电针刺激对脑缺血再灌注大鼠学习和记忆能力的影响

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 电针刺激对脑缺血再灌注大鼠学习 和记忆能力的影响 摘要 目的 研究 X 缺血再灌 注大鼠应用电针刺激对其学习记忆能力 的影响，为临床治疗缺血性脑卒中提供 依据。 方法 采用随机数字表法将 SPF 级雄性大鼠 45 只随机分成三组（n = 15）：模型组、电针组、假手术组。模 型组及电针组制作全脑缺血再灌注损伤 模型，电针组进行电针刺激，假手术组 除术中不阻断大脑中动脉血流外，其余 操作与模型组相同。采用 Morris 水迷宫 对大鼠的学习记忆能力进行评估，记录 其不同时间段逃避潜伏期及穿越平台次 数；Nissl 染色计数残存的 CA1、CA3 区神经元细胞数目。 结果 模型组逃避 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 潜伏期明显长于假手术组，穿越平台次 数明显多于假手术组，两组比较差异有 统计学意义（P 中国论文网 /6/view- 12954678.htm 关键词 电针刺激；脑缺血再灌 注；学习记忆能力 中图分类号 R254.31 文献标识 码 A 文章编号 1673-7210（2017） 12（a）-0070-04 Abstract Objective To study the influence of electroacupuncture stimulation on learning and memory ability in rats with cerebral ischemia- reperfusion injury， and to provide evidence for the clinical treatment of ischemic stroke. Methods Forty-five SPF male rats were divided into 3 groups （n = 15）： model group， electroacupuncture group and sham operation group according to the random number table. The model group and electroacupuncture group were used to -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 make the model of total cerebral ischemia- reperfusion injury. The electroacupuncture group was stimulated by electroacupunture， and the operation group did not block the blood flow in the middle of the cerebral artery， and the remaining operations were in the same with model group. The learning and memory ability of rats was assessed using Morris water maze， and the escape latency and the number of crossing the platform during different time periods were recorded； Nissl staining was used to count the number of neurons in CA1 and CA3. Results Compared with the sham operation group， the escape latency in the model group was prolonged significantly， and the frequency of crossing the platform was increased significantly （P 0.05）. Compared with the model group， the escape latency in the electroacupuncture group -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 was shortened， and the frequency of crossing the platform was decreased significantly （P 0.05）. Compared with the sham operation group， the number of neurons for CA1 and CA3 in the model group was decreased （P 0.05）. Compared with model group， the number of neurons in the electroacupuncture group was increased （P 0.05）. Conclusion Electroacupuncture can improve learning and memory ability in cerebral ischemia rats， speculates that the mechanism may be related to its hippocampal nerve protective effect on cerebral ischemia reperfusion rats. Key words Electric needle stimulation； Cerebral ischemia reperfusion； Learning and memory ability 学习记忆是大脑中最基本、 最重要的高级神经功能之一，大量的实 验数据显示边缘系统中的海马与学习记 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 忆有着密不可分的关系1-2。海马中存 在的许多和学习记忆有关的化学物质， 如胆碱复合物、单胺类、肽类激酶等均 参与学习记忆。大量的数据资料显示， 针刺对改善缺血性脑损伤有着较为显著 的治疗效果，尤其对于超早期介入的缺 血性脑损伤动物3。目前观点认为，脑 缺血再灌注可降低迟发性神经元损伤和 学习记忆功能4。现代医学研究表明电 针法治疗缺血性脑损伤效果明显优于传 统针灸治疗法。