2013- hdn实验设计实验报告(新版)

临床输血与检验创新性实验设计 二级学院：检验学院 教研室：临床检验学 实验名称 母婴 Rh 血型不合的新生儿溶血病检查的实验设计 专业：医学检验 层次：本科 年级：2009 小班： 姓名 性别 学号 备注 王千慧 女 10203070？ 林日娟 女 10203070229 钟晓 女 10203070230 陈远晓 女 10203070232 卢雪如 女 10203070217 卢宇东 男 10203070？ 周 杰 男 10203070？ 课 题 组 主 要 成 员 朱虹亮 男 10203070233 周伟泽 男 10203070？ 2 新 生 儿 溶 血 病 是 由 于 母 婴 血 型 不 合 ， 胎 儿 红 细 胞 进 入 母 体 循 环 致 使 母 体 产 生 了 相 应 的 IgG 类 抗 体 。 该 抗 体 作 用 于 胎 儿 红 细 胞 而 引 起 的 同 种 被 动 免 疫 性 疾 病 。 HDN 可 引 起 婴 儿 贫 血 、 黄 疸 、 水 肿 、 肝 脾 肿 大 ， 严 重 者 可 导 致 胆 红 素 脑 病 ， 引 起 新 生 儿 死 亡 或 智 力 发 育 障 碍 。 因 此 ， 对 HDN 进 行 早 期 、 准 确 的 诊 断 有 重 要 意 义 。 新 生 儿 溶 血 病 的 患 儿 血 清 学 检 测 主 要 是 “三 项 试 验 ”， 即 ： 直 接 抗 球 蛋 白 试 验 (DAT)； 血 清 游 离 抗 体 测 定 试 验 ； 新 生 儿 红 细 胞 抗 体 释 放 。 但 由 于 微 柱 凝 胶 技 术 利 用 分 子 筛 效 应 和 亲 和 效 应 ， 红 细 胞 抗 原 与 相 应 的 抗 体 结 合 ， 经 离 心 ， 便 可 检 测 血 型 、 不 完 全 抗 体 及 作 交 叉 配 血 试 验 ， 具 有 操 作 简 单 、 结 果 准 确 、 敏 感 且 易 于 判 读 等 优 点 ， 所 以 本 实 验 设 计 主 要 采 用 微 柱 凝 胶 试 验 和 直 接 、 间 接 抗 人 球 蛋 白 试 验 以 及 相 关 的 辅 助 检 查 来 对 母婴 Rh 血型不合的新生儿溶血 病作出诊断。 一、实验设计 （一）标本、试剂及器材 标本：静脉血 试剂：微柱凝胶试验【抗人球蛋白凝胶微柱卡：含有抗人球蛋白（抗 IgG+C3） ， 可用于检测 IgG 类不完全抗体（间接抗球蛋白试验） ，IgG 类不完全抗体（或）补 体致敏红细胞（直接抗球蛋白试验） 】 抗人球蛋白试验【5%筛检红细胞（试剂红细胞，用于间接抗人球蛋白试验） 、抗球 蛋白试剂盒（商品试剂，用于直接抗人球蛋白试验） 、IgG 包被的红细胞、生理盐 水】 器材：微柱凝胶试验【微量吸样枪、微柱凝胶检测卡专用离心机】 抗人球蛋白试验【试管、记号笔、试管架、滴管、乳胶吸头、吸量管、洗耳球、 载玻片、离心机、显微镜、滤纸】 （二）主要实验 产前检查 微柱凝胶试验 （1）检测血型 1.将受检者红细胞（不用洗涤）配成 1%生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶 微柱卡的微管反应腔内加 50L。 2.立即与 1000 转每分钟，离心 10 分钟，观察结果 3.观察及判断血型结果：阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或 胶中。阴性：对照管和检测管的细胞沉淀均在管底。实验失败：对照管细胞在胶 上或胶中，重新试验。 4.报告方式：Rh(D)血型阴性/阳性 （2）筛检和鉴定不完全抗体 1.取筛检红细胞或谱细胞悬液（1红细胞生理盐水悬液）各 50L，分别加入标 记好的微管反应腔中。 