实验一 实验室环境和人体表面的微生物检查

实验 1 实验室环境和人体表面的微生物检查 一、实验目的 1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。 2、 观察不同类群微生物的菌落形态特征。 3、 比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 4、体会无菌操作的重要性。 二、基本原理 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万 个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不 同来源的样品接种于培养基上，在 37温度下培养，1 2 天内每一菌体即能通过很多次细 胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌 落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、实验器材 1、培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 2、溶液和试剂 无菌水 3、仪器和其他用品 平板，试管，灭菌棉签（装在试管内） ，试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔， 接种环，标签纸，废液缸等。 四、实验操作 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备： （1 ）称量：准确称取牛肉膏 1.8 克、蛋白胨 6.0 克、Nacl3.0 克放入烧杯中。 （2 ）熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为 600ml） ，用玻璃棒搅匀，补 充水到所需的总体积 600ml。 （3 ）调 pH：用 1mol/L NaOH 和 1mol/L HCl 进行调节，直至溶液 pH 达到 7.07.2。 （4 ）分装：将其中 300ml 溶液装入 500ml 三角瓶中，向三角瓶中加入 6.0 克琼脂，向烧杯 剩余液体中加入 6.0 克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到 10 支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的 1/5 左右。 （5 ）加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。 （6 ）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌 水的试管） ，同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。 （7 ）灭菌：将上述培养基以 0.1MPa，121，90min 高压蒸汽灭菌。 （8 ）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至 50左右，将 试管口端搁在玻璃棒或其他合 适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。 2、倒平板： 点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火 焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部， 用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入 1520ml 培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，共倒平皿 18 个。 3、微生物采集： （1 ）空气 将 6 个平板在实验室环境中移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中。5min 后，将其中 三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号，10min 后， 将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号。 （2 ）桌面 用无菌水湿润棉签，用棉签在实验台面擦拭约 2cm2 的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将 平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿， 分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。 （3 ）洗手前 用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝， 将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签， 注明日期、组别、样品来源和编号。 （4 ）洗手后 用肥皂和刷子用力刷手，在水流中冲洗干净，干燥后用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面 擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之 后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。 （5 ）硬币 用无菌水湿润棉签，用棉签擦拭硬币表面，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝， 将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签， 注明日期、组别、样品来源和编号。 4、 微生物培养： 将每一组（3 个）中编号为 1 的平板放在 28环境培养箱中培养，将编号为 2 和 3 的平板 放在 37的环境培养箱中培养，时间为一周。 5、 菌落特征描述方法： (a) 大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、 小的标准，或由教师指出一个大小范围。 (b) 颜色：黄色、金黄色、白色、乳白色、灰色、红色、粉红色等。 (c) 干湿：干燥、湿润、粘稠。 (d) 形态: 圆形、不规则等。 (e) 边缘：整齐、不整齐等。 (f) 表面：高度扁平、隆起、凹下。 五、实验报告 1、结果 （1 ）菌落描述 样品、 样品、 样品 样品 样品来源 菌落描述 菌落数 记录人 1-4-空 10-3-37 大、白、干、圆、整齐、扁平 3 李龙 1-4-空 5-2-37 小、黄、干、圆、整齐、扁平 4 商倩倩 1-4-空 10-3-37 中、淡黄、湿、圆、整齐、隆起 1 泮力菁 1-4-空 5-2-37 大、乳白、湿、不规则、锯齿、扁平 1 汤艳楠 1-4-手后-3-37 小、白、湿、圆、整齐、外凸内凹 1 泮力菁 1-4-手前-3-37 小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起 1 吴彤 （2 ）比较 1-4-空 10-37 1-4-空 5-37 1-4-洗手前 28 1-4-洗手后28 样品来源 菌落数量（总数） 种类（形态不一致） 1-4-空 10-37 22 6 1-4-空 5-37 15 6 1-4-洗手前 28 12 4 1-4-洗手后 28 9 6 （3 ）相似菌 样品来源 菌落数 菌落特征 1-4-空 5-2-37 4第 1 组 1-4-空 5-3-37 1 小、黄、干、圆、整齐、扁平 1-4-手前 -2-37 1第 2 组 1-4-手前 -1-28 1 小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起 2、思考题 （1 ）列举 23 类微生物，说明它们在本实验条件下（肉膏蛋白胨琼脂平板，37 ）不能生 长。 答：病毒，因为病毒必须寄生在其他活生物体内；厌氧细菌，肉膏蛋白胨琼脂培养基 不是无氧环境；极端环境下生存的细菌，因为肉膏蛋白胨培养基不能满足它们对环境的 需求。 （2 ）比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多，为什么？ 答：空气中的菌落数和菌落类型最多。因为细菌体积小、重量轻，很容易就悬浮于空气中， 并且由于空气中含有很多的微粒，细菌往往会结合微粒形成泡团，这种泡团又可以从空气 悬浮物中摄取水分和营养，使得细菌可以长期生存下去。 （3 ）比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌，你认为是什么原 因？ 答：洗手后细菌数量明显减少。人的一只手大约沾附有 40 多万个细菌，两只手发挥着无法 替代的拿取接送等作用。被污染的手拿取食品去吃，病菌都是经过手接送进口中去的，可 以说是“病经手入” 。所以我们一定要经常洗手。因为自来水、肥皂和刷子上都会带有细菌， 所以洗手后仍有少量细菌。 （4 ）完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中？你如何体会“微生物既 是我们的朋友又是我们的敌