抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义

1、抗中性粒细胞胞浆抗体（ ANCA) 检测及临床意义间接荧光免疫 (IF) 方法 (欧盟 )一、 ANCA 概念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体就是一种以中性粒细胞与单核细胞胞浆成份为靶抗原得自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病得诊断与鉴别诊断具有重要得意义 ,已成为自身免疫性疾病得一项非常重要得常规检测项目。目前 ,已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ACA 得靶抗原 ,蛋白酶3(R3),髓过氧化物酶（ PO），人白细胞弹性蛋白酶（ H），乳铁蛋白 (L ）,组织蛋白酶 G（Cath G),杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI ），人溶酶体相关膜蛋白 2 (H MP2),溶菌素 (LYS ）,

2、天青杀素，防御素，烯醇化酶 ,葡萄糖醛酸酶。根据乙醇固定得中性粒细胞基质片中,可以区分两种不同得荧光模型：一种胞浆型 (cA CA), 就是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中得颗粒型荧光 ,细胞核无荧光。在乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片中 ,其荧光模型表现相同。其主要得靶抗原就是蛋白酶 3(PR3)。另一种就是核周型（ p AN A ）,就是围绕中性粒细胞细胞核周围得平滑带状荧光。由多种抗原引起 ,主要靶抗原就是髓过氧化物酶 (PO）,人白细胞弹性蛋白酶 (HEL ）,乳铁蛋白（ F),组织蛋白酶 G(Cath ),杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI),人溶酶体相关膜蛋白 2 (HL MP2）,溶菌素

3、 (LYS)等。不同抗体在乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片中 ,其荧光模型表现有所不同 .抗 MPO 抗体产生得 NCA 因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定得中性粒细胞中出现得 c N类似故叫甲醛抗性得 p CA。而其她非 O 抗体不与甲醛固定得中性粒细胞反应 ,无荧光表现 ,这种类型又称为甲醛敏感得 pACA。故根据乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片表现 ,可初步判定 ANCA 得靶抗原 3，MP，非 MPO 三类。二、 A 得检测间接荧光免疫方法就是检测NCA 得参考方法或者标准方法,至今也就是最常用得经典方法。F 就是区分 -ANCA 与 -ANCA 得基础 ,有较高敏感性 ,可半定量 ,但 I F

4、 测定得就是总ANC ，不能准确区分靶抗原，需特异性得检测方法作为补充。由于多种免疫性疾病患者存在ANA, 用 I F 法检测 NCA 时,会产生干扰实验结果得判断。为避免干扰现象 ,采用了四基质联合得检测即:乙醇固定得粒细胞 ;甲醛固定得粒细胞 ;e 2（人喉癌细胞）细胞 ;猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。 NC荧光模型及表现如表二所述。区分 ANA 得干扰 :H p 2 细胞有典型荧光表现 ,1：判断c-ANC ,Hep-2甲醛固定：区分细胞粒细胞 ANC 对甲醛敏感还就是耐受甲醛抗性p A CA: 抗 M O 抗体耐甲醛，其荧光与在乙醇固定得中性粒细胞中得c ANC 类似甲醛

5、敏感 p- NCA: 其她非 MPO 抗体不与甲醛固定得中性粒细胞反应 ,无荧光表现区分 ANA 与 ANCA: 借助猴肝细胞与其中得肝血窦粒细胞。A CA 阳性 ,只有肝血窦粒细胞出现荧光 ,。如果两者同时阳性，所有肝细胞核都有荧光 .就是标准实验基质。区分两种荧光模型：c ANCA; -NCA 。猴肝乙醇固定细胞粒细胞表一 :四联基质片分布及意义表二： AN 荧光模型及表现荧光模型乙醇固定粒细胞胞质呈现弥散得细颗粒荧光，胞质荧光清c-ANCA 阳性晰勾勒出核得轮廓，分 页 核 之 间 荧 光 增强。A甲 醛呈现核周胞质平滑丝N耐 受状带荧光。荧光阳性Ap得胞质主要集中在分阴NCA页核周围

6、, 形成环状性p或不规则得块状。ANC 呈现核周胞质平滑丝甲 醛阳性状带荧光。荧光阳性敏 感p 得胞质主要集中在分ANC页核周围，形成环状A或不规则得块状。A NCA 阴性细胞核阳性 ,荧光强荧光表现甲醛固定粒细胞 ep2 细胞猴肝细胞胞质呈现弥散得细颗肝细胞本身无荧光。粒荧光 ,胞质荧光清晰仅肝血窦粒细胞出现勾勒出核得轮廓，分阴性荧光。页核之间荧光增强。胞质呈现弥散得细颗肝脏细胞本身无荧光。粒荧光 ,胞质荧光清晰仅肝血窦粒细胞出现勾勒出核得轮廓，分阴性荧光 .页核之间荧光增强 .肝脏细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现阴性阴性荧光 .阴性细胞核呈现肝细胞核阳性。度增强荧光表现， 如肝血窦粒细胞