2.然后分别立即加入受检血清 25L。 3.将已加好反应物的凝胶卡放入 37 度孵育 15min。 4.取出凝胶卡立即以 1000r/min 水平离心 10min，观察结果。 5.观察及判断血型结果：同血型检测。 6.报告方式：筛检试验 阳/阴性。 间接抗人球蛋试验 1.加血请：分离父亲或母亲（胎儿则取羊水血型物质） ，取两滴置于标记好的小试 管中。 2.滴加 5%筛检红细胞 1 滴于小试管中，混匀。 3.温育：37 度温育 30-60min。 4.离心：1000r/min 离心 1min。 产后检查 微柱凝胶试验 （1）检测血型 1.将受检者红细胞（不用洗涤）配成 1%生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶 微柱卡的微管反应腔内加 50L。 2.立即与 1000 转每分钟，离心 10 分钟，观察结果 3.观察及判断血型结果：阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或 胶中。阴性：对照管和检测管的细胞沉淀均在管底。实验失败：对照管细胞在胶 上或胶中，重新试验。 4.报告方式：Rh(D)血型： （2）筛检和鉴定不完全抗体 1.取筛检红细胞或谱细胞悬液（1红细胞生理盐水悬液）各 50L，分别加入标 记好的微管反应腔中。 2.然后分别立即加入受检血清 25L。 3.将已加好反应物的凝胶卡放入 37 度孵育 15min。 4.取出凝胶卡立即以 1000r/min 水平离心 10min，观察结果。 5.观察及判断血型结果：同血型检测。 6.报告方式：筛检试验 阳/阴性。 间接抗人球蛋试验 1.加血请：分离父亲或母亲血清（胎儿的则取羊水血型物质） ，取两滴置于标记好 的小试管中 2.滴加 5%筛检红细胞 1 滴于小试管中，混匀。 3.温育：37 度温育 30-60min。 4.离心：以 1000r/min 离心 1min 5.观察：观察是否有溶血和凝集，并记录结果 产前检查 微柱凝胶试验 直接抗人球蛋试验 1.洗涤红细胞：彻底悬浮细胞，用盐水洗涤 5 次。最后一次洗涤后，弃掉全部盐 水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 2.加抗球蛋白：按试剂说明加最适稀释度抗人球蛋白血清 1 滴，充分混合。 3.离心：以 1000r/min 离心 1min 4.观察：轻轻悬浮细胞，观察是否有溶血或凝集，有溶血或凝集为阳性，否则为 阴性。 5.复核：阴性者应加 IgG 包被的红细胞 1 滴，离心并观察结果：凝集，表示阴 性结果可靠。不凝集，表示试验无效，必须重做。 （三）辅助实验 3 5.观察：是否有凝块和溶血，并记录结果。 产后检测 可疑 Rh 等其他血型系统血型不合应在出生后尽早为好。 微柱凝胶试验 （1）检测血型 1.将父亲或母亲或婴儿红细胞（不用洗涤）配成 1%生理盐水悬液，向已标记好的 特异性凝胶微柱卡的微管反应腔内加 50L。 2.立即与 1000 转每分钟，离心 10 分钟，观察结果。 3.观察及判断血型结果：阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或 胶中。阴性：对照管和检测管的细胞沉淀均在管底。实验失败：对照管细胞在胶 上或胶中，重新试验。 4.报告方式：Rh(D)血型阴性/阳性 （2）筛检和鉴定不完全抗体 1.取筛检红细胞或谱细胞悬液（1红细胞生理盐水悬液）各 50L，分别加入标 记好的微管反应腔中。 2.然后分别立即加入受检血清 25L。 3.将已加好反应物的凝胶卡放入 37 度孵育 15min。 4.