第14、21章基因工程与分子生物学常用技术及其应用习题

1、第十四、二十一章 基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用复习测试（一）名词解释1DNA重组 2基因工程 3限制性核酸内切酶 4基因组DNA文库 5cDNA文库 6聚合酶链反应（PCR） 7载体 8转化 9感染 10核酸分子杂交 11Southern印迹杂交 12Northern印迹杂交 13斑点印迹 14原位杂交 15DNA芯片 16基因诊断 17基因治疗（二）选择题A型题：1 限制性核酸内切酶作用特点不包括： A在对称序列处切开DNABDNA两链的切点常不在同一位点C酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端DDNA两链的切点常在同一位点E酶辨认的碱基一般为46个2限制性核酸内切酶：

2、A可将单链DNA任意切断B可将双链DNA序列特异切开C可将两个DNA分子连接起来D不受DNA甲基化影响E由噬菌体提取而得3cDNA文库包括该种生物的： A某些蛋白质的结构基因B所有基因组C结构基因与不表达的调控区D内含子和调节区E内含子和外显子4下列关于建立cDNA文库的叙述哪项是错误的： A从特定组织或细胞中提取mRNAB将特定细胞的DNA用限制性核酸内切酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中C用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNAD用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNAE加S-腺苷甲硫氨酸（SAM），以使新生的DNA双链甲基化5限制性核酸内切酶的通常识别序列是： A粘性末端BRNA聚合酶

3、附着点C回文对称序列D聚腺苷酸E甲基化“帽”结构6pUC系列是指：A经人工改造的大肠杆菌质粒B天然的大肠杆菌质粒C天然的酵母质粒D经人工改造的大肠杆菌噬菌体E经人工改造的酵母质粒7用于转染哺乳类细胞的常用载体是： A质粒B噬菌体C逆转录病毒RNAD结构基因E乳糖操纵子8转化常指： A噬菌体感染B基因的转位C摄取外来DNA，引起细胞生物学类型的改变D产生点突变E产生移码突变9基因工程的操作程序可简单地概括为： A载体和目的基因的分离、提纯与鉴定B分、切、接、转、筛C将重组体导入宿主细胞，筛选出含目的基因的菌株D将载体和目的基因接合成重组体E限制性核酸内切酶的应用10用于基因治疗较为理想的载体是：

4、 A质粒B噬菌体C经改造的逆转录病毒D人类DNAE酵母质粒11常用质粒有以下特性： A是线形双链DNAB插入片段的容量比噬菌体DNA大C含有抗生素抗性基因D含有同一限制性核酸内切酶的多个切口E不随细菌繁殖而进行自我复制12在重组体中切出插入片段最常用的方法是： A以重组时所用限制性核酸内切酶将其切出B用其它限制性酶将其切出C用S1核酸酶将其切出D用DNA酶将切出E用多种限制性内切酶将其切出 13利用PCR扩增特异DNA序列主要原理之一是： A反应体系内存在特异DNA片段 B反应体系内存在特异RNA片段 C反应体系内存在特异DNA引物 D反应体系内存在特异RNA引物 E反应体系内存在的TaqDN

5、A聚合酶具有识别特异DNA序列的作用 14表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是： A大肠杆菌表达体系 B原核表达体系 C酵母表达体系 D昆虫表达体系 E哺乳类细胞表达体系 15限制性核酸内切酶切割DNA后产生： A3-磷酸基末端和5-羟基末端 B5-磷酸基末端和3-羟基末端 C3-磷酸基末端和5-磷酸基末端 D5-羟基末端和3-羟基末端 E3-羟基末端和5-羟基末端及磷酸 16下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是： A小型环状双链DNA分子 B携带有某些抗生素抗性基因 C在细胞分裂时恒定地传给子代细胞 D具有自我复制功能 E获得目的基因17在分子生物学领域分子克隆主要是指： ADN

6、A的大量复制 BDNA的大量转录 CDNA的大量剪切 DRNA的大量剪切 ERNA的大量反转录 18在分子生物学领域重组DNA技术又称： A酶工程 B蛋白质工程 C细胞工程 D发酵工程 E分子克隆技术 19在重组DNA技术中不涉及的酶是： A限制性核酸内切酶 BDNA聚合酶 CDNA连接酶 D反转录酶 EDNA解链酶 20多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为： A平端末端 B3突出末端 C5突出末端 D粘性末端 E缺口末端 21可识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶为： A限制性核酸外切酶 B限制性核酸内切酶 C非限制性核酸外切酶 D非限制性核酸内切酶 EDNA