7、未见荧AANA 所述光。阳甲醛耐受 p-AN荧光表现如 cAN 细胞核呈现肝细胞与肝血窦粒细性细胞核阳性 ,荧光强荧光表现， 如 A 阳性阳性 ,乙醇 ,甲醛固胞都有荧光。度增强ANA 所述。定粒细胞所述甲醛敏感 A细胞核阳性，荧光强细胞核呈现肝细胞与肝血窦粒细 C阳性阴性荧光表现 ,如度增强胞都有荧光。A 所述。三、注意事项为提高对疾病诊断得特异性，检测时应注意以下问题、检测 ACA，一般建议同时做 I 初筛与确认实验 ,以提高 A C得临床应用价值 ,不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断得特异性。2、不能仅检测抗PR3 与 MP两种特异性抗体 ,而不检测 ,这样容易限制 ANCA

8、 对疾病诊断得特异性。、用 IIF 检测时，仅使用乙醇固定得粒细胞片,这样不能严格排除ANA 得干扰，容易出现假阳性。四、临床意义(一)A CA 与原发性小血管炎韦格纳肉芽肿（WG ），显微多动脉炎( P） ,坏死性新月体性肾小球肾炎（ NCGN ）与变应性肉芽肿性血管炎（ SS）等等原发性系统性小血管炎得发病与 ANCA 密切相关 ,临床上已将上述疾病统称为 NC相关小血管炎。 A A，特异性 P3 抗体与抗 MP抗体得检测已成为原发性小血管炎得敏感特异得血清学检测项目。、抗 PR3 抗体特异性 PR3 抗体为 WG 得标志性抗体 ,抗 R3 抗体荧光模型以 ACA 为主。但以 c-ANCA

9、 诊断 WG 特异性为 90,而以抗 P3 抗体得特异性可超过 95.抗 P3 抗体在其她得原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。抗 R3 抗体敏感度与疾病得活动性及病程有关，在疾病得早期症状不明显时,就可出现阳性。因而抗PR3 抗体常作为 G 得早期诊断、疗效判断、复发估计得指标 ,对临床治疗有重要得参考价值。、抗 PO 抗体抗 M 抗体荧光模型以 p-ANCA 为主 ,主要与 PA、NCG、 S 相关 . 还可见于其她疾病，如节结性多动脉炎 ,抗肾小球基底膜肾病 ,WG，SLE，RA,药物诱导得狼疮 ,Felt综合症等。 抗体滴度与疾病活动性相关， 可用于早期诊断、 疗效判断、复发估

10、计得指标 ,对临床治疗有重要得参考价值。抗 PO 抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性 NCGN,对诊断原发性小血管炎得特异性达到 99%.因而每一个不明原因得血管炎或肾小球肾炎得患者，都应该检测 ANCA 。表三 :A CA 与原发性小血管炎相关疾病荧光模型靶抗原（ %)韦格纳肉芽肿（ WG)C ， (少见 )R（85）,M O(10）显微多动脉炎 (MPA）C ,PR3(45)，MPO(45）坏死 性新月体 性肾小 球肾 炎 C ，P(少见 ) 3(25),MPO(65）（NCG)变应性肉芽肿性血管炎 (CSS）C ，P（少见 )P3(1),P(60)结节性多动脉炎 (PAN)少见PR3(

11、5),MPO(15)抗肾小球基底膜病（抗 GBN)PPO（二 )ANC 与药物诱导性血管炎近年来不断有药物治疗引起得 A 阳性得病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪 ,普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，她巴唑 /甲巯咪唑等。其中报道比较多得就是长期使用丙基硫氧嘧啶引起得 ANCA, 其特点就是滴度高 ,抗体谱广（抗原主要就是 PO，也可同时伴有或单独出现其她靶抗原,如 P， LF ，Cath ，BPI,L S 等)。药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似,停止丙基硫氧嘧啶用药后 ,临床症状好转 , CA 可转阴。因此 ,长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测 ANCA, 及早发现药物诱

12、导性血管炎。(三) A 与其她疾病除原发性血管炎外，其她一些疾病中也可出现NCA ，主要为 p NCA, 其靶抗原并非 PR， O,而就是 LF ， ath G,B I,LY 等1、慢性炎症性肠病 (CIBD)CI D 就是一种消化系统得自身免疫性疾病 ,包括溃疡性结肠炎 （U）,克罗恩病 (CD) 两种。以往得 CID 诊断依赖 X 线检查，内窥镜及组织学诊断 ,缺乏有效得试验室指标。近年来研究发现 U病人血清中 ANC 阳性率为 60-80，而 C 患者得阳性率为 020%,多为 pANCA, 相关靶抗原有 I 等。滴度与疾病得活动度与病程无关。因为 pAN A 在 C 阳性率高 ,CD 阳性率低 ,故可作为两者得鉴别诊断及 UC 早期诊断指标。、结缔组织病在结缔组织病中 ,ANCA 阳性主要见于 SLE 与 A, 其她结缔组织病中少见。但文献报道在 SLE 与 A 阳性率差异特别大（ 1 9%)，这可能与使用方法 , 抗原基质片及工作人员水平有很大关系。 LE 中 AN