取出凝胶卡立即以 1000r/min 水平离心 10min，观察结果。 5.观察及判断血型结果：同血型检测。 6.报告方式：筛检试验 阳/阴性。 直接抗人球蛋试验 1.洗涤红细胞：彻底悬浮细胞，用盐水洗涤 5 次。最后一次洗涤后，弃掉全部盐 水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 2.加抗球蛋白：按试剂说明加最适稀释度抗人球蛋白血清 1 滴，充分混匀。 3.离心：1000r/min 离心 1min。 4.观察：轻轻悬浮细胞，观察是否有溶血或凝集，有溶血为阳性，否则为阴性。 5.复核：阴性者应加 IgG 包被的红细胞 1 滴，离心并观察结果：凝集：表示阴 性结果可靠。不凝集：表示试验无效，必须重做。 （三）辅助实验（母亲及刚出生疑有溶血胎儿或婴儿） 1.流式细胞仪检查血常规，包括血红蛋白、红细胞计数、网织红细胞计数、白细 胞计数、血小板计数 2.血涂片检查细胞形态：尤其要观察红细胞是否有溶血及凝块形成。 3. 胆红素测定、羊水胆红素含量测定：胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红 素，特异性高，手工操作简便快捷，也适合自动化生化分析仪操作。 4 （四）研究内容与方法的技术路线 （以线路图的形式简要展示） 产前检查 血型血清学检查 常规检查 产妇及其丈夫 R h 血型 D 抗原 鉴定 产妇血清的不规 则抗体筛选及筛 选阳性者效价检 测 胎儿的血型物质， 确定胎儿血型 （微柱凝胶试验、 间接抗人球蛋试 验） 外周血常规检查 血红蛋白、 血涂片检查、 红细胞计数、 网织红细胞计数、 白细胞计数、 血小板计数 胆红素测定、 羊水胆红素含量 测定 判断：Rh 血型阳性或阴性 产后检查 血型血清学检查 常规检查 产妇及其丈夫 R h 血型 D 抗原 鉴定 产妇血清的不规 则抗体筛选及筛 选阳性者效价检 测 婴儿的血清，确 定胎儿血型（微 柱凝胶试验、直 接抗人球蛋试验） 外周血常规检查 血红蛋白、 血涂片检查、 红细胞计数、 网织红细胞计数、 白细胞计数、 血小板计数 胆红素测定、 羊水胆红素含量 测定 判断：Rh 血型阳性或阴性 5 二、近五年参考文献（参照检验医学与临床杂志的投稿要求） 1 兰炯采,刘景汉,马红丽,等.新生儿溶血病( HDN) 免疫血液学试验推荐方案J. 中国输血杂志,2012,2(25):95-100. 2 宋宁,陈静娴,李宏.新生儿溶血病检测/兰炯采,贠中桥,陈静娴输血免疫血液学 实验技术,北京:人民卫生出版社,2011:45-57 3 潘纪春.庄远.PAN Ji-chun.ZHUANG Yuan .新生儿溶血病血清学检查分析J.科学 技术与工程 2010,10(5) 4 杨 珊 .新 生 儿 溶 血 病 血 清 学 检 测 结 果 分 析 J.海南医学.2009.20(l)139-141 5 卢磊,刘燕.微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用J .中国现代医生. 2010.48(13) 6杨秀丽.红细胞直接抗球蛋白试验阳性 Rh 血型鉴定方法J.国际检验医学杂志. 2011,32(14):1609-1610. 7 徐 玮. 新生儿溶血病免疫血液学检测进展J. 吉林医学.2013, 34(12): 2339- 2340. 6 三、设计创新及存在问题 传统的试管法抗球蛋白检查方法在手工操作中受到血清与红细胞比例、离心速度 和时间等因素的干扰，操作过程中需反复洗涤红细胞。结果判断人为影响因素较多， 重复性较差；而且在洗涤过程中由于抗原和抗体之间的亲和力较弱，抗体易被洗脱掉， 易出现假阴性。微柱凝胶技术是建立在传统血