7、内切酶 22cDNA是指： A在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA C在体外经转录合成的与DNA互补的RNA D在体外经反转录合成的与RNA互补的RNA E在体外经反转录合成的与DNA互补的RNA 23基因组代表一个细胞或生物体的： A部分遗传信息 B整套遗传信息 C可转录基因 D非转录基因 E可表达基因 24在基因工程中通常所用的质粒存在于： A细菌染色体 B酵母染色体 C细菌染色体外 D酵母染色体外 E病毒DNA外 25就分子结构而论质粒是： A环状双链DNA分子 B环状单链DNA分子 C环状双链RNA分子 D线状双链DNA分子 E线状单链D

8、NA分子 26聚合酶链式反应可表示为： APEC BPER CPDR DBCR EPCR 27在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是： A化学合成法 B基因组文库法 CcDNA文库法 DPCR E差异显示法 28重组DNA的基本构建过程是将： A任意两段DNA接在一起 B外源DNA接入人体DNA C外源基因插入宿主基因 D目的基因接入适当载体 E目的基因接入哺乳类DNA 29EcoR切割DNA双链产生： A平端 B5突出粘端 C3突出粘端 D钝性末端 E配伍末端 30催化PCR的酶是： ADNA连接酶 B反转录酶 C末端转移酶 D碱性磷酸酶 ETaqDNA聚合酶 31将Pst内切酶

9、切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属： A同聚物加尾连接 B人工接头连接 C平端连接 D粘性末端连接 E非粘性末端连接 32重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是： ADNA聚合酶 BRNA聚合酶 CDNA连接酶 DRNA连接酶 E限制性核酸内切酶 33以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称： A转化 B转染 C感染 D转导 E转位 34最常用的筛选转化细菌是否含重组质粒的方法是： A营养互补筛选 B抗药性筛选 C免疫化学筛选 DPCR筛选 E分子杂交筛选 35互补筛选法属于： A抗药性标志筛选 B酶联免疫筛选 C标志补救筛选 D原位杂交筛选 E免疫化学筛选

10、36下列常用于原核表达体系的是： A酵母细胞 B昆虫细胞 C哺乳类细胞 D真菌 E大肠杆菌 37在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时，需采用： A反转录酶 B多聚核苷酸激酶 C引物酶 DRNA聚合酶 E末端转移酶 38在分子生物学领域分子克隆专指： A细胞克隆 BRNA克隆 CDNA克隆 D抗体克隆 EmRNA克隆 39用于重组DNA 的限制性核酸内切酶，识别核苷酸序列的： A正超螺旋结构 B负超螺旋结构 C螺旋结构 D回文结构 E锌指结构 40在基因工程中通常所用的质粒是： A细菌染色体DNA B细菌染色体以外的DNA C病毒染色体DNA D病毒染色体以外DNA E噬菌体DNA 41构建

11、基因组DNA文库时，首先需要分离细胞的： A染色体DNA B线粒体DNA C总mRNA DtRNA ErRNA 42DNA连接酶是从T4 噬菌体感染大肠杆菌中分离的，这种连接酶： A只能催化平末端连接，而不能催化粘性末端连接 B即能催化单链DNA连接又能催化粘性末端双链DNA连接 C双链DNA中不需一条完整的单链 D单链中的切口位点可缺少几个核苷酸E切口存在相邻的5-磷酸和3-羟基末端，使其以磷酸二酯键连接 43末端转移酶是合成酶类： A作用时不需模板 B是从小牛胸腺中分离 C能催化单链核苷酸转移到5-磷酸上 D需要带有5-端磷酸的末端的ssDNA E需要有延伸5-端磷酸的末端dsDNA 44

12、在基因工程中可用碱性磷酸酶： A防止DNA的自身环化 B同多核苷酸激酶一起进行DNA3-羟基末端标记 C制备突出的3-末端 D特异切除DNA或RNA的3-末端羟基 E水解特异的核苷酸片段 45以下哪种酶作用时需要引物： A限制性核酸内切酶 B末端转移酶 C反转录酶 DDNA连接酶 E碱性磷酸酶 46S1核酸酶的功能是： A切割双链的DNA B切割单链的RNA C切割发夹环 D切割单链DNA E以上有两项是正确的 47在cDNA技术中所形成的发夹环可用： A限制性核酸内切酶切除 B用3外切酶切除 C用S1核酸酶切除 D用5外切酶切除 E碱性磷酸酶切除 48下面有关限制性内切酶的叙述正确的是： A