但目前关于其机制的研 究不多，尚缺乏统一的结论。本研究选 取大鼠海马区作为研究对象，探讨电针 对缺血性脑梗死大鼠模型学习记忆能力 的影响，分析其作用机制，为临床治疗 卒中相关疾病提供依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 SPF 级雄性大鼠 45 只，饮食自 由，体重 190220 g，1113 周龄，使 用许可证号：SCXK （陕） 2016-0010， 分笼饲养，温度 22左右，噪音60 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 dB，换气次数 1020 次/h，环境亮度 12 h 亮/12 h 暗交替。动物均来源于宝鸡 职业技术学院实验动物中心，在上述条 件下饲养 3 d。采用随机数字表法将大 鼠随机分成三组（n = 15）：模型组、 电针组、假手术组。本研究经动物伦理 委员会审批通过。 1.2 主要试剂和仪器 Nissl 染色液：上海哈灵生物科 技有限公司，批号 173302；RhoA 一抗 （批号 170109） 、-actin 一抗（批号 170309） 、辣根过氧化物酶二抗（批号 170111）均来源于 Sigma 公司。 日立全自动生化分析仪 7600（罗 氏） ；Morris 水迷宫：上海欣软信息科 技有限公司；Image Lab3.0 图像分析系 统：BIO-RAD 公司。 1.3 各组处理及干预方法 大鼠全脑缺血再灌注损伤模型的 建立：造模前所有大鼠均禁食不禁水 12 h。模型建立采用血管阻断法腹腔注射 80 mg/kg 异丙酚麻醉，于大鼠脊背颈中 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 切口，充分暴露颈总动脉、颈外动脉、 颈内动脉，在颈总动脉结扎处剪开一 0.1 cm 小口，将栓线缓慢插入动物的颈 内动脉，深度为 20 mm 左右。将事前 放置好的颈内动脉血管夹撤出，缓慢推 动栓线至大脑前动脉。2 h 后回抽栓线 至颈总动脉分叉处，造成大鼠缺血再灌 注。造模后放置动物于室温环境下苏醒， 正常喂养。其中，依据大鼠神经功能评 分标准3评价造模成功与否：0 分，大 鼠无任何不对称活动；1 分，拎尾巴时 大鼠左前爪不能完全自由地伸展，左前 肢活动障碍明显；2 分，左前肢紧贴胸 壁，左侧转弯明显；3 分，伴有明显的 左前爪后推，活动仅能围绕原点向左转 圈；4 分，左侧肢体完全不能支撑身体 重量，仅能左侧躺。评分在 23 分者 定为造模成功。 各组干预方法：模型组制作脑缺 血再灌注损伤模型；假手术组只分离动 脉，不结扎、插线，其余操作均同模型 组；电针组在动物模型的基础上进行电 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 针刺激干预，具体操作为：电针刺激前 用脑立体定位仪器固定动物。选取百会 印堂腧穴，以 30 号针刺入 0.10.2 cm 后连接 XS-998 电针针灸仪的输出电极 上。选用频率为 3050 Hz 等波幅的交 替疏密波。电针治疗操作于术后第 3 天 开始，以后 1 次/d，每次半小时，共干 预 1 周。 1.4 观察及材料制备 采用 Morris 水迷宫检验学习记忆 能力。将大鼠按顺时针方向从第一、二、 三、四象限依次放入池壁，记录 2 min 内逃避潜伏期，定位航行试验 1 次/d， 总共 7 d，前 2 d 为训练，不统计数据， 逃避潜伏期从第 3 天开始进行。第 8 天进行空间搜索试验，Morris 水迷宫中 央的平台撤掉，然后选某一相同象限的 同一入水点（本研究选择第一象限）将 实验大鼠随机放入迷宫，测定大鼠经过 平台次数。 记录各组大鼠海马 CA1、CA3 区 存活神经元数。Morris 水迷宫试验后， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 各组动物麻醉后开胸，生理盐水 200 mL 经左心室快速冲洗后将脑缺血区进 行定位，用 4% pH=7.4 的多聚甲醛 400 mL 灌流固定，4固定 2448 h。常 梯度酒精脱水，二甲苯脱蜡石蜡包埋， 冠状切片（片厚 5 m） ，Nissl 染色液染 色，封片采用中性树脂进行。于高倍镜 视野下随机选 2 个视野（400） ，统计 CA1、CA3 区神经元细胞数，最终值取 2 个视野的平均值。 1.5 统计学方法 用 SPSS 18.0 统计软件进行数据 分析，符合正态分布且方差齐的计量资 料，以均数标准差（xs）表示，组间 两两比较采用 SNK-q 检验，多组间均 数比较采用 2 检验。以 P 0.05 为差 异有统计学意义。 2 结果 45 只大鼠在实验干预的过程中均 无死亡。 2.1 三组大鼠不同时间段逃避潜 伏期及穿越平台次数比较 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 模型组逃避潜伏期较假手术组延 长，穿越平台次数较假手术组增多，差 异有统计学意义（P 0.05） ；电针组逃 避潜伏期时间较模型组缩短，穿越平台 次数较模型组减少，差异有统计学意义 （P 0.05 ） 。见表 1。 2.2 各组大鼠海马 CA1、CA3 区 存活神经元数比较 模型组大鼠海马 CA1、CA3 区神 经元较假手术组明显减少，电针组较模 型组明显增多，差异均有统计学意义 （P 0.05 ） 。见表 2。 3 讨论 缺血性脑血管病是严重威胁人类 健康的高发病。中医辨证学认为气血是 脑生长发育、发挥多种功能的物质基础， 而气血失常是导致脑病发生的主要病理 病机4-5 。针灸具有调补气血的功效， 同时其抗氧化应激能力可减弱脂质过氧 化反应，保护脑内皮细胞，促进循环灌 流，从而减轻脑组织损伤，改善脑缺血 再灌注损伤的不良症状6-9。针刺干预 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 11 可激发动物脑组织产生抗缺血缺氧的活 性物质，此类活性物质可明显提高组织 器官尤其是脑组织的抗缺血缺氧能力， 减轻脑缺血损伤后病理损伤程度，达到 改善缺血缺氧损伤、治疗疾病的目的 10-14。 中医学辨证施治的理 论认为，百会属督脉，是阳脉之海，元 神之府，行于脊柱而上行入脑。百会穴 位于巅峰，为督脉之穴，可补气益智， 协调百脉，疏通脑络，具有健脑宁神、 安神定魄、增强记忆的功效是治疗很多 疾病的首选穴，医学研究价值很高15- 19。印堂具有活血化瘀、救逆止抽的 功效。百会穴、印堂属于经外奇穴，具 有宁心安神、明目通鼻的功效20-25。 本研究结果显示，模型组逃避潜伏期较 假手术组明显延长，穿越平台次数增多， 可见实验动物造模成功，已达到脑缺血 再灌注状态；