第三章生物制品课件

第三章 灭活剂、保护剂、与免疫增强剂第一节 灭活剂一、灭活与灭活剂n （一）灭活：杀死病原微生物，但不影响免疫原性；其次是破坏血清的补体，以免干扰血清学反应结果。n 灭活剂：灭活微生物的化学试剂。n 灭活方法：物理灭活：加热、及射线灭活微生物，此方法免疫原性易破坏，现很少使用（血清 56C半小时灭活补体用此方法）。n 化学灭活：用化学试剂将病原微生物杀死，此方法经常使用。二、常用的灭活剂种类和原理n （一）甲醛：是最古老常用的灭活剂，现在我国用的 26种灭活疫苗，均以甲醛为灭活剂。n 性质：甲醛为刺鼻的气体，水溶液叫福尔马林，浓度为 36%-40%。 10C以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛，为白色沉淀。n 原理：甲醛的醛基起灭活作用，可使n 蛋白质的氨基 羟甲基胺n 羧基 亚甲基二醇单酯n 羟基 羟甲基酚n 巯基 硫代亚甲基二醇n 浓度：需氧菌甲醛浓度到 0、 1%-0、 2%.n 厌氧菌 0、 4%-0、 8%.n 病毒 0、 05%-0、 4%.n 原则是浓度低，时间短，温度低可以灭活细菌，尽量减少破坏抗原（通常加入量，以福尔马林量计算，不再折合甲醛浓度）。n （二）烷化剂：将烷基引入，形成烷基取代物，使微生物变性死亡。n 原理：主要破坏病毒的核酸，作用于 A： G碱基，引起 DNA单链断裂或双链铰连。n 此类常用于病毒灭活，种类有 AEIN- 乙酰乙烯亚胺，加入浓度到 0、 05%。n BEI 二乙烯亚胺，浓度 0、 02%； EEI2 乙基乙烯亚胺， GDA 缩水甘油醛。n 灭活后加硫代硫酸钠可终止灭活，防止抗原损失。n 保存： AEI， 0-4C一年， -20C二年； BEI 0-4C保存一个月。n （三）苯酚（石碳酸）人类用的 第一个消毒药，具有特殊气味的无色结晶，易潮解成水溶液，与光、氧后颜色变紫色。n 原理：蛋白质变性以及抑制氧化脱氢酶，芽孢和病毒对它抵抗力强。n 灭活浓度：抑菌作用是 0、 20 、 5%（血清防腐），杀菌是 1%，杀葡萄球菌是 3%。n 消毒常用它的衍生物，来苏儿（甲酚皂） 35% 浓度，特殊气味，覆盖其他气味，也是医院常用的。(Joseph Lister,18271912)首创用石炭酸喷洒手术室和煮沸手术用具以防术后感染，为防腐、消毒，以及无菌操作奠定了基础。n （四）结晶紫（龙胆紫），也叫紫药水，碱性染料，也叫甲紫或甲基青莲，化学名，六甲基副玫瑰苯胺。n 原理：碱性阳离子可结合细菌阴离子羧基；干扰细胞壁粘肽合成；常作用于革兰氏阳性菌。n 生物制品的应用有猪瘟结晶紫疫苗，鸡白痢染色抗原。n （五） 丙酰内酯 良好病毒灭活剂，性状是无色有气味液体，易潮解和高温失效，5C密封保存好，现主要用于狂犬灭活苗。三、影响灭活作用的因素n （一）药物的特异性：酚类不能杀灭真菌和病毒，阳离子的结晶紫，主要作用于 G+菌。n （二）微生物的种类和特异性： G+菌和 G-菌对药物敏感不一样，繁殖体和芽孢对药物敏感也不一样。n （三）药物浓度：浓度愈大，灭活越快，抗原也损失大；但是， 95%酒精没 75%酒精杀灭细菌好。n （四）温度：温度与灭活成正比，每升高 10度，金属类杀菌作用增加 25 倍。但高温超过 40C，抗原也损失大。n （五）时间：灭活时间与温度和浓度成反比，即灭活杀菌 长，温度旧低，浓度也 低，就可以杀灭细菌。n （六） pH：碱性快，酸性慢，酸性环境对 抗原保护好。