13、限制酶是外切酶而不是内切酶 B限制酶在特异序列（识别位点）对DNA进行切割 C同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 D一些限制酶在识别位点稍有不同的点切割双链DNA，产生粘性末端 E一些限制酶在识别位点相同的位置切割双链DNA，产生平末端 49限制性核酸内切酶可以特异识别： A双链DNA的特定碱基对 B双链DNA的特定碱基序列 C特定的三联码 D双链RNA的特定碱基序列 E双链RNA的特定碱基对 50DNA聚合酶的主要用途： A利用它的35聚合活性，合成ds-DNA第二条链 B对DNA的5-端进行填补或末端标记 C大肠杆菌DNA聚合酶用于缺口平移，制作DNA标志探针 DDNA聚合酶

14、可用于DNA测序 ETaqDNA聚合酶用于PCR 51反转录酶： A是依赖于DNA的RNA聚合酶 B用于真核DNA反转录生成mRNAC用于RNA探针的制备 D用于RNA序列测定 E是依赖于RNA的DNA聚合酶 52基因工程中作为载体应具备以下特点： A能在宿主细胞中复制繁殖 B容易进入宿主细胞 C具有多克隆位点 D容易从宿主细胞中分离出来 E以上均是 53下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大： A质粒 B粘粒 C酵母人工染色体 D噬菌体 EcDNA表达载体 54pUC是一种改造型质粒，含有： A乳糖操纵子调节基因、启动子 B多克隆位点 ClacZ基因 D氨苄青霉素抗性基因 E以上均有 55

15、质粒具有以下特点： A是位于细菌染色体外的RNA B不能自主复制 C为单链环形DNA D大小在2300kb之间 E以上都不对 56粘粒是一种人工建造的载体不具有以下特点： A可借cos位点将多个粘粒串联成大环 B本身约46kb之间 C进入受体细胞后可进行复制 D可克隆DNA大片段 E以上都不是 57下面关于多克隆位点的描述不正确的是： A仅位于质粒载体中 B具有多种限制性内切酶识别的位点 C不同酶的识别序列可以重叠 D一般是人工合成后添加到载体中 E可位于不同载体中 58下列筛选重组体的方法中不属于遗传学方法的是： A限制性内切酶图谱法 BPCR CNorthern印迹法 DSouthern印

16、迹法 E抗药性标记基因 59利用基因工程可以进行： A建立染色体基因文库 B分析基因的结构与功能 C疾病的发生、发展及治疗的分子机制 D疾病的诊断和基因治疗 E以上均可以 60Southern印迹的DNA探针杂交： A只与序列完全相同的RNA片段 B可与任何含有相同序列的DNA片段 C可与任何含有互补序列的DNA片段 D可与用某些限制性核酸内切酶切成的DNA片段 E只与含有互补序列的RNA片段 61下列哪个不是Southern印迹法的步骤： A用限制性核酸内切酶消化DNA BDNA与载体连接 C用凝胶电泳分离DNA片段 DDNA片段转移至硝酸纤维素膜上 E用一个标记的探针与膜杂交 62下列哪个

17、不是Northern印迹法的步骤： A从细胞和组织中提取RNA B用凝胶电泳分离RNA C将RNA转移到支持物上 D与核酸探针进行杂交 E将RNA反转录合成DNA 63原位杂交具有以下特点： A不需从组织或细胞中提取核酸 B对靶序列有很高的灵敏度 C可完整保护组织与细胞的形态 D准确反映出组织细胞的相互关系及功能状态 E以上均是 64下列哪项不是探针的特点： A要加以标记 B应是双链DNA C只与靶核酸序列杂交 D探针长度可以是十几个碱基到几千个碱基不等 E高灵敏度 65探针的种类包括： A基因组DNA探针 BcDNA探针 C寡核苷酸探针 DRNA探针 E以上均是 66下面哪一步不是获得基因组

