中草药对双歧杆菌生长的影响

中草药对双歧杆菌生长的影响 提要本文选用 15 种传统杭衰老中药对双吱杆菌进行了体外生长促进实验。 结果发现刺五加、五味子、宁夏构祀子及阿胶对婴儿双吱杆菌有明显的促进作用。 双歧杆菌是一类多形态、无芽胞革兰氏阳性杆菌。该菌营养要求高，需要外 源性生长因子，即双歧因子。该因子能刺激双歧杆菌的生长。现已证实双歧杆菌 因子有两种，一种是含有 N 一乙酞葡萄糖胺的多聚物，另一种是寡聚糖 。 本文旨在探讨阿胶，五味子，构祀及刺五加对双歧杆菌的生长的促进作用。 100 毫升，蒸溶，备用。 1. 4 中药纸片:用国产新华 1 号滤 纸，打孔制成直径 6mm 纸片。干燥灭菌 (1200C )2 小时。每 100 张纸片加 lml 中 药液，使其浸匀，再分别置无菌平皿在 37烘干， ， 。 1 材料与方法 1. 1 主要仪器:721 分光光度计 (四川分析仪器厂)、超净工作台、厌氧培 养系统、Olympus 双目显微镜(日本)、 麦氏比浊管。 1. 2 菌株:实验所用菌株为婴儿双 歧杆菌 Bif 1104，由中国预防医学中心流 行病微生物研究所提供。实验时，取该菌 接种于 BL 肉汤和 BL 血平板，置厌氧 罐，用抽气换气法进行厌氧培养。35经 48 小时培养后，用无菌盐水洗三次，每 次 2000 X g 离心 15 分钟，用麦氏比浊管 调整菌液浓度为 1. 5 亿/ml 备用。 1. 3 中药:本试验采用的中药为阿 胶，五味子，刺五加，构祀等均购自重庆 市中药材公司。试验时，取五味子、人参、 菌灵芝、熟地、黄精、黄蔑、获等、天冬、营 蒲、何首乌、杜仲、冤丝子、刺五加、构祀 各 50 克，分别各加水 200 毫升，置 300 瓦电炉上加热煮沸 1 小时，最后浓缩制 成 100 毫升药液。取 30 克阿胶，加水 2 实验方法 2. 1 纸片法:取上述制备好的菌液 用一定大小的棉签均匀涂布于 BL 血平 板上。涂布的细菌量以不完全融合生长 为宜，然后贴上上述中药纸片，每个平皿 贴 4 片，用 1 个平皿作对照(贴有不含中 药纸片)。厌氧培养 35 0C 48 小时后，观察 细菌生长情况，涂片，革兰氏染色，油镜 镜检。 2. 2 试管法:用接种环取上述制备 菌液 2 接种环至 lOmIBL 肉汤培养基 内，然后分别加入中药浓缩液。.1 毫升， 另取一支不加中药作对照.厌氧培养 35 0C 48 小时后，观察细菌生长情况，涂 片，染色，镜检，证实为革兰氏阳性杆菌， 有分叉等后，再于 721 分光光度计比浊 测定各管光密度(波长 650mm，光径 lcm )。计算各管菌液浓度。 3 结果 3. 1 纸片法结果 经厌氧培养 350C48 小时后，发现贴 有阿胶，刺五加，五味子，构祀四味中药 中国徽生态学杂志 1996 年第 a 卷第 2 期 的纸片周围细菌生长极为茂盛，有酸臭 味，呈菌苔生长，菌苔呈灰色，平板由红 色变为巧克力色.涂片，革兰氏染色发现 上述四味中药纸片周围细菌染色典型， 菌体粗大。 3. 2 试管法结果 表 1 各味中药对双吱杆菌生长作用 的影响 光密度(OD)细菌数(mg/ml) 培养基对照 五味子 刺五加 人参 菌灵芝 熟地 0. 45 0. 23 4. 58 3. 75 0. 38 0. 42 1. 91 3. 17 0. 4 2 0. 42 3. 50 3. 50 3. 50 门 01 了 n，目 1 二 心.几月 0 UdO 曰， .二.几，目 n 乙七以 0. 14 o. zo 精蔑等冬 黄黄获夭 以 0. 百瀚 何首乌 o. o. 35 ss 杜仲 冤丝子 0. 42 0. 32 3. 50 2. s7 从以上实验结果可以看出，阿胶，五 味子，拘祀，刺五加这四味中药能促进双 歧杆菌的生长，分别比对照组高出百分 率为 75.800,50%,40.5%和 21. 7 0 o 0 4 讨论 双歧杆菌营养要求高，因此，在体外 培养中许多物质对双歧杆菌有影响. Poch”的试验表明，除青春双歧杆菌和 长双歧杆菌能在人工培基上生长外，所 有其它的双歧杆菌在体外培养中均需添 加生长促进剂. 双歧杆菌在含有牛奶的人工培养基 上生长良好， 。但 BalmerS指出，尽管 不少学者在使用牛奶代替人乳这方面作 出了许多努力，但母乳喂养与人工喂养 婴儿肠道内双歧杆菌数量仍存在较大差 别。他发现乳清有双歧因子的作用，他对 乳清、酪蛋白及人乳促进双歧杆菌生长 作用进行了实验研究。结果发现:大多数 用乳清喂养婴儿在第 14 天肠道内开始 有双歧杆菌定植，而酪蛋白组肠道内大 多数是类杆菌和肠球菌定植。提示乳清 中含有双歧因子。Balmer6，的进一步实 验发现，人乳含有的乳铁蛋白较牛奶多。 Petschow“，也用体外实验研究了人 乳、牛奶乳清蛋白和酪蛋白水解物对双 歧杆菌的生长促进作用。发现双歧杆菌 的生长促进作用直接与乳清中特异因子 的浓度相关。 Bezkorvainye，发现柠檬酸、血清转 铁蛋白、苹果酸、秋水仙碱、氟醋酸盐、鱼 腾酮等对双歧杆菌的生长没有影响，而 氰化物、叠氮化物、24 一二硝基苯酚、血 红蛋白、血红素等对双歧杆菌生长有抑 制作用。进一步研究发现:铁离子是双歧 杆菌生长所必需的营养成份，铁叶琳系 统在双歧杆菌代谢过程中发挥着重要作 用。双歧杆菌生长还需要锰、锌和铜离 子，这些金属离子对双歧杆菌的生长起 关键作用。牛酪蛋白消化液和酵母浸出 液对所有双歧杆菌的生长都有促进作 用。因此有人已从酪蛋白水解物中分离 出了双歧因子匕， ， 。 药物化学和药理学研