盐酸小檗碱抗实验性心律失常的研究

目的 观察盐酸小檗碱对快速型室性心律失常的治疗作用。方法 采用氯仿诱导小鼠的室 性心律失常模型和结扎大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常模型，利用 BL420 生物 机能实验系统持续监视动物导联心电图，预先给药 10 d 后，观察盐酸小檗碱对各种室性 心律失常的治疗作用。结果 氯仿诱导小鼠的室性心律失常模型中，盐酸小檗碱高剂量组 (240 mg/kg)室颤发生率降低 40,室颤持续时间缩短（12.19.6）s vs （18.813.3）s ， 存活时间明显延长（170.2102.3）s vs（100.552.8）s ，与空白对照组比较差异有统 计学意义（P0.05 或 P0.01） ；结扎大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常模型中， 盐酸小檗碱高剂量组（200 mg/kg）降低了缺血期内室速、室颤的发生率，缩短了室颤的持 续时间（60.720.9）s vs（123.432.1）s ，与模型组比较差异有统计学意义 （P0.05） 。结论 盐酸小檗碱对快速型室性心律失常具有良好的对抗作用。 【关键词】 小檗碱；心律失常；氯仿；心肌缺血再灌注 盐酸小檗碱（berberine,BER，黄连素）对各种心律失常具有较高显效率1 。临床使 用其他抗心律失常药物常因副作用多，不能长期服用等缺点被迫停药，而 BER 口服几乎无 不良反应，价格低廉。因此本实验采用氯仿导致小鼠心律失常和结扎大鼠左冠状动脉前降 支复制缺血性心律失常模型，探讨 BER 对快速型室性心律失常的治疗作用和机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验试剂和仪器 BL420 生物机能实验系统（成都泰盟） ，胺碘酮（上海信谊九福药业有限公司） ，盐 酸小檗碱（陕西昂盛生物有限公司，纯度99） ，羧甲基纤维素钠（上海医药集团有限公 司） ，氯仿（北京化工厂） 。 1.1.2 实验动物 ICR 小鼠，体重 3540 g，合格证号：SCXK(吉)20070003；Wistar 大鼠，体重 220250 g，雄性，合格证号：20030001，均由吉林大学动物中心提供。 1.2 方法 1.2.1 氯仿诱导小鼠室性心律失常模型的建立 动物分组和给药 将 ICR 小鼠按体重随机分为空白对照组，BER 低、中、高剂量组(剂量分别 60、120、240 mg/kg)，阳性对照药胺碘酮(amiodarone,AMI)组(剂量为 100 mg/kg)。每组 20 只，雌雄各半。空白对照组给予生理盐水，各药均按 0.1 ml/10 g 容积灌胃给药，预先给药 10 d。 模型建立2 将小鼠用水合氯醛麻醉后，仰位固定，用 BL420 生物机能实验系统持续记录导联 正常心电图，然后将小鼠头部放入含有 34 ml 氯仿棉球的 100 ml 三角烧瓶中(每换一鼠加 氯仿 1.0 ml),直至心搏停止，计算室速（VT） 、室颤(VF)发生率，持续时间和存活时间。 1.2.2 结扎大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常模型 动物分组和给药 将雄性 Wistar 大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、BER 低、高剂量组(剂量分别 100、200 mg/kg)，阳性对照药 AMI 组(剂量为 80 mg/kg)，每组 8 只。假手术组及模型组给 予生理盐水，各药均按 0.5 ml/100 g 灌胃，预先给药 10 d。 模型建立3 20%乌拉坦溶液（5 ml/kg）腹腔注射麻醉后，连接 BL420S 生物机能实验系统心电 导线，记录导联心电图。颈部正中开口，分离右侧颈总动脉，动脉插管后连接压力换能 器，记录动脉血压，气管插管。开胸后接小动物人工呼吸机（潮气量 610 ml，呼吸比 12，呼吸频率 60 次/min） ，剪开心包膜，在肺动脉圆锥和左心耳之间，平左心耳下缘寻 找左冠状动脉前降支，在其下穿线，待呼吸、血压平稳 15 min 后，将结扎线从 PE 管（直 径 2 mm）中间穿出，用 PE 管一端阻断冠状动脉血流，另一端用动脉夹固定。缺血 30 min 后，松开动脉夹，再灌注 30 min。缺血成功的标志为导联 R 波增宽，ST 段抬高，动脉 血压下降 2030。再灌注成功的标志为抬高的 ST 段下降 50%以上，动脉血压升高。 假手术组开胸，冠状动脉下穿线不结扎。观察缺血 30 min 内和再灌注 30 min 内室性心律 失常的发生率及持续时间。 心律失常的评价4，5 室性期前收缩（PVC）为心室的单个异位节律，VT 为连续 4 个或 4 个以上的 PVC,VF 为不能区分单个的 QRS 波群和计数心率，常伴有血压迅速下降至 0 mmHg。VT 和 VF 的 持续时间为在缺血期内发生所有 VT 和 VF 的平均时间。 1.3 统计学方法 组间比较采用 Studentst 检验，发生率的比较采用 Fishers 确切几率检验。 2 结果 2.1 BER 对氯仿导致室性心律失常的影响 与空白对照组比较，BER 各剂量组 VT 的发生率未见明显降低，但持续时间缩短，其 中 BER 中、高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义（P0.01,P0.05） ；VF 发生率 随 BER 剂量的增加逐渐降低，BER 高剂量组 VF 发生率较空白对照组降低了 40，持续 时间缩短，存活时间延长，与空白对照组比较差异有统计学意义（P0.05 或 P0.01） 。 