18、DNA探针的步骤： A从基因组文库筛选得到特定基因 B克隆、扩增 C纯化 D连入表达载体 E切取插入片段 67RNA探针具有以下特点，但除外： A 采用反转录方法可以得到B单链、杂交效率高 C杂交体系稳定 D不存在高度重复序列 E特异性高 68下面哪一步不是cDNA探针的步骤： A从相应组织细胞直接中分离特异的cDNA B从相应组织细胞中分离特异的mRNA C反转录合成cDNA D与载体连接 E切割cDNA，分离纯化 69常用的标记物有，但除外： A放射性核素 B生物素 C荧光素 D地高辛 ENTP 70用于标记核酸探针的放射性核素主要有，但除外： A32P B35S C3H D125I E1

19、4C 71放射性核素标记物具有，但除外： A检测时间短 B灵敏度和特异性高 C可检出样品少于1000个分子的核酸量 D半衰期短，稳定性差 E污染环境 72非放射性核素标记物包括，但除外： A生物素 B地高辛 C荧光素 D酶 E核酸 73非放射性核素标记物具有，但除外： A灵敏度高于放射性核素 B稳定 C经济 D实验周期短 E安全、无污染 74PCR反应体系包括，但除外： A基因组DNA（模板） B引物 CdNTP DTaqDNA聚合酶 ET4DNA连接酶 75PCR技术主要应用于： A目的基因的克隆 B基因表达与调控 CDNA微量分析 D遗传病与传染性疾病的诊断 E以上均可以 76以DNA为模

20、板的PCR反应，具备以下条件： A反应体系一般选用50-100l B引物、TaqDNA聚合酶 C4种dNTP、模板DNA D缓冲液 E以上均是 77以mRNA为模板的PCR反应，具备以下条件： A需将mRNA反转录生成cDNA B反应体系一般选用20l体积、4种dNTP、引物 C需要RNA酶抑制剂、反转录酶 DTaqDNA聚合酶 E以上均是 78关于PCR停滞的原因，取决于很多因素，但除外： A样品模板的拷贝数 BPCR扩增效率 CDNA酶种类及活性 DdNTP的大量消耗E非特异性的竞争因素 79用于核酸分子杂交的探针可以是放射性核素标记的： A核糖体 BRNA C抗体 D抗原 E以上都不是8

21、0Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是： A用RNA探针检测DNA片段 B用RNA探针检测RNA片段 C用DNA探针检测RNA片段 D用RNA探针检测蛋白片段 E用DNA探针检测蛋白片段 81用免疫化学筛选重组体的原理是： A根据外源基因的表达 B根据载体基因的表达 C根据mRNA与DNA的杂交 D根据DNA与DNA的杂交 E根据RNA与RNA的杂交 82原位杂交包括： A转膜杂交 B斑点杂交 C菌落杂交或噬菌斑杂交 D直接对染色体或组织的杂交 E以上均有 83外源性DNA进入菌体的方式是： A转化 B转录 C翻译 D半保留复制 E以上都不是 84要将无

22、粘性末端的两种平端DNA片段结合在一起，可在： A两种片段上都接上聚（dT）尾部 B一种片段接聚（dT）尾部，另一种接聚（dA）尾部 C两种片段都接上聚（dA）尾部 D反应液中加以T4DNA连接酶 E有两项是对的 85用原核生物表达真核生物的基因存在的问题是： A大肠细菌只能表达克隆的cDNA B细菌不能切除原始转录物中相当于内含子的核苷酸序列 C缺乏翻译后加工机制 D表达的蛋白质常形成不溶性包涵体 E以上都正确 86常用载体有： A质粒 B噬菌体 C病毒DNA D大肠杆菌基因组DNA E有3项是正确的 87构建cDNA文库时，首先需分离细胞的： A染色体DNA B线粒体DNA C总mRNA

23、DtRNA ErRNA 88构建DNA文库时，首先需分离细胞的： A染色体DNA B线粒体DNA C总mRNA DtRNA ErRNA 89设计PCR的引物时，应考虑引物与模板的： A5端特定序列互补 B5端任意序列互补 C3端特定序列互补 D3端任意序列互补 E中间序列互补 90用于鉴定转化子细胞是否含重组DNA的最常用方法是： A抗药性选择 B分子杂交选择 CRNA反转录 D免疫学方法 E体外翻译 91下列哪一步是DNA芯片技术的最关键的环节： A样品的准备与标记 B芯片的制备 C信号的检测 D数据分析处理 E杂交 92基因诊断常用的技术方法有： A核酸分子杂交 B单链构象多态性分析 CD

