 (50 (50 kDa)kDa) -2- -2-酮戊二酸脱氢酶酮戊二酸脱氢酶(50(50kDa)kDa) 与丙酮酸脱氢酶复合物相关与丙酮酸脱氢酶复合物相关 的蛋白的蛋白X(52 kDa)X(52 kDa) 相关疾病相关疾病: : PBC:PBC: 85% - 95% 85% - 95% 自身免疫性肝炎抗体谱自身免疫性肝炎抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%) 肝特异性蛋白肝特异性蛋白( (LSP)LSP) 50-100 50-100 肝细胞膜抗原肝细胞膜抗原 ( (LMA)LMA) 35-100 35-100 唾液酸糖蛋白受体唾液酸糖蛋白受体 80-9080-90 肌动蛋白肌动蛋白 40-90 40-90 ANAANA 30-40 30-40 核膜核膜 ? ? SLA/LPSLA/LP 15-30 15-30 肝肾微粒体肝肾微粒体 ( (LKM-1)LKM-1) 7 7 LC-1LC-1 ? ? 抗磷脂抗体抗磷脂抗体(APA)(APA) APAAPA定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合 物的自身或同种抗体。物的自身或同种抗体。 APAAPA的检测方法：的检测方法：ELISAELISA法法ACLACL LAC LAC的检测方法：的检测方法： 白陶土凝血时间白陶土凝血时间 激活的部分凝血活酶时间激活的部分凝血活酶时间 复钙凝血时间复钙凝血时间 鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。 所测得时间延长所测得时间延长, ,而不能为正常血浆所纠