转录因子dlx4与emt相关蛋白在乳腺癌中表达与意义研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 转录因子 DLX4 与 EMT 相关蛋白在 乳腺癌中表达与意义研究 【中图分类号】R737 【文献标 识码】A 【文章编号 】2095- 6851（2018）02-0-01 中国论文网 /1/view-13035915.htm 对于女性群体来说，乳腺癌是非 常常见的一种危害极大的恶性肿瘤，乳 腺癌居女性恶性肿瘤发病中发病率非常 高的位置，导致女性身心健康受到严重 的影响，甚至严重的危及到患者的生命。 癌基因是转录因子 DLX4 最明显的特征， 上皮细胞间质转化 EMT 相关蛋白主要 包括两个，第一个是 E-cadherin，第二 个是 vimentin，其主要与以下两个因素 相关：乳腺癌侵袭和乳腺癌转移。本次 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 研究收集乳腺癌以及对应癌旁组织标本 各 200 件作为分析主体，分析在乳腺癌 组织中转录因子 DLX4 与 EMT 相关 蛋白的表达以及意义。详细如下所示： 1 资料选择以及方法 1.1 资料选择 选取 2015 年 1 月 到 2017 年 12 月期间，选择各 200 例乳 腺浸润性导管癌标本（100 例乳腺癌以 及 100 例癌旁组织标本）作为分析主体， 分析其病理分级情况得到：有 68 例 级例数；有 92 例级例数；有 40 例 级例数。 1.2 纳入标准 都需要进行病理学 专家确诊，确诊之后结果为乳腺浸润性 导管癌或者是癌旁组织；均没有接受过 经放治疗以及化疗治疗； 存在完整的患者随访资料以及数 据。 1.3 试剂的准备 自北京中杉金桥 公司购 SP 法进行免疫组化，严格按试 剂盒说明书完成具体操作步骤1。在 Santa Cruz 公司购取以下试剂：鼠抗单 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 克隆抗体 -actin 试剂、羊抗单克隆抗体 DLX4 试剂。在北京中杉金桥公司购取 以下试剂：兔抗单克隆抗体 vimentin 试 剂、鼠抗单克隆抗体 E-cadherin 试剂。 在 ATCC 细胞库购取以下细胞：乳腺癌 细胞系 MDA-MD-231。使用 SP 法进行 免疫组化的情况：完成脱蜡水化以及抗 原修复，完成一抗的滴加，保持温度为 4，储存过夜，进行有效的 PBS 洗涤 操作，进而完成二抗的滴加，进行 PBS 洗涤，使用 DAB 完成显色工作，在完 成苏木精复染之后则使用双蒸水进行洗 涤，之后进行进一步的脱水工作、透明 工作以及封固工作。 1.4 方法 1.4.1 乳腺癌胞系 MDA-MD- 231 细胞的培养 在完成细胞收集之后， 完成裂解液的添加，实现蛋白的添加， 添加样缓冲液，对其混合混匀，之后煮 沸，转性处理，在室温进行静置，在完 全冷却之后，需要将其置放于零下 20 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 的环境下进行存备使用。之后分离使用 10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，实现硝 酸纤维素（NC）膜的转移，之后使用 5%脱 脂牛奶进行一个小时的封闭处理，并且 分别加入以下试剂：12 000 比例的鼠 抗 -actin 单克隆抗体试剂；11 000 比 例的兔抗 vimentin 试剂；11 000 比例 的鼠抗 E-cadherin 试剂； 1500 比例的 羊抗 DLX4 试剂。之后将其处于 4的 环境下，需过夜，在第二天，完成三次 的洗膜处理，添加 12 000 比例的二抗 HRP，将其处于 37的环境下完成两个 小时的反应，之后完成三次的洗膜处理， 之后进行 NBT/BCIP 显色处理，对其进 行水洗，完成反应的终止。使用图像处 理仪完成扫描工作，半定量分析使用的 是 Image J 软件。 1.4.2 免疫组化 使用免疫组化 SP 法染色。vimentin 于胞质表达。 DLX4 阳性信号主要指的是棕黄色信号 或者是棕褐色信号，于细胞膜表达。E- cadherin 阳性信号主要指的是棕黄色信 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 号，于细胞膜表达2。 2 结果 2.1 DLX4、E-cadherin 以及 vimentin 在乳腺癌和癌旁组织中的表达 分析得到：乳腺癌组织的 DLX4 的表达、vimentin 的表达的阳性率均高 于癌旁组织；同时，E-cadherin 的表达 低于癌旁组织的阳性率表达。 2.2 DLX4、E-cadherin 的表达、 vimen-tin 在乳腺癌细胞系中的表达 检测乳腺癌细胞选择使用 Western blot 检测方法，在完成检测之 后得到以下的结果： 选择的是乳腺癌细胞系，分析 DLX4 在 MDA-MD-231 细胞的表达情 况，DLX4 在该细胞的中为高表达，而 在 MDA-MD-231 细胞中 E-cadherin 得 到的结果是低表达，而 vimentin 则呈现 一个高表达的结果。 3 结论 EMT 具有非常显著的特征，那 就是 E-cadherin（上皮性标志物）表达 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 下调，同时还存在 vimentin（充质蛋白） Fibronectin（充质蛋白）表达升高的情 况。然而，EMT 具有的最为主要的一 个特征就是降低的 E-cadherin 表达结果， 并且还存在 vimentin 表达结果升高的情 况3。 在完成本次研究之后发现，在乳 腺癌组织中，DLX4 的结果是高表达的 情况，如果是在高侵袭性的癌细胞系中 则结果为高表达，如果是在低侵袭性癌 细胞系中结果则是低表达。综上所述， 转录因子 DLX4 跟 E-cadherin 在乳腺浸 润性导管癌中的表达结果为两者之间负 相关，同时 DLX4 跟 vimentin 表达之间