24、NA序列测定 DDNA芯片技术 E以上均是B型题：A基因从原来位置转到基因组的另一位置B噬菌体或病毒DNA进入细胞中繁殖C外来DNA引起细胞生物学特性的改变D移码突变E非移码突变1感染是指： 2转化是指： 3转位是指： 4结构基因中3个核苷酸的插入或丢失是指： 5结构基因中1个核苷酸的插入或丢失是指： A抗药性选择B分子杂交选择CRNA转录D免疫学方法E体外翻译6用于鉴定是否有质粒转入受体菌的一般方法是： 7用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法： 8利用目的基因表达产物的特异抗体来筛选含目的基因的转化子细胞的方法是：A限制性核酸内切酶BDNA连接酶C反转录酶DTaqDNA聚合酶E碱性磷酸

25、酶9识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：10用于聚合酶链式反应的是：11将目的基因与载体DNA进行连接的酶是： 12特异切除DNA或RNA5端磷酸的酶是： 13mRNA转录合成cDNA的酶是： A支原体B衣原体C噬菌体D细菌E酵母14常用作原核表达体系的是：15常用作真核表达体系的是：A基因组文库BcDNA文库CmRNA文库DtRNA文库ErRNA文库16分离细胞染色体可制备： 17分离细胞总mRNA可制备：A抗药性选择BRNA反转录C免疫化学方法D体外翻译EPCR18对重组体内基因进行直接选择的方法是： 19通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是：ARNA聚合酶B末端转移酶C碱性磷酸酶

26、D反转录酶E核苷酸酶20切除DNA末端磷酸基需要用： 21在DNA3羟基末端进行同聚物加尾需要用： 22合成cDNA需要用：A同聚物加尾连接B人工接头C粘性末端连接D缺口末端连接E平端连接23外源基因和载体DNA经限制性酶切后的连接属于： 24在外源基因和载体DNA末端添加同聚物序列后再进行连接属于： 25在外源基因和载体DNA末端添加短核苷酸序列，人为制造粘性末端再进行连接属于：26需用适当的酶将DNA突出末端削平或补齐的连接属于： A将单链DNA任意切断B将双链DNA序列特异切开C将两个DNA分子连接起来D将缺口末端连接E切除DNA末端磷酸基团27限制性内切酶的作用是： 28DNA连接酶作

27、用是： 29碱性磷酸酶作用是： A某些蛋白质的结构基因B所有基因结构C不表达的调控区D内含子和调节区E外显子和调节区30cDNA文库包括： 31DNA文库包括： 32真核mRNA包括：ADNA聚合酶 BRNA聚合酶 CDNA连接酶 DRNA连接酶 E限制性核酸内切酶33切除特异DNA片段： 34连接两个DNA片段： 35大量扩增DNA片段： A反转录酶 B多聚核苷酸激酶 C引物酶 DRNA聚合酶 E末端转移酶36催化ATP的磷酸转移到DNA或RNA的5端羟基上： 37催化单核苷酸转移到DNA的3端羟基上： 38合成cDNA： （三）问答题1 简述基因工程的主要过程。2 什么是载体？可分为几类？

28、它们各有什么特点？3 pUC质粒有何特点？4 采用哪些方法可获取目的基因？5 目的基因与载体的连接有哪几种方法？简述其各特点？6 重组体主要有哪些筛选与鉴定方法？7 分子杂交的基本原理是什么？有哪些基本的方法？8 简述标记核酸的核素和非核素有哪几种？各自有何特点？9 何为PCR？简述其基本原理。10DNA芯片技术的基本原理及其应用。参考答案（一）名词解释1不同来源的DNA分子可以通过末端共价连接(磷酸二酯键)而形成重新组合的DNA分子，这一过程称为DNA重组。2利用重组DNA技术将目的DNA片段与载体DNA连接并导人宿主细胞，在受体细胞中复制、扩增、以获得单一DNA分子的大量拷贝。这种含有单一