n （七）有机物存在：环境的 有机物减低灭活的效果，微生物也是有机物。四、灭活疫苗时的注意事项n 2人参加灭活，注意药品名和量，灭活后标记。n 37C灭活一天后，接种适宜培养基 无菌检查。n 动物试验，灭活苗制成后，注射小白鼠 0、2ml，两只，观察 3天。n 使用试验：用户可先注射 1-2头，观察 12天，看有无过敏，应激等反应，证明安全，才全群使用。n 思考题：n 什么叫灭活和灭火剂？n 灭活剂的种类有哪些？n 影响灭活的因素是什么？n 灭活的注意事项有哪些？第二节 保护剂n 保护剂也叫稳定剂，是防止微生物在冻干过程中受到破坏。n 按作用原理分两类：n 渗透剂：能渗入细胞，使胞内外渗透压平衡，防止慢冻时损伤细胞。有甘油，蔗糖，二甲基亚砜。n 非渗透剂：防止细胞内外物质交换在速冻时保护细胞。有 蛋白质，聚乙烯吡咯酮。n 按保护剂分子量分类：n 低分子量保护剂：糖、氨基酸类。n 高分子量保护剂：脱脂牛奶、明胶。n 按化学性质分类：n 复合物：脱脂牛奶，血清。n 糖类：蔗糖、乳糖。n 盐类：乳酸钙、谷氨酸钠。n 醇类：甘油，山梨醇，甘露醇。n 酸类：柠檬酸，氨基酸。n 聚合物：葡聚糖，聚乙烯吡咯酮。一、冻干保护剂的组成和作用n 按组成将保护剂分为营养液，赋形剂，抗氧化剂。n 营养液：使受损细胞修复：脱脂牛奶，蛋白质，氨基酸，糖类。n 赋形剂：骨架作用，制品形成网孔结构，易溶解 -蔗糖，乳糖。n 抗氧化剂：保护酶类，防止氧化 VC ， VE，硫代硫酸钠。保护剂的作用：n 防止细胞内水结晶和细胞失去水分。n 平衡细胞内外渗透压，防止细胞破裂。n 助于细胞修复以及冻干后复苏。二、影响保护剂效果的因素判断保护剂的好坏，从冻干后的存活率，以及生物制品的保质期研究。然后对不同物质筛选不同配方，选出好的保护剂。n 1、保护剂的种类：不同微生物用不同的保护剂。n 2、保护剂的浓度： 510% 的葡萄糖保存大肠杆菌存活率高。n 3、保护剂配制方法：糖、血清、维生素不能高温灭菌，糖可以 114C30分钟灭菌，其他可以过滤除菌。n 4、保护剂的 pH：一般为 6-8。三、常用的保护剂n 生物制品保护剂很多，各国家不同，如鸡新城疫苗（ ND），我国是 5%蔗糖脱脂牛奶；日本是 5%乳糖、 0、 15%聚乙烯吡咯酮、1%马血清。n (一 )不同微生物用不同保护剂n 细菌疫苗： 10%蔗糖； 5%蔗糖脱脂牛奶；5%蔗糖、 1、 5%明胶； 10-20%脱脂牛奶。n 厌氧菌苗： 0、 1%谷氨酸钠、 10%乳糖；10%脱脂牛奶； 7、 5%葡萄糖血清。n 病毒疫苗：多用混合保护剂，如 5%蔗糖脱脂牛奶。q (二 )几种常用的保护剂n 5%蔗糖脱脂牛奶 新城疫疫苗n 明胶蔗糖保护剂 -禽霍乱疫苗n 聚乙烯吡咯酮乳糖 厌氧菌n SPGA（蔗糖 76、 62g，磷酸二氢钾 0、 52g，磷酸氢二钾 1、 62g，谷氨酸钠 0、 83g，牛血清蛋白 10g，去离子水 1000ml）鸡马立克氏疫苗。n (三 )保护剂的添加：一般是疫苗和保护剂 1： 1加入（ 5%蔗糖脱脂牛奶 新城疫疫苗），还有是按疫苗量加入保护剂到规定浓度（如 5%蔗糖明胶保护剂，加疫苗是先配浓度高的 40%的蔗糖、 12%明胶，然后按疫苗 7份，保护剂 1份混合。）。n 弱毒疫苗饮水：加 0、 2%奶粉，以中和水中的 有害离子和毒性物质。n 思考题：n 什么叫保护剂？组成和作用是什么？n 影响保护剂效果的因素有哪些？n 常用保护剂有哪些？第三节 免疫佐剂n 一、佐剂的概念：n 概念： adjuvant一词来源于拉丁语，