芒柄花黄素对大鼠局部脑缺血再灌注损伤保护作用的初步研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 芒柄花黄素对大鼠局部脑缺血再灌 注损伤保护作用的初步研究 摘要 目的 探讨芒柄花黄素对 大鼠脑局部缺血再灌注损伤的神经保护 作用。 方法 采用随机数字表法将 42 只 SD 雄性大鼠分为假手术组、缺血再 灌注组和芒柄花黄素组，每组 14 只。 芒柄花黄素组腹腔注射芒柄花黄素溶液 20 mg/kg，假手术组和缺血再灌注组注 射等剂量生理盐水，连续 7 d。线栓法 复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型， 缺血时间 1.5 h。再灌注后 24 h 各组分 别进行神经功能缺损测定；干/湿重法检 测脑水肿程度；2，3，5-氯化三苯基四 氮唑（TTC）染色计算脑梗死体积并检 测血浆超氧化物歧化酶（SOD）活力、 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 丙二醛（MDA）水平。 结果 与缺血 再灌注组比较，芒柄花黄素组大鼠神经 功能缺损评分降低，第二脑片梗死体积 和第三脑片水肿程度减轻，血浆 SOD 活性提高，MDA 水平下降，差异均有 统计学意义（P 中国论文网 /6/view- 12954714.htm 关键词 芒柄花黄素；脑缺血再 灌注损伤；植物雌激素；神经功能缺损 中图分类号 R743 文献标识码 A 文章编号 1673-7210（2017） 11（b）-0008-04 Abstract Objective To investigate the protective effect of formononetin on local cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. Methods According to the random number table method， 42 male SD rats were divided into sham group， ischemia-reperfusion group and formononetin group， with 14 rats in each group. The formononetin group was given formononetin solution 20 mg/kg by -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 intraperitoneal injection， the sham group and ischemia-reperfusion group were injected with same dose of normal saline， for 7 days. Suture-occluded method was used to copy the model of rats with cerebral ischemia-reperfusion injury in middle cerebral artery， the ischemic time was 1.5 h. After reperfusion for 24 h， the neurologic impairment of all groups was detected； the dry/wet method was used to detect the degree of cerebral edema； 2，3，5- tripheyltetrazolium （TTC） staining was used to calculate the volume of cerebral infarction and detect the activities of plasma superoxide dismutase （SOD） and the levels of malondialdehyde （MDA）. Results Compared with ischemia-reperfusion group， the score of neurologic impairment in formononetin group was decreased， the volume of cerebral infarction of the second brain -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 slice and the degree of cerebral edema of the third brain slice were reduced， the activities of plasma SOD were increased， and the levels of MDA were declined， the differences were all statistically significant （P 98%）购自 Phytomaker 有限公司，200 mmol/L 溶于 DMSO， 保存在 4环境维持性状稳定。作用于 动物终浓度0.5% 。超氧化物歧化酶 （SOD） 、丙二醛（MDA）及相关试剂 盒购自南京建成生物工程研究所。线栓 购自广州佳灵生物技术有限公司。 1.2 实验动物分组与给药 SPF 级雄性 SD 大鼠， 3 月龄， 重量 250280 g，由桂林医学院实验动 物中心提供（合格证号 SCXK 桂 2003- 0001） ，2024恒温饲养。采用随机 数字表法将大鼠分为假手术组、缺血再 灌注组和芒柄花黄素组，每组 14 只。 芒柄花黄素组大鼠腹腔注射芒柄花黄素 溶液，用量 20 mg/kg，假手术组和缺血 再灌注组注射同等剂量生理盐水，连续 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 7 d。 