29、DNA重组体的无性系称为克隆。其中，将基因进行克隆，并利用克隆的基因表达、制备特定的蛋白或多肽产物，或定向改造细胞乃至生物个体的特性所用的方法及相关的工作统称为基因工程。3能够切割DNA多聚核苷酸链中磷酸二酯键的酶称为核酸酶，其中有选择地切割DNA分子特异序列的核酸酶，称为限制性核酸内切酶，简称限制性酶。4 采用限制性酶将基因组DNA切成片段，每一DNA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体称为基因文库。5mRNA为模板，经反转录酶催化合成cDNA ，将cDNA的混合体与载体进行连接，使每一个cDNA分子都与一

30、个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体就称为cDNA文库。6PCR又称基因体外扩增特定序列方法。是在反应体系中加入模板DNA、dNTP、特定设计的引物及耐热的DNA聚合酶，经多次变性、退火、延伸循环反应，使目的DNA呈指数形式合成的过程。7是携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子。常用克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA、粘粒DNA、病毒DNA等。8指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。转化常用的宿主细胞是大肠杆菌。9以噬菌体进入宿主菌、病毒进入宿主细胞中繁殖称为感染

31、。用人工改造的噬菌体或病毒作为载体以其DNA与目的序列重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳，将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以感染的方式进入宿主细菌或细胞。10核酸分子杂交是依据两条核酸单链之间碱基互补、变性和复性的原理，用已知碱基序列的单链核苷酸片段作为探针，检测待测样品中是否存在与其互补的同源核苷酸序列的方法。11指DNA与DNA的杂交，将经限制性内切酶消化和变性后电泳分离的待测DNA片段转印并结合到一定的固相支持物上，然后与标记的DNA探针杂交。12指将待测RNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上，然后与标记的核酸探针进行杂交，检测RNA(主要是mRNA)的方法。其基本原理和基

32、本过程与Southern印迹杂交基本相同。13将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再与探针杂交，称为斑点印迹杂交。14核酸保持在细胞或组织切片中，经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。原位杂交不需要从组织或细胞中提取核酸，对组织中含量极低的靶序列有很高的灵敏度，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。15DNA芯片技术是指将大量已知寡核苷酸或DNA探针按特定的排列方式固化在固相支持物表面，按碱基互补配对的原则，与标记的特异的单链DNA或RNA分子杂交形成双链，通过对杂交信号的检测分析，即

33、可得出样品分子的数量和序列信息。16是以DNA和RNA为诊断材料，DNA反映基因的存在状态，RNA反映基因的表达状态，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。17基因治疗是指以正常基因矫正、替代缺陷基因，或从基因水平调控细胞中缺陷基因的表达的一种治疗疾病的方法。狭义的基因治疗是指目的基因导入靶细胞后与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿主基因组的一部分，目的基因的表达产物起治疗疾病的目的。而广义的基因治疗则包括通过基因转移技术或反义核酸技术、核酶技术等，使目的基因得到表达、或封闭、剪切致病基因的mRNA，而达到治疗疾病的目的。（二）选择题A型题：1. D 2. B

34、 3. A 4. B 5. C 6. A 7. C 8. C 9. B 10. C 11. C 12. A 13. C 14. E 15. B 16. D 17. A 18. E 19. E 20. D 21. B 22. A 23. B 24. C 25. A 26. E 27. D 28. D 29. B 30. E 31. D 32. C 33. A 34. B 35. C 36. E 37. B 38. C 39. D 40. B 41. A 42. E 43. B 44. A 45. C 46. E 47. C 48. B 49. B 50. E 51. E 52. E 53. C

35、54. E 55. D 56. E 57. A 58. E 59. E 60. C 61. B 62. E 63. E 64. B 65. E 66. D 67. A 68. A 69. E 70. E 71. A 72. E 73. A 74. E 75. E 76. E 77. E 78. D 79. B 80. B 81. A 82. E 83. A 84. E 85. E 86. E 87. E 88. C 89. A 90. C91. A 92. E B型题：1. B 2. C 3. A 4. E 5. D 6. A 7. B 8. D 9. A 10. D 11. B 12. E

36、13. C 14. D 15. E 16. A 17. B 18. A 19. C 20. C 21. B 22. D 23. C 24. A 25. B 26. E 27. B 28. C 29. E 30. A 31. B 32. A 33. E 34. C 35. A 36. B 37. E 38. A （三）问答题1（1）目的基因的获取：通过化学合成或PCR的方法获取，也可从基因组DNA文库或cDNA文库筛选。（2）克隆载体的选择与构建：常用载体有质粒、噬菌体、病毒DNA。（3）目的基因与载体的连接：利用DNA连接酶将目的基因与载体DNA进行共价连接形成重组DNA分子。（4）重组DNA