阳性药 AMI 组 VT、VF 发生率降低、持续时间缩短，存活时间延长，与空白对照组比较 差异均有统计学意义（P0.01） 。见表 1。表 1 BER 对氯仿诱导室性的心律失常的影响 (略) 2.2 BER 对结扎大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常的影响 BER 低剂量组降低了 VT、VF 的发生率，缩短了持续时间，但与模型组比较无显著性 差异。BER 高剂量组明显降低 VT 的持续时间、VF 的发生率和持续时间，与模型组比较 差异有统计学意义（P0.05） 。阳性药 AMI 组 VT、VF 发生率降低、持续时间缩短，与模 型组比较差异均有统计学意义（P0.01） 。见表 2。表 2 BER 对结扎大鼠左冠状动脉前降 支诱导心律失常的影响(略) 3 讨论 本实验采用氯仿诱导小鼠心律失常模型，观察 BER 对 VF 的治疗作用。文献报道小鼠 吸入氯仿后 VF 阳性率与体重相关，随体重增长 VF 阳性率增加，体重为 1822 g 小鼠 VF 阳性率为 40%60%；2535 g 为 80%；3645 g 为 80%100%2 。因此，本实验选用 小鼠平均体重超过 35g，VF 阳性率为 90，保证了 VF 的发生率。生理盐水组小鼠吸入氯 仿后，最早在 20 s 内即出现 VT，30 s 内出现 VF,多数小鼠在 12 min 内死亡。BER 高剂 量组明显减少了 VF 发生率和持续时间，明显延长死亡时间。有报道认为氯仿诱导心律失 常的机制为增加肾上腺素的敏感性，因此 BER 抗 VF 作用可能与降低心脏对肾上腺素的敏 感性有关。 结扎大鼠左冠状动脉前降支后，5 min 开始出现心律失常，最初的心律失常以 PVC 多 见，720 min 内心律失常频繁出现，以二联律、三联律、VT 和 VF 多见，大多数 VF 可 自行恢复窦性节律，少数不恢复的 VF 为致死性 VF，是导致大鼠死亡的主要原因。缺血 30 min 后进行再灌注，仅在开始再灌注的 05 min 出现少量的心律失常，因此本研究主要 考察 BER 对急性心肌缺血时缺血期心律失常的影响。结果表明大鼠预先灌胃给予 BER 治 疗 10 d 后，BER 高剂量组明显减少了急性心肌缺血时室性心律失常的发生率和持续时间， 增加了大鼠对缺血期 VT 和 VF 的耐受能力。心肌缺血时导致的心律失常主要与氧自由基 损伤有关5 。有文献报道 BER 可通过抑制氧化应激改善 STZ 诱导的糖尿病大鼠的肾损 伤6 。黄连解毒汤能提高胰岛素抵抗大鼠肝脏线粒体中 GSHPx、SOD 活力，抑制 MDA 生成7 。因此推断 BER 有可能抑制了心肌缺血时氧自由基的大量产生从而起到治 疗心律失常作用。另外，有研究者采用单相动作电位记录技术，记录了 BER 在兔急性缺血 状态时三层心肌单相动作电位改变，BER 可通过减弱缺血时动作电位振幅变小和 2 相平台 消失幅度以及减少早期后除极，延长心肌动作电位时程(APD)及有效不应期（ERP）,增加 ERP/APD 比值8,这些均有利于打断折返并使之不易形成，这可能是 BER 抗心律失常 的主要机制。 参考文献： 1 金倩;氯地酊联合激光治疗痤疮 158 例疗效观察J;广东医学;1997 年 10 期 2 董新亭,李卫莉,张随学;自拟粉刺消治疗痤疮 126 例J;中国中医药科技;1999 年 06 期 3 查旭山,陈修飏;寻常痤疮治疗体会J;江西中医药;/xyfm/class/.2002 年 05 期 4 张随学 ,谭正辉 ,孙叶梅 ,李梅 ,俞玉芳 ,韩峰;3003 例痤疮患者特征分析与控制对策J; 中华医学美学美容杂志;/xyfm/class/.2002 年 06 期 5 刘勇,王冬梅;痤疮的药物治疗J;临床医药实践杂志;2003 年 09 期 6 高宜云;痤疮从肝论治J;中医药临床杂志;2004 年 03 期 7 欧其平,林维山;中西医结合治疗痤疮J;中华皮肤科杂志;2004 年 09 期 8 陈五一;痤疮辨治体会J;世界中医药;/yisheng/main/index.php.2007 年 03 期 9 雷放;中药热敷治疗痤疮有效J;新中医;/book/main/index.php.1992 年 09 期 10 李东华;异维生素 A 酸治疗痤疮J;新医学 /;1993 年 10 期 11 黄灿奇;针刺联合中药内服外敷治疗青少年痤疮临床观察D;南方医科大学;2011 年 12 陈志彬;中医综合疗法对女性痤疮患者皮肤生理指标影响研究D;广州中医药大学;2011 年 13 陈传伟;针刺干预慢性疲劳综合征的临床及作用机理研究D;广州中医药大学;2010 年 14 Hamid Abdi;针刺对伊朗肥胖者的体重及抗热休克蛋白 27、60、65、70 的影响D;北京 中医药大学;/book/main/index.php.2010 年 15 陈玉骐;背俞穴刺络放血治疗痤疮的临床研究D;广州中医药大学;2009 年 16 张随学;电针镇痛的脑功能磁共振初步研究D;复旦大学;2005 年 17 庞莹;痤疮的流行病学及与雄激素受体基因多态性的相关研究D;中国医科大学;2008 年 18 申鹏飞;“醒脑开窍”针刺方法治疗卒中后抑郁症基础与临床疗效及治疗机制研究D;天 津中医学院;h