1.3 动物模型制备 大鼠术前禁食、不禁水 12 h，7.5%水 合氯醛麻醉。采用线栓法制备大鼠左侧 大脑中动脉阻塞模型。小心分离左侧颈 总动脉、颈外动脉、颈内动脉。结扎颈 外动脉及颈总动脉近心端。线栓从颈总 动脉进入颈内动脉，其起始端距离颈动 脉分叉处 1820 mm，阻塞大脑中动脉 血流。缺血 1.5 h 后，拔出线栓恢复血 流，即复制缺血再灌注组模型。芒柄花 黄素组模型与缺血再灌注组相同，假手 术组仅分离颈部血管，未插入线栓。 1.4 神经功能缺损评分和大鼠筛 选 再灌注后 24 h 进行神经功能缺损 评分。评分标准3如下：0 分，无神经 功能缺损症状；1 分，提尾不能完全伸 展对侧前爪；2 分，行走时向瘫痪侧转 圈；3 分，向瘫痪侧倾倒；4 分，意识 丧失。本实验只选取评分在 12 分的 大鼠进行进一步操作，同时剔除脑底部 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 有出血或明显血栓的大鼠，补足动物直 到达到实验所需数量。 1.5 2，3，5-氯化三苯基四氮唑 （TTC）染色 评分后处死大鼠取脑。脑组织快 速冷冻约 20 min，从额极向后连续取 5 个冠状脑片，切片厚度约 2 mm。病变 部位主要集中在第二、第三脑片。取第 二脑片置于 1% TTC 染色液中 37避光 水浴 30 min，正常脑组织的琥珀酸脱氢 酶与 TTC 反应而呈红色，梗死区域因 脱氢酶活性下降不反应而呈白色。使用 图片处理系统 Image J 测量脑梗死区上 下面积（S1、 S2） ，并计算脑梗死体积。 1.6 脑组织含水量测定 取第三脑片在电子天平上称重 （湿重） ，然后置于 80烘箱烘干至恒 重，再次称重（干重） ，脑组织含水量 （%） =（脑组织湿重 -脑组织干重） /脑 组织湿重100% 。 1.7 抗氧化指标检测 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 再灌注 24 h 后麻醉后心K 取血， 静置 20 min，离心半径 8 cm，3500 r/min，离心 10 min 分离出血清。WST- 1 法检测血浆超氧化物歧化酶（SOD） 活力，TBA 法检测丙二醛（MDA）含 量。 1.8 统计学方法 采用 SPSS 15.0 进行统计学分析， 计量资料以均数标准差（xs）表示， 多组比较采用方差分析，组间两两比较 采用 LSD-t 检验，以 P 0.05 为差异有 统计学意义。 2 结果 2.1 芒柄花黄素对大鼠神经功能、 脑梗死体积和脑含水量的影响 缺血再灌注组和芒柄花黄素组大 鼠 TTC 染色显示不同程度白色梗死区， 假手术组未见梗死，TTC 染色为红色 （图 1） 。与缺血再灌注组比较，芒柄花 黄素组大鼠再灌注 24 h 神经功能评分降 低（P 0.05） ，第二脑片梗死体积减少 （P 0.01） ，第三脑片含水量降低（P -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 0.05） 。见表 1。 2.2 芒柄花黄素对大鼠血浆氧化 应激指标的影响 芒柄花黄素组血浆 SOD 活力高 于缺血再灌注组，差异有高度统计学意 义（P 0.01） 。缺血再灌注组、芒柄花 黄素组大鼠血浆 MDA 水平均高于假手 术组（P 0.01） ，芒柄花黄素组血浆 MDA 水平低于缺血再灌注组，差异有 高度统计学意义（P 0.01） 。见表 2。 3 讨论 芒柄花黄素基本结构为 7-羟基-4 -甲氧基异黄酮，属于黄酮类植物雌激 素，与其同类的包括大豆异黄酮、染料 木黄酮、毛蕊异黄酮等4。芒柄花黄素 具有类似雌激素的多种生物活性，如抑 制食源性肥胖和骨质疏松5、作为联合 用药治疗贫血6、抑制炎性反应7-8等 等，同时有诱导肿瘤细胞凋亡9、抑制 肿瘤细胞生长10 等作用，也能够通过 上调 eNOS 改善动脉内皮功能11。 本研究探索芒柄花黄素是否具有 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 局部脑缺血保护作用。24 h 神经功能评 分显示芒柄花黄素组神经功能缺损情况 比缺血再灌注组减轻（P 0.05） ，实验 结果与毛蕊异黄酮对大鼠神经功能改善 结果相似12 ，毛蕊异黄酮在化学结构 与芒柄花黄素仅相差在 B 环多了一个羟 基，又被称为 3-羟基芒柄花黄素，中高 剂量的毛蕊异黄酮灌胃能够降低大鼠缺 血 2 h 再灌注 24 h 的 18 分制神经功能 评分。另有资料显示，大豆异黄酮能够 改善记忆障碍大鼠 14 d 后的水迷宫学习 记忆能力13 。鹰嘴豆异黄酮可以改善 半乳糖导致的小鼠衰老模型学习记忆能 力14。芒柄花黄素体外实验也显示15 ， 芒柄花黄素预处理（10 mol/L）12 h 显 著减少 N-甲基-D- 天冬氨酸暴露引起的 皮质神经元细胞损失，特别是早期细胞 凋亡。本研究使用 TTC 染色法检测第 二脑片脑梗死情况，结果显示，与缺血 再灌注组比较，脑梗死体积芒柄花黄素 组有明显降低，第三脑片脑水肿程度芒 柄花黄素组也比缺血再灌注组减轻。不 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 同脑缺血模型资料显示16-17，使用芒 柄花黄素灌胃或饮食摄取可以减轻全脑 或局部脑缺血的梗死程度和水肿情况。 侯进义等18 对去势雌性大鼠进行雌激 素预处理，发现可以减轻脑水肿和血脑 屏障通透性，该论文认为雌激素上调相 关蛋白表达有关。从以上资料来看，芒 柄花黄素的神经保护作用可能是其植物 雌激素效应的一部分。 在体外 实验中，芒柄花黄素被认为具有抗氧化 功能。一项关于黄芪异黄酮提取物（包 括芒柄花黄素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮 等）对 PC12 细胞的氧化保护实验研究 显示19，芒柄花黄素防止 SOD 和谷胱 甘肽过氧化物酶（GSH）活性的降低， 并且阻止 GSH 的大量丢失。芒柄花黄 素对邻苯三酚氧产生的超氧阴离子