37、分子导入受体细胞：目的基因与载体连接成重组DNA分子后，需将其导入受体菌，随受体菌生长、繁殖，重组DNA分子也复制、扩增。导入的方法有转化和感染等。（5）重组体的筛选：筛选出含重组DNA的受体菌，常用筛选方法有遗传学方法如抗药性标志选择、分子杂交和免疫化学方法。（6）克隆基因的表达：包括原核表达和真核表达两种体系。可以生成有药用价值的蛋白质或多肽。2载体是为携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子。常用克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA、粘粒DNA、病毒DNA等。（1）质粒 质粒是细菌中存在的独立于染色质以外的、能自主复制的、并与细菌或细胞共存的遗传成分。多为双链共价闭合环形D

38、NA，可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2300kb之间，15 kb的大小质粒比较容易分离纯化，15 kb的大质粒则不易提取。（2）噬菌体 噬菌体是感染细菌的一类病毒。因为它寄生在细菌中并能溶解细菌细胞，所以称为噬菌体。有的噬菌体基因组较大，如噬菌体和T噬菌体，有的则较小，如M13、f1、fd噬菌体等。噬菌体由头和尾构成，其基因组是一条长约50kb的线性双链DNA分子，组装在头部蛋白质外壳内部。噬菌体感染时，通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌，而将其蛋白质外壳留在菌外。DNA进入大肠杆菌后以其两端各有12个碱基互补的单链末端（cos末端）环化成环状双链，可以两种不同的方式繁殖：溶菌性方式：溶

39、菌性噬菌体感染细菌后，连续增殖，直到细菌裂解，释放出的噬菌体又可感染其它细菌；溶原性方式：溶原性噬菌体感染细菌后，可将自身的DNA整合到细菌的染色体中去，和细菌的染色体一起复制。（3）粘粒 粘粒（cosmid）是将噬菌体的cos区与质粒组合的装配型载体。质粒提供了复制的起始点、酶切位点、抗生素抗性基因，而cos区提供了粘粒重组外源DNA大片段后的包装基础。粘粒本身约46kb，但可借cos区位点将多个粘粒串联成为一个长链或大环，真核基因2945kb的大片段插入两个相邻粘粒的限制酶切位点，借噬菌体的包装系统对两个cos位点之间的DNA片段进行体外包装。体外包装好的颗粒感染宿主菌后，能像噬菌体一样环

40、化、复制。由于粘粒可克隆DNA大片段，可用作建立真核基因组文库的载体。（4）病毒 质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组的需要。感染人或哺乳动物的病毒，可改造用作动物细胞的载体。所以病毒载体更多地用于真核表达系统，如腺病毒、痘病毒、反转录病毒和猴空泡病毒。3（1）pBR322的氨苄青霉素抗性基因和复制起始位点(ori)。（2）大肠杆菌乳糖操纵子的调节基因（laci）、启动子（Plac）、操纵基因（O）及lacZ基因片段，在lacZ基因中加入了多克隆位点。lacZ基因编码-半乳糖苷酶N端的-肽，宿主细胞编码-半乳糖苷酶C端的肽段，两者可形成互补，而各自都没有酶的活性，只有两者融

41、为一体才具有酶的活性，故称为互补。4（1）基因组DNA文库 采用限制性酶将基因组DNA切成片段，每一DNA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体称为基因文库。完成DNA重组后可通过杂交筛选获得特定的基因片段。（2）制备cDNA文库 以mRNA为模板，经逆转录酶催化合成cDNA ，将cDNA的混合体与载体进行连接，使每一个cDNA分子都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体就称为cDNA文库。完成DNA重组后可通过杂交筛选获得特定的cDNA克隆。（3）聚合酶链式反应（PCR） 如果已经知道目的基因的序列，可以用PCR从基因组DNA中获得目的基因，也可以采用逆转录PCR（RT-PCR）方法直接从mRNA获得特定基因的cDNA。（4）化学合成 如果知道肽链的氨基酸顺序，则可按照对应的密码子推导出DNA的碱基序列，然后用化学方法将这段序列合成出来。目前使用DNA合成仪合成的片段长度有限，较长的链则须分段合成，然后用连接酶进行连接。5主要有以下四种。（1）粘性末端连接 用同一种限制性内切酶切开载体和目