考马斯亮蓝法对烟草薄片涂布液中蛋白质含量的测定

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 考马斯亮蓝法对烟草薄片涂布液中 蛋白质含量的测定 摘要：采用考马斯亮蓝法对烟草 薄片涂布液中的蛋白质含量进行了测定， 建立了快速、灵敏的蛋白质检测方法。 结果表明，蛋白质含量在 14140 g/mL 与吸光度呈良好的线性关系 （R2=0.999 5） ，样品平均回收率为 101.5%，RSD 为 1.4%。该方法简便、 快速、准确度高、重现性好，可以作为 烟草薄片涂布液及烟草料液中蛋白质测 定的有效方法。 中国论文网 /8/view-12892374.htm 关键词：薄片涂布液；蛋白质； 考马斯亮蓝法 中图分类号：Q51；S572 文献标 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 识码：A 文章编号： 0439- 8114（2017）05-0946-02 DOI：10.14088/ki.issn0439- 8114.2017.05.039 Determination of Protein Content in Reconstituted Tobacco Coating Liquid by Coomassie Brilliant Blue Method YANG Jing1，BAI Bing1， WANG Ning2，ZHANG Gai- hong1 （1.School of Food and Bioengineering， Zhengzhou University of Light Industry， Zhengzhou 450000， China； 2.Henan Cigarette Industry Tobacco Sheet Co. Ltd.， Xuchang 461000， Henan，China） Abstract： A rapid and sensitive Coomassie brilliant blue method was developed for protein determination in reconstituted tobacco coating liquid. The results showed that，the protein content had a good linear relationship with the -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 absorbance in the range of 14140 g/mL（R2=0.999 5）. The average recovery was 101.5% and RSD was 1.4%. The method was simple，rapid，accurate and have high reproducibility，which could be used to determine the protein content in reconstituted tobacco coating liquid and tobacco sauce as an efficient method. Key words： reconstituted tobacco coating liquid； protein； coomassie brilliant blue method 蛋白|对于烟叶的吸味品质有不 利的影响，燃吸时烟叶中的蛋白质会使 烟气苦味增加并有烧羽毛的气味，因此 准确测定烟草中的蛋白质含量有着重要 意义。国内烟草行业主要采用克达尔法 及其改进方法1，2 。 近年来，连续流动法测定蛋白质 也得到了较多的应用3-5。为了消除可 溶性氮如氨基酸、生物碱的干扰，这些 方法在操作时须使用酸性溶剂将可溶性 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 氮去除，其主要研究对象是烟草及固态 烟草制品。然而对于烟草水浸提得到的 产品如烟草料液、烟草薄片涂布液，其 中的生物碱、氨基酸难以有效的与可溶 性蛋白质分离，因此在使用上述方法测 定蛋白质时，会造成严重干扰。针对这 种情况，必须建立一种简便快速、选择 性好、干扰小的烟草料液、烟草薄片涂 布液中蛋白质含量的检测方法。 考马斯亮蓝法又称 Bradford 法， 广泛用于食品中可溶性蛋白质的快速测 定6， 7。其基本原理是在酸性条件下 考马斯亮蓝 G-250 选择性与蛋白质疏水 基团结合，形成蓝色的蛋白质-染料复 合物，在 595 nm 处有最大光吸收，而 氨基酸、生物碱对此并无干扰8-10。 因此本研究采用考马斯亮蓝 G-250 染色 法测定烟草薄片涂布液中蛋白质含量， 并对该方法的线性关系、精密度、重复 性、稳定性、回收率进行考察，旨在探 索建立一种准确快速、选择性好、成本 低廉的测定烟草薄片涂布液及烟草料液 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 中蛋白质含量的方法。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 T-6 新世纪紫外 -可见分光光度计 （北京普析通用） ，考马斯亮蓝 G- 250（阿拉丁） ，牛血清白蛋白 BSA（西 安国安生物科技） ，其他试剂均为国产 分析纯。 1.2 方法 1.2.1 标准蛋白溶液配置 精密称 取牛血清白蛋白 14.2 mg，用去离子水 溶解，定容于 100 mL 容量瓶，制得 142 g/mL 蛋白质标准溶液，置于 4 冰箱中保存。 1.2.2 考马斯亮蓝 G-250 溶液配 制 称取 100 mg 考马斯亮蓝 G-250，溶 于 50 mL 95%乙醇，加入 85%磷酸 100 mL，用去离子水定容于 1 L 棕色容量瓶 中，制得考马斯亮蓝 G-250 溶液（呈棕 红色） ，备用。 1.2.3 供试样品溶液制备 精密称 取 300 mg 烟草薄片涂布液定容于 25 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 mL 容量瓶，制得供试样品溶液，备用。 1.2.4 绘制标准曲线 取 7 支 10 mL 具塞试管，分别精密吸取 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 标 准蛋白溶液于试管中，各管补加去离子 水至 1 mL，加入考马斯亮蓝 G-250 溶 液 5 mL，混匀，室温放置 5 min 后在 595 nm 处测定溶液吸光度，绘制标准曲 线。 1.2.5 样品中蛋白质含量测定 取 供试样品溶液 1 mL，按照 “1.2.4”方法 测定其 595 nm 处吸光度，计算供试样 品中蛋白质含量。 2 结果与分 析 2.1 标准曲线和回归方程的建立 以体系中蛋白质质量（g）为横 坐标 x，595 nm 处吸光度为纵坐标 y（表 1） ，绘制标准曲线如图 1，得回 归方程为，y=0.013 39+0.005 39x，R2=0.999 5，由此表明，蛋白质在 14140 g/mL 与吸光度之间符合 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 Lamber-Beer 定律。 2.2 精密度试验 精密吸取标准蛋白溶液，按照 “1.2.4”方法B 续测定 6 次吸光度，计 算 RSD 为 0.4%，表明该方法精密度良 好。 2.3 重复性试验 精密吸取标准蛋白溶液 6 份，按 照“1.2.4”方法分别测定其吸光度，计算 RSD 为 3.3%，表明该方法重复性良好。 2.4 稳定性试验 精密吸取标准蛋白溶液，按照 “1.2.4”方法每隔 20 min 测定一次吸光度， 表明 2 h 之内吸光度无明显变化，RSD 为 0.7%。 2.5 回收率试验 精密吸取已知含量的样品溶液， 分别加入一定量的标准蛋白溶液，按照 “1.2.4”方法测定其吸光度，结果见表 2。结果表明，样品加标回收率范围为 99.5% 103.2%，平均回收率为 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 101.5%，RSD5%，该方法准确度较高。 2.6 样品含量测定 对 3 个不同样品烟草薄片涂布液 进行蛋白质含量测定，每个样品 3 次重 复，3 次测定结果